草莓6种病毒多重PCR快速检测方法的建立

为快速鉴定草莓病毒病种类以预防病毒病扩散,根据草莓镶脉病毒(strawberry vein banding virus,SVBV)、草莓斑驳病毒(strawberry mottle virus,SMoV)、草莓轻型黄边病毒(strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)、草莓白化病毒(strawberry pallidosis-associated virus,SPaV)、草莓病毒1(strawberry virus 1,StrV-1)和芸薹黄化病毒(brassica yellows virus,BrYV)的基因保守区域设计特异性引物,建立了能够同时检测这6种病毒的多重PCR方法。该多重PCR反应体系中,2×SanTaq PCR Master Mix用量为10 μL,上下游引物(10 μmol/L)用量为4 μL,其中SVBV为0.25 μL、SMoV为0.50 μL、SMYEV为0.10 μL、SPaV为0.15 μL、StrV-1为0.50 μL和BrYV为0.50 μL,模板1 μL,ddH₂O为5 μL,总体积20 μL。多重PCR反应程序设定为:94 ℃预变性5 min,94 ℃变性30 s,53 ℃退火30 s,72 ℃延伸120 s,最后72 ℃延伸10 min,循环数为35。该检测体系的灵敏度可以达到10⁷ copies/μL。该多重PCR方法可以同时实现6种草莓病毒的高效快速检测,为草莓病毒病的早期发现和针对性防治提供了技术支持。     

草莓种子实生苗的病毒分子检测

草莓易感染病毒,从而导致产量减少和品质下降。目前生产上主要采用茎尖组织培养脱毒的方法,并不能保证完全脱除病毒,还需要进行无病毒检测鉴定。因此,需进一步探索简便、高效、免检的脱毒体系。利用RT-PCR技术,以草莓肌动蛋白基因序列为内标,结合4种草莓病毒特异性扩增,验证了草莓种子实生苗不携带病毒。旨在助推种子繁殖型草莓品种的应用。     

三种草莓病毒的多重RT-PCR检测方法

目前,草莓主要有3种病毒侵染,本研究通过改进CTAB法对经过茎尖剥离的组培四季草莓叶片提取总核酸,采用多重RT-PCR技术同时检测草莓斑驳病毒、草莓轻型黄边病毒和草莓镶脉病毒。电泳结果显示提取的总核酸中可见总DNA条带和完整的RNA条带,并采用两步法RT-PCR获得了目的条带。本研究建立了多重RT-PCR同时检测草莓病毒的技术体系。     

草莓病毒种类鉴定及培育无病毒种苗的技术研究

 本文采用指示植物小叶嫁接法鉴定，明确了我国草莓主要栽培区的病毒种类及其分布状况，提出了草莓病毒的鉴定和检测方法。利用草莓花药培养培育成12个品种的无病毒母株，建立了适合于我国情况的无病毒种苗生产体系。隔离繁育的无病毒种苗，在17省（市）栽培取得了无病毒草莓增产7.8-45.1%的效果。     

大棚草莓灰霉病的症状识别与防治

灰霉病是冬春季设施草莓生产上的首要病害,该病主要发生在草莓扣棚以后,导致草莓产区灰霉病发生整体情况偏重。棚室草莓发生灰霉病,病菌可以危害花器、果实、茎、叶柄和叶片,应注意提早加以预防。     

草莓镶脉病毒研究进展

就草莓镶脉病毒的主要特性、病毒检测方法及控制方法等方面的研究进展作以综述。病毒检测方法主要有指示植物小叶嫁接法、血清学检测法和分子生物学检测法;目前草莓病毒病的控制方法主要有培育无毒苗、选育抗病毒品种等。     

叶片保存方法对RT-PCR检测草莓轻型黄边病毒的影响

【目的】探究通过RT-PCR检测草莓轻型黄边病毒最好的叶片保存方法。【方法】经自然风干法、硅胶干燥法以及氧化钙干燥法保存后,采用RNA小量提取试剂盒法提取被病毒侵染草莓叶片总RNA,利用Thermo NanoDrop 2000测定核酸质量浓度和质量并使用RT-PCR方法对SMYEV进行检测。【结果】经氧化钙干燥保存后可提取高质量的RNA,30 d后仍可通过RT-PCR获得扩增产物。【结论】氧化钙干燥保存效果最好,操作简单,成本低,可广泛应用于大量草莓叶片样本的长距离运输,提高草莓病毒检测效率,为草莓无毒栽培提供保障。     

脱病毒草莓基本知识

（一）什么是草莓脱毒苗？ 草莓脱毒苗就是彻底去除了草莓体内的全部有害病毒的优质种苗。众所周知。草莓和其他无性繁殖作物（马铃薯、山芋、大蒜）一样是靠营养体（子苗）来繁殖种苗的。自然界有几百种病毒对作物有害．这些病毒主要是通过被昆虫（蚜虫、红蜘蛛，椿象等）咬嚼的伤口侵入植物体内．并蔓延全株的根、茎、叶、花各种组织中。随着无性繁殖世代的延续而逐年加重。目前已发现有12种病毒对草莓生产造成影响，其中草莓斑驳病毒、草莓黄边病毒、草莓镶脉病毒和草莓皱缩病毒4种病毒危害较大。感染了病毒病的草莓果实一年比一年小，畸形，品质差，叶子皱缩，生长缓慢，并逐年加重。对病毒病目前还没有药剂可以防治。近几年各地先后从美国、日本引进大果型优良品种，在生产上种植2～3年后产量明显下降，草莓果子变小．产量越来越低，其原因就是病毒病造成的。     

草莓病毒的检测——小叶嫁接法

草莓是多年生草本植物,生产上为无性繁殖,经多年栽培后,很容易感染多种病毒,致使种性严重退化,产量降低,品质变劣,抗病性减弱等.一般减产30%～80%,并逐年加重,给草莓生产带来重大损失.目前,还没有可以有效防治的药剂,惟一的出路就是脱去植株中的病毒.但是,草莓经脱毒处理后需要经过检测、验证确实不带有病毒后,才能定为无病毒原种母株,然后以此繁育无病毒苗,实现草莓的脱毒化栽培.     

大棚草莓常见病虫害发生症状及防治方法

介绍了大棚草莓常见病虫害(草莓炭疽病、白粉病、灰霉病、根腐病、红蜘蛛、蚜虫等)的发生症状,并提出了其防治方法,以期为果农提供参考。     

草莓斑驳病毒的分子杂交检测

为探索分子杂交技术在草莓斑驳病毒(Strawberry mottle virus,SMoV)检测中的运用,利用CTAB法从草莓叶片中提取总核酸,并以此为模板,利用特异引物扩增SMoV非编码区序列,经克隆、测序获得SMoV非编码区序列。系统进化分析结果显示:本研究中的分离物与GenBank中已报道的分离物的亲缘关系较远,独立形成1个小的进化支。以带有病毒特异片段的质粒为模板,运用PCR技术制备了地高辛标记的cDNA探针。以草莓感染SMoV叶片为试材,利用地高辛标记探针可有效检测草莓叶片中的SMoV,草莓总核酸样品稀释10倍后仍可有效检测。     

上海地区四种草莓病毒的检测分析

草莓病毒病常常会给草莓生产造成严重危害,主要表现为开花结果异常、品质劣化、产量下降,果实商品性降低等.为了明确上海地区草莓病毒病的分布和为害情况,对来自上海金山、奉贤、浦东3个草莓产区抽样采集的137份疑似病毒感染样品,采用RT-PCR技术进行分子检测分析并测序.结果表明:137份抽检样品中有88份检出病毒,总检出率达...     

草莓镶脉病毒粒子提取及电镜观察

从受感染的草莓(Fragaria sp)植株中提取了草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)粒子并对其进行了电镜观察.用CTAB法从草莓叶片中提取总核酸,设计SVBV外壳蛋白基因特异性引物,利用PCR方法对杭州地区的草莓镶脉病毒感染情况进行检测.检测结果表明,在杭州地区大田种植的草莓中存在SVBV感染现象.从4株受感染草莓植株中分离克隆了SVBV的CP基因片段并测序;序列比较分析发现它们与已报道的美国SVBV分离物的CP基因(序列号NC_001725)核苷酸同源性为91％.利用差速离心法从上述草莓植株的叶片中提纯SVBV病毒,在透射电镜下观察到SVBV病毒粒子呈球形,直径约为40～55 nm.     

利用内标为基础的多重RT-PCR技术检测草莓斑驳病毒和草莓轻型黄边病毒

草莓斑驳病毒(SMoV)和草莓轻型黄边病毒(SMYEV)分布较广,危害较重。应用CTAB法提取草莓总RNA,以优质的草莓总RNA为模板,结合扩增内标的检测体系,建立了SMoV和SMYEV的多重RT-PCR检测体系,可以对草莓田间植株和试管苗进行快速稳定的病毒检测。     

草莓伪温和黄边病毒抗血清制备及血清学检测技术研究

将提纯的草莓伪温和黄边病毒（ＳｔｒａｗｂｅｒｒｙｐｓｅｕｄｏｍｉｌｄｙｅｌｌｏｗｅｄｇｅｖｉｒｕｓＳＰＭＹＥＶ）作抗原免疫家兔，获得效价较高的抗血清，经ＳＤＳ－对流免疫电泳测其效价为１：１２８．四点疫吸附固定法检测ＳＰＭＹＥＶ效果甚理想，可检测到微量病素，提纯病毒浓度低至０．０５μｇ／ｍｌ仍有效果．酶联免疫吸附测定法检出灵敏度也相当高，当病毒浓度为０．１μｇ／ｍｌ时及病叶汁液稀释至１０２４倍时，仍呈阳性反应．免疫电镜技术检视，ＳＰＭＹＥＶ抗血清能清晰地”捕获”同源病毒，并且有装饰作用，抗血清以稀释为１：５００时“捕获”病毒粒子最多．     

草莓脱病毒技术

本介绍了草莓病毒病的危害、我国草莓病毒病的主要种类和3种主要草莓脱病毒技术。     

结合内标的RT-PCR技术检测草莓轻型黄边病毒(SMYEV)

草莓(Fragaria ananassaDuch)是蔷薇科(Ro-saceae)草莓属(Fragaria)多年生草本植物.在长期的生产过程中,草莓同其他无性繁殖植物一样,易感染病毒,从而造成草莓品种的种性退化.     

草莓主要病害的识别与防治

<正> 1 草霉灰霉病 早期可感染叶柄、叶片、花蕾、花朵和果梗,以浆果成熟期症状最明显。叶片受侵染后,开始出现不明显的褐色湿润斑点,果实发病初期,病斑为褐色油渍状小斑点,果肉组织变软,失去香味和色泽,使整个果实腐烂。果实表面形成一层灰色绒状的分生孢子梗和分生孢子。