番茄枯萎病菌基因组微卫星位点分析与引物设计

通过对前期测定的番茄枯萎病菌Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆ．ｓｐ．ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃ基因组１４５０１条ｇｅｎｅ序列进行搜索,发现４６６个简单重复序列（Ｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ,ＳＳＲ）分布在４２５条ｕｎｉｇｅｎｅｓ中,发生频率为２.９３％．在番茄枯萎病基因组的ＳＳＲ中,三核苷酸重复占主导地位,占ＳＳＲ总数的６５.８８％．优势重复单元为ＡＧＣ／ＣＴＧ和ＡＡＧ／ＣＴＴ,分别占１６.５２％和１２.６６％．基于筛选的ＳＳＲｓ,运用Ｐｒｉｍｅｒ３软件进行引物的批量设计,共设计出４５１对引物．结果说明番茄枯萎病菌基因组中含有丰富的ＳＳＲ位点．     

RAPD标记检测蔬菜种子纯度中DNA提取方法研究

对ＤＮＡ提取方法的ＳＤＳ法进行改进的研究结果表明：改进了的ＳＤＳ法操作简便,操作过程可在１小时内完成,适于番茄,辣椒,黄瓜等蔬菜作物的基因组ＤＮＡ提取,且宜于在种子纯度检测的ＲＡＰＤ分析中应用。     

植物抗病基因结构特征及其类似序列的研究进展

植物抗病基因的克隆一直为植物遗传学家和病理学家所关注。克隆的抗病基因在氨基酸水平上表现出一定程度的相似性, 在一些区段高度保守, 如 Ｎ Ｂ Ｓ、 Ｌ Ｒ Ｒ、激酶、 Ｌ Ｚ等。这些保守序列, 不仅有助于对抗病基因的分类及其作用机理的理解, 而且为抗病基因克隆提供了一条新途径。根据这些保守序列合成 Ｐ Ｃ Ｒ 引物, 在许多植物中已扩增出大量的抗病基因类似序列 （ Ｒ Ｇ Ａ）。遗传作图表明 Ｒ Ｇ Ａ 与抗病性密切相关。对 Ｒ Ｇ Ａ 与 Ｒ 基因的关系及 Ｒ Ｇ Ａ 的基因组分布一并进行了讨论。     

不同年份采收的豇豆种子的RAPD研究

ＲＡＰＤ是一种建立在ＰＣＲ基础之上的新的分子标记技术,利用ＲＡＰＤ技术对不同年份采收的豇豆种子进行了研究从豇豆干种子中直接提取的基因组ＤＮＡ可以用于ＲＡＰＤ分析在２０种１０ｂｐ随机引物中筛选出Ｓ２０７和Ｓ２０８２种引物,并获得了豇豆基因组ＤＮＡ的指纹图谱筛选出的２种引物均只在１９９７年采收的豇豆种子的基因组ＤＮＡ上扩增出１条ＤＮＡ带研究结果表明,不同年份采收的豇豆种子在遗传性上相当一致,而豇豆种子的基因组ＤＮＡ在贮藏过程中会受到损伤     

抗菌肽Shiva A基因导入杂交水稻恢复系明恢63的初步研究

利用农杆菌介导法将抗菌肽Ｓｈｉｖａ Ａ 基因导入杂交水稻恢复系明恢６３ 成熟胚诱导的愈伤组织中，并再生植株。经ＰＣＲ检测分析证明Ｓｈｉｖａ Ａ 基因已整合到再生植株的基因组中。     

RAPD标记在高粱基因组分析中的应用

本实验研究了ＲＡＰＤ标记在高粱基因组分析中的可用性。Ｍｇ＾２＋,酶及引物浓度是优化ＰＣＲ反应的重要参数。经２２个引物对高粱品系,ＩＳ３６２０ｃ和ＢＴＸ６２３及其杂交Ｆ８的１２０株后代个体的ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增,在获得的５５个ＲＡＰＤ标记中,有４２个标记定位于已存在的ＲＦＬＰ高粱遗传图谱中,实验结果表明,ＲＡＰＤ标记可以稳定遗传。     

板栗基因组DNA几种提取方法比较研究

通过对板栗基因组ＤＮＡ几种提取方法获得的ＤＮＡ质量分析,表明改良ＳＤＳ法是最为理想的提取方法,能满足ＲＡＰＤ及其他分子生物学研究的需要。     

几种茄属植物基因组DNA提取与RAPD分析

研究了适于茄子及其近缘野生种基因组ＤＮＡ的提取方法，并对ＤＮＡ初步进行了ＲＡＰＤ分析。结果表明：ＳＤＳ－氯仿－异戊醇法不适于茄属植物ＤＮＡ提纯，而改进的ＣＴＡＢ－酚－氯仿－异戊醇对其成株叶／芽即可获得较高产率及纯度的ＤＮＡ；ＰＣＲ反应扩增出不同片段，引物ＯＰＧ—１１扩增片段在栽培品种与野茄中无差异，而在红茄与龙葵中呈现出一定的多态性。     

甘蔗宿根矮化病菌 ＰＣＲ检测体系的优化与应用

为建立能快速灵敏检测甘蔗宿根矮化病 （ｒａｔｏｏｎｓｔｕｎｉｎｇｄｉｓｅａｓｅ,ＲＳＤ）的 ＰＣＲ检测方法。本文通过改进模板 ＤＮＡ的制备方法,在 ＰＣＲ基本程序的基础上,以甘蔗宿根矮化病菌 （Ｌｅｉｆｓｏｎｉａｘｙｌｉｓｕｂｓｐ．ｘｙｌｉ,Ｌｘｘ）１６Ｓ-２３ＳｒＤＮＡ基因间隔区特异性引物,调整 ＰＣＲ扩增反应体系各组分的浓度、反应的退火温度、循环参数等主要因子,优化 ＰＣＲ反应体系。此检测体系能从感染 ＲＳＤ的样品中扩增出大小为４３８ｂｐ的特异性片段,而阴性对照和未感染样品则未扩增出任何片断;未优化仅从稀释３０倍的蔗汁总 ＤＮＡ中扩增出 ＲＳＤ的特异性片段,优化后可以从稀释３０００倍的蔗汁总 ＤＮＡ中扩增出 ＲＳＤ的特异性片段。对３１份田间采集样品检测,未优化的阳性检出率为 ３２.２６％;优化后阳性检出率 ７４.１９％,与 Ｉ-ＥＬＩＳＡ检测结果一致。应用此检测方法可稳定、快速地检测出蔗株是否感染 ＲＳＤ,且检测效率高,适合于田间大批量样品快速检测。     

RAPD技术在粤星番茄种子纯度检测中的初步研究

应用２０个随机引物对华南地区番茄主栽品种之一－粤星及其亲本的基因组ＤＮＡ进行了ＲＡＤ分析，发现７个引物可以在粤星及其亲本的ＲＡＰＤ图谱中形成多态性差异，其中引物Ｐ１８可应用于粤星番茄种子中混杂的母本类假杂种的检测。     

鸡传染性支气管炎腺胃病变型分离株H_(95)免疫原基因的克隆与鉴定

用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），从纯化的腺胃病变型鸡传染性支气管炎分离株病毒基因组ＲＮＡ扩增出约１．７ｋｂ的ＩＢＶＳ１基因。将该扩增产物于ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨⅠ位点克隆到ｐＵＣ１８质粒载体中，对重组质粒载体进行酶切分析，得到与Ｓ１基因预期大小一致的插入片断。经Ｓ１探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测，表明插入片断为Ｓ１基因。利用该法筛选到４株阳性重组质粒转化子。     

异源2号和绵阳26号小麦在分子水平上的差异性

应用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＡＰＡＧＥ）、基因组原位杂交和ＲＦＬＰ标记研究了异源２号和绵阳２６号在醇溶蛋白和ＤＮＡ水平上的差异性。ＡＰＡＧＥ分析表明,异源２号和绵阳２６号至少有９条醇溶蛋白差异带,且异源２号含有小麦背景中１ＲＳ的醇溶蛋白标记位点Ｇ１ｄ１Ｂ３。基因组原位杂交结果证实异源２号含有黑麦的１ＲＳ,而绵阳２６号则不含黑麦染色质,ＲＦＬＰ分析结果进一步表明,位于第１同源群的短臂ＲＦＬＰ探针均能     

褐飞虱不同生物型基因组DNA的RAPD分析

试验了两种ＤＮＡ提取方法抽提褐飞虱基因组ＤＮＡ的效果及其用所获得的ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ扩增的技术条件,结果发现,采用蚜虫ＤＮＡ的提取方法（略有改进）来抽提高飞虱基因组ＤＮＡ,并用Ｓ系列的随机引物、ＲＡＰＤ的通用反应体系及９４℃变性,３６℃退火和７２℃延伸的扩增条件来对其进行随机扩增,可获得满意的效果,不同致害类群的群体间和同一致富类群的个体间的ＲＡＰＤ多态性均有差异,单雌纯化只能将个体间的差异缩小,     

一种适合枣合酸枣基因组DNA的提取方法

研究比较了ＣＴＡＢ法和ＳＤＳ法在枣和酸枣基因组ＤＮＡ提取中的效果，并分析了取样时间、部位、样品状况、抗氧化剂和不同纯化处理等对所提ＤＮＡ质和量及其ＲＡＰＤ扩增效果的影响。结果表明：用改良后的ＣＴＡＢ法优于ＳＤＳ法，可有效地去除多糖，所提ＤＮＡ的质和量均能满足ＰＣＲ扩增要求。取样时间与部位对所提基因组ＤＮＡ的质量无影响，但与产量有关，以旺盛生长期的幼叶或嫩梢尖为佳。样品采用液氧处理－７０℃低温保存，     

应用RT-PCR和RFLP分析肾型鸡传染性支气管炎病毒基因型

对来自浙江省３个不同地区的肾型鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ－ＪＤ,ＤＱ,ＨＹ）和参考株Ｈ１２０,通过蛋白酶Ｋ－ＳＤＳ处理、酚－氯仿法抽提基因组ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增得到了预期为１．７２ｋｂ的Ｓ１蛋白基因ｃＤＮＡ,用限制性内切酶ＨａｅⅢ,ＰｓｔＩ,Ｋｓｐ６３２１对Ｓ１基因ｃＤＮＡ进行ＲＦＬＰ分析。结果表明ＪＤ,ＤＱ,ＨＹ毒株的ＲＦＬＰ带型相同,但与经典的肾型ＩＢＶ代表株（即Ｔ株、Ｇｒａｙ株、Ｈｏ     

甜瓜抗CMV转基因植株的分子生物学研究

本研究建立了转目的基因植物基因整台及表达的分子生物学鉴定系统，并用报告基因检测、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ、ＰＣＲ特异扩增、Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ等方法，研究了用叶盘法经Ｔｉ质粒转化的甜瓜再生植株ＣＭＶ－ＣＰ基因的整合与表达。结果表明：再生植株基因组中整合了ＣＭＶ－ＣＰ基因，长度为１ｋｂ，并能有效表达。表达产物分子量为２４Ｋｄ，确为ＣＭＶ的外壳蛋白，其表达量占细胞总蛋白约５％。     

十字花科蔬菜根肿病菌的PCR快速检测

利用设计合成的根肿病菌 (Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａｂｒａｓｓｉｃａｅ)特异性寡聚核苷酸引物Ｄ85 81 9Ｆｗ/Ｄ85 81 9Ｒｖ,根据本研究组成员对十字花科蔬菜根肿病菌核糖体基因ＩＴＳ区段克隆测序结果 (未发表 )而设计的引物ＩＴＳＦｗ/ＩＴＳＲｖ和真菌核糖体基因ＩＴＳ区段通用引物ＩＴＳ1 /ＩＴＳ4,对分离自十字花科作物(白菜、青菜、甘蓝、芥蓝、花椰菜等 )根肿病菌全基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ(ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ)特异性扩增试验。试验结果表明 ,这 3对引物均能从十字花科根肿病菌全基因组ＤＮＡ中扩增…     

变量施肥智能空间决策支持系统VRF—ISDSS：地理信息系统ArcView GIS在精细

介绍一个具有数据库、知识库、方法库与模型库,用于精细农业中变量施肥的决策支持系统ＶＲＦ－ＩＳＤＳＳ。系统包括农业区的基础地理信息、作物生产知识、作物生长养分需求的数学模型和分析方法,系统利用知识库的知识对决策方案进行调节和优化,实现了智能决策。系统是在ＡｒｃＶｉｅｗ ＧＩＳ地理信息系统平台上进行二次开发而成的,能够处理与分析作物生长环境参数的空间分布和作物产量的空间分布和作物产量的空间分布等信息,并能够生成相应的分布图和变量施肥处方图。能够进行精细农业变量施肥的智能决策与空间决策,使得本系统不同于传统的农业决策支持系统以及单纯的农业地理信息系统。ＶＲＦ－ＩＳＤＳＳ还具有信息服务与科学计算等功能。     

鸡传染性支气管炎病毒地方-分离株S1基因克隆和基因型鉴定

利用ＩＢＶ全长Ｓ１基因特异性引物,以纯化的３个标准株Ｍ４１、Ｈ５２、Ｔ和６个地方分离株（ＱＤ、ＺＺ、ＧＺ、ＧＪ、ＤＬ和ＹＣ）的基因组ＲＮＡ为模板,用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出预期大小约１．７３ｋｂｃＤＮＡ片段,经ＢＡＭＨＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切插入到质粒ｐＵＣ１８中,并在大肠杆菌ＪＭ８３中实现了克隆。对６个分离株的Ｓ１基因ＰＣＲ产物进行ＨａｅⅢＲＦＬＰ分析,表明ＱＤ、ＴＪ属于Ｍ４１基因型,ＺＺ和ＧＺ与Ｔ基因     

猪的21—羟化酶基因位点限制性片段长度多态性研究

采用纯种大约克和纯种二花脸猪血样提取基因组ＤＮＡ，分别用１１种限制必内切酶消化，以非放射性狄高辛试剂盒标记４．８ｋｂ２１－羟化酶（ＣＹＰ２１）基因方为探针，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交对猪的ＣＹＰ２１基因位点的限制性片长度多态性（ＲＦＬＰＳ）进行了研究。结果在ＢａｎＩ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎⅠ、ＰｓｔⅠ和ＴａｑⅠ５种限制性内切酶位点检测出了ＰＦＬＰＳ，且ＢａｎⅠ和ＫｐｎⅠ酶切位点的多态性为首次发现；而在其他