苹果PAPD反应体系的研究

对苹果基因组ＤＮＡ的ＲＡＰＤ扩增体系各参数进行筛选比较,建立的最佳反应体系为：模板ＤＮＡ １．０ｍｇ／Ｌ,引物１．５ｍｇ／Ｌ,ＴａｑＤＮＡ聚合酶０．１ｎｏｌ／Ｌ（Ｌ．ｎｉｎ）,Ｍｇ＾２＋２．５ｍｍｏｌ／Ｌ,ｄＮＴＰｓ０．４ｍｍｏｌ／Ｌ。     

菊属植物RAPD反应体系的建立

在ＲＡＰＤ反应中，有许多因素影响结果的稳定性和准确性．该文选取了菊属６种植物，对ＲＡＰＤ各种反应条件进行了摸索．结果表明：菊属植物较为理想的反应体系为：２０μｌ反应体积含１０ｍｍｏｌ／ｌＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ为８．３），５０ｍｍｏｌ／ｌＫＣｌ，２ｍｍｏｌ／ｌＭｇＣｌ２，０．００１％ｇｅｌａｔｉｎ，２００μｍｏｌ／ｌｄＮＴＰ，５０～２００ｎｇ引物，０．７５～１．０单位（Ｕ）ＴａｑＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，２～１０ｎｇ基因组ＤＮＡ．在２０个核苷酸引物情况下，反应条件为：９２℃、３ｍｉｎ预变性；９２℃、４５ｓ，５０℃、１ｍｉｎ，７２℃、２ｍｉｎ，循环４０周；最后一次延伸为７２℃、１０ｍｉｎ．应用上述反应体系进行扩增反应，反应产物在２％琼脂糖凝胶上以５Ｖ／ｃｍ电场强度电泳２～４ｈ，获得了满意的ＲＡＰＤ图谱     

家猪随机扩增多态DNA最佳反应体系的探讨

在研究江西方猪种的遗传多样性及其系统分类时,对模板浓度和纯度,引物种类和浓度、ｄＮＴＰ浓度,镁离子浓度,温度转换时间及双引物扩增等影响ＲＡＰＤ分析的因素进行了系统的探讨,在此基础上建立了适宜于本实验室研究的最佳ＲＡＰＤ技术体系：２０μＬ反应体系中,含１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ,ｐＨ８．３,５０ｍｍｏｌ／ＬＫＣｌ,２．５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２,０．２ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ,０．４５μｍｏｌ／Ｌ随     

桃属植物随机扩增多态性DNA分析的最适反应条件

以Ｙｕｕｚｏｒａ 桃为试材对桃属植物随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ） 分析的最佳反应条件进行了研究．结果表明桃属植物ＲＡＰＤ分析的最佳反应条件为：总反应混合溶液５ｕＬ 时,添加模板ＤＮＡ１０ ～３０ ｎｇ,Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶１ ～１ ．５ 个单位,随机引物１０ ～２０ ｐｍｏｌ,ｄＮＴＰ１００ ～２００ ｕＭ,ＭｇＣｌ２ ２ ．０ ～３ ．０ ｍ Ｍ 及５ ｕＬ１０ 倍反应缓冲液条件下扩增５０ ～５５ 个循环,能够获得具有良好的稳定性和重复性的ＤＮＡ扩增产物．ＰＣＲ反应溶液的各组成因素如低于最适浓度范围时会导致扩增带数的减少甚至无带,如高于最适反应浓度范围,则会出现带的弥散或缺失．     

鱼类RAPD的影响因素及其最优反应体系的研究

在研究白鲢／团头鲂遗传图谱时,对ＲＡＰＤ反应中的模板浓度,引物浓度、ｄＮＴＰｓ浓度,镁离子浓度等反应结果的因素进行了系统分析,并在此基础上建立了适于实验室ＲＡＰＤ研究的最佳反应体系：２５μＬ反应体系中,含１０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）,１０ｍｍｏｌ／Ｌ 、８ｍｍｏｌ／Ｌ （ＮＨ４）２ＳＯ４,２ｍｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣｌ２、０．０５％ ＮＰ－４０、０．２ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰ,１５ｎｇ     

马铃薯RAPD分析方法优化初探

以云南马铃薯主要栽培品种为材料,使用进口ＰＣＲ仪,对马铃薯ＲＡＰＤ分析中的ＤＮＡ模板浓度、引物浓度、ｄＮＴＰ浓度以及ＰＣＲ扩增反应循环次数进行报研究。结果表明适用于马铃薯ＲＡＰＤ反应的最佳条件为：模板ＤＮＡ１５￣５０ｍｇ,１０－ｍｅｒ随机引物２５￣５０ｎｇ,ｄＮＴＰ２００μＭ,扩增反应周期４０￣４５个循环。每个循环包括９４℃变性１ｍｉｎ,３７℃退火１ｍｉｎ,７２℃延伸２ｍｉｎ。使用这一ＲＡＰＤ程序     

健康鸵鸟(1～6月龄)38项血清生化参数的测定

建立健康鸵鸟（Ｓｔｒｕｔｈｉｏｃａｍｅｌｕｓ）的血清全套生化参数,采用日本岛津ＣＬ ７２００型全自动生化分析仪,对３０只１～６月龄健康鸵鸟３８项血清生化参数进行测定．结果如下：（１）血清蛋白参数／ｇ·Ｌ－１：ＴＰ３１．８２,ＡＬＢ１５．４１,ＧＬＯ１６．１８（ＡＬＢ／ＧＬＯ０．９５）,Ａｐｏ Ａ１０．１２,Ａｐｏ Ｂ０．１４（Ａｐｏ Ａ１／Ａｐｏ Ｂ０．８０）;（２）血清酶参数／ｕ·Ｌ－１：ＡＬＴ１４．３,ＡＳＴ４５６．８（ＡＬＴ／ＡＳＴ０．３８）,ＧＧＴ３．４,ＬＤＨ１６０３．１,ＣＫ３９３６．８,ＣＫ ＭＢ１４３０．８,ＡＭＹ３４１５．１,ＡＫＰ５７１．７,ＨＢＤＨ３７３．３;（３）血清糖、蛋白质、脂类及其代谢产物参数／ｍｍｏｌ·Ｌ－１：ＧＬＵ９．４１,ＴＲＩ１．９７,ＢＵＮ０．９４,ＬＤＬ２．１９,ＨＤＬ１．５４,ＣＨＯ３．５８（ＨＤＬ／ＣＨＯ０．４１）;ＣＲＥ１２．６５μｍｏｌ·Ｌ－１（ＢＵＮ／ＣＲＥ０．０６３）,ＵＡ５０５．２４μｍｏｌ·Ｌ－１,ＴＢＡ３７．１μｍｏｌ·Ｌ－１,ＴＢＩＬ５．３２μｍｏｌ·Ｌ－１,ＤＢＩＬ３．２１μｍｏｌ·Ｌ－１,ＩＢＩＬ２．０８μｍｏｌ·Ｌ－１,ＴＴＴ４．１２ｕ;（?     

传染性支气管炎病毒地方分离毒株S1基因的RT-PCR方法研究

以传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）标准毒株Ｍ４１为材料,根据Ｇｅｎｂａｎｋ公开序列自行全成一对特异引物,用于扩增ＩＢＶ的完整Ｓ１基因。建立了针对ＩＢＶ基因组ＲＮＡ特点的ＲＴ－ＰＣＲ方法。对反应体系中的重要反应物Ｍｇ＾２＋、ｄＮＴＰ和引物浓度进行优化,确定其浓度值分别为１．５ｍｍｏｌ／Ｌ,２００μｍｏｌ／Ｌ和４０μｍｏｌ／Ｌ。使用此反应体系对国内ＩＢＶ地方离毒株ＪＳ／９５／０３,ＳＤ／９７／０１等１０多     

催化光度法测定痕量α-萘酚

研究了α－萘酚对碘催化硫酸铈与亚砷酸氧化还原反应的抑制作用及其动力学条件。在此基础上建立了催化动力学光度法测定α－萘酚的新方法。研究结果表明,在０．３６ｍｏｌ／L　Ｈ２ＳＯ４,０．００１ｍｏｌ／ＬＣｅ（ＳＯ４）２,０．００１２５ｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３,０．０２５ｇ／ＬＮａＣｌ和０．０１ｍｇ／ＬＩ－溶液中测定α－萘酚,其线性范围为０．２０～２．３ｍｇ／Ｌ,表观摩尔吸光系数为２．５０×１０4Ｌ·ｍｏｌ(－１)·ｃｍ(－１),灵敏度Ｓａｎｄｅｌｌ为５．７７μｇ／ｃｍ２。     

用RAPD和RFLP定位水稻香味基因（I）

本文用ＣＴ９９９３／ＫＤＭＬ１０５的Ｆ２分离群体为材料，以香味和非香两类混合集群核ＤＮＡ为模板进行ＲＡＰＤ分析，结果表明，在检测过的３００个随机引物中，只找到１个引物在香味与非香群体之间扩增出多态性产物，这个只在非香九体中扩增到１．５ｋｂ片段表现与香味性状紧密连锁，就该引种对亲本，Ｆ２个体和其它不同品种的ＲＡＰＤ分析，进一步证明了这种多态的可靠性，该分子标记的ＲＡＰＤ分析可直接应用于水稻育种实践。     

南瓜RAPD分析体系的优化*

 为确保南瓜RAPD反应结果的稳定性和重复性，对MgCl₂浓度、dNTPs浓度、Taq酶含量、引物浓度、模板DNA浓度、复性温度、PCR循环次数等影响南瓜RAPD结果的重要因素进行了初步研究。最终优化的南瓜 RAPD反应体系为25 μL反应液中：10×反应 buffer（100 mmol/L Tris-HCl,100 mmol/L KCl, 80 mmol/L (NH₄)₂SO₄ ,pH 9.0,NP-40）2.5 μL, 3 mmol/L MgCl₂，0.2 mmol/L dNTPs，Taq酶l.0 U,引物15 ng/μL ，DNA模板10 ng/μL 。本研究最终确立的PCR反应程序为: 94 ℃预变性5 min,然后按94 ℃变性30 s,37 ℃退火30 s,72 ℃延伸90 s，进行40个循环,最后72 ℃延伸5 min。在此条件下得到的RAPD图谱可为南瓜遗传多样性、分子标记及辅助育种等研究提供有效的手段。     

大字杜鹃RAPD反应体系的优化

以大字杜鹃为材料,以改进的CTAB法提取大字杜鹃叶片总DNA,分别就模板DNA浓度,引物浓度,DNTP浓度,TaqDNA聚合酶量及镁离子浓度对大字杜鹃RAPD反应结果的影响进行研究．通过对各因子的组合比较,建立了大字杜鹃RAPD反应的优化体系,即总反应体积为25pL,其中包括10×Taq酶配套缓冲液2．5pL,模板DNA浓度50mg／L,引物浓度0．5μmol／L,dNTP浓度0．15mmol／L,TaqDNA聚合酶1U,Mg^2＋浓度2．0mmol／L,其余用重蒸馏水补足．扩增程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,38℃退火40S,72℃延伸2min,共41个循环,72℃延伸7min．     

椰子基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化

以椰子叶片为实验材料,探索了椰子基因组DNA的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,建立了椰子的优化反应体系和程序。试验最终建立的椰子RAPD反应总体积为20μL,各有关成分的最佳浓度分别为Mg2＋2.5 mmol/L,Taq DNA0.75 U,dNTP 0.2 mmol/L,Primer 1μmol/μL,模板DNA2.5 ng/μL。PCR循环程序为：94℃预变性1.5min;94℃变性20 s,36℃退火20 s,72℃延伸45 s,35个循环;最后72℃延伸3 min。     

枣树基因组DNA提取及其RAPD体系优化

以不同生长期的枣和酸枣为研究对象,采用CTAB法提取枣基因组DNA;通过单因素5水平试验,筛选模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和随机引物的浓度及其用量,建立了枣和酸枣RAPD技术最优体系,即25μl反应体系中各组分含量为10×Taq Buffer+KCl 2.5μl;Taq DNA聚合酶0.04 U/μl;MgCl22.0 mmol/L;模板DNA2 ng/μl;引物0.3μmol/L;dNTP为0.2 mmol/L。适宜的扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃循环变性50 s,36℃退火50 s,72℃延伸1.5 min,38个循环;72℃延伸10 min。     

当归RAPD反应条件的优化

以当归DNA为模板,对影响当归RAPD扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立当归RAPD反应的最适体系。通过正交法及单因素试验对RAPD反应条件进行优化,7个试验因子的最适条件为:模板DNA 0.5 ng/μL,引物0.8μmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,MgCl22.5 mmol/L,Taq酶0.8 U,退火温度36~37℃,循环次数40。     

七彩鲑RAPD反应体系的构建及优化

以七彩鲑尾鳍为试验材料,对影响七彩鲑随机扩增多态性DNA(RAPD)扩增体系的重要参数进行了优化,建立了七彩鲑RAPD的最适反应体系.七彩鲑RAPD的最佳反应体系为:反应体系25μL,模板DNA的质量浓度4 ng/μL,Mg2+浓度2.0 mmol/L,dNTP浓度0.5mmol/L,引物浓度0.5μmol/L,Taq...     

东北红豆杉RAPD反应体系的优化（摘要）（英文）

[目的]研究东北红豆杉RAPD反应体系的优化条件。[方法]以东北红豆杉叶片为材料,用改进CTAB法提取DNA,分别从模板DNA浓度（10、20、30、40、50 ng）、引物浓度（5、10、15、20、25 pmol/μl）、dNTP浓度（0.1、0.15、0.2、0.25、0.3 mmol/L）,TaqDNA聚合酶量（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 U）及镁离子浓度（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mmol/L）5个方面对东北红豆杉RAPD扩增效果的影响进行分析。[结果]用改良的CTAB法提取红豆杉基因组DNA,所得DNA质量较好,无杂质存在,条带整齐一致,而且能够取得比较理想的RAPD扩增效果。通过各因子的比较分析,建立了东北红豆杉RAPD优化体系：20μl PCR反应总体积中含模板DNA10 ng,Mg2 ＋2.0 mmol/L,引物15pmol/μl,dNTP0.2 mmol/L,TaqDNA聚合酶1.0 U,10×buffer缓冲液2μl,以双蒸水补充至20μl。[结论]为进一步探索与东北红豆杉性别鉴定相关的研究提供技术支持。     

苎麻属植物RAPD PCR反应体系的双重正交法优化*

 以苎麻属植物为材料,研究苎麻属植物RAPD分析中的主要影响因素,采用差异性材料DNA为模板和双重正交优化设计的方法。建立苎麻属植物RAPD PCR反应体系：25μL反应体系中含Taq DNA聚合酶1.5U,Mg2+2.1 mmol/L,dNTP 0.2μmol/L,Primer 0.75μmol/L,模板DNA 150ng。最佳扩增程序：先94℃变性4min,再94℃变性45s,37℃复性45s,72℃延伸90s共36个循环,最后 72℃延伸5min,4℃保存。经检验,该体系能适应苎麻属多个种植物的RAPD PCR的正常扩增。     

峨眉含笑基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

以峨眉含笑嫩叶为材料,研究了峨眉含笑基因组DNA提取方法及RAPD反应条件。结果表明:采用改良的CTAB方法,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD-PCR分析。在25μL反应体积中,RAPD分析的优化反应体系为:1.5 mmol/L Mg2+、0.8 mmol/L dNTP、240 nmol/L随机引物、80 ng DNA、1.0 U Taq DNA聚合酶。     

苦楝RAPD反应体系的优化

以苦楝叶片提取的基因组DNA为材料,通过单因素多水平梯度试验,筛选DNA模板,Mg^2＋,Taq DNA聚合酶,dNTPs和随机引物的浓度及用量,建立苦楝RAPD技术分析体系.结果表明：当基因组DNA浓度为60 ng/μL,镁离子浓度为3.0 mmol/L,dNTP浓度为0.25 mmol/L,引物浓度为0.30μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1 U/20μL,反应体系总体积20μL时,出现可辨认的清晰谱带.其扩增程序为：94℃预变性2 m in;然后38个循环（94℃变性30 s,37℃退火1 min,72℃延伸80 s）;最后72℃延伸8 min,4℃保存.