影响月季愈伤组织诱导和分化的因素

以“萨蔓莎”(Samantha“)、金斯莱克”(Jimthelanky“)、休姆主教”(HumeBasil)等9个月季品种为材料,研究了影响月季愈伤组织诱导和分化的因素。试验结果表明,不同品种之间愈伤组织诱导率和诱导数量差异显著。细胞分裂素BA、KT、ZT和生长素NAA、2,4-D6种激素中,KT或ZT与NAA组合能够较好地诱导月季愈伤组织。试验选择了含有不同浓度KT和NAA以及ZT和NAA两组培养基试验不同激素浓度对月季愈伤组织诱导的影响,结果表明激素浓度主要影响愈伤组织的颜色和质地;一般生长素浓度越高,愈伤组织颜色偏向于黄色,质地也越松散;但是有些品种当生长素达到一定浓度时,会发生不定根;并且不同品种适宜的激素浓度不同。愈伤组织形成后在原培养基中继续培养或转接于含有不同浓度ZT和NAA以及含有TDZ、NAA和GA的两组愈伤组织分化培养基中,结果表明,在愈伤组织分化过程中,生长素仍然是必要的;GA对愈伤组织增殖具有负作用。暗培养和固液两相培养基有利于愈伤组织的分化。试验得到了月季品种“金斯莱克”的再生植株以及“萨蔓莎”愈伤组织分化的芽状体和叶状体。     

油梨愈伤组织诱导及分化研究

摘要：[目的]研究不同激素及外植体类型对‘哈斯’油梨（Persea Americana Mill.cv.Hass）愈伤组织诱导及分化的影响,筛选最佳诱导条件和外植体。[方法]通过间接器官发生途径。主要探讨（1）单一激素萘乙酸（1-Naphthylacetic acid,NAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-dichlorophenoxy acetic acid,2,4-D）;6-苄氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine,6-BA）分别与2,4-D和NAA 结合时对‘哈斯’油梨叶片愈伤组织的诱导效应。（2）不同外植体（叶片、叶柄、茎尖、茎段）在相同条件下（基本培养基：MS+1 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+0.1NAA mg/L）的愈伤组织诱导效应。（3）单一激素 6-BA（或与NAA结合）对油梨愈伤组织芽分化的效应。[结果]结果表明：以MS为基本培养基,（1）添加1.0 mg/L 2,4-D/NAA,其诱导效果最佳,诱导率分别为45.3%和20.2%;但NAA诱导的愈伤质地较佳。（2）1 mg/L NAA与1.0 mg/L 6-BA结合,诱导效果较好,其诱导率最高可达84%。（3）诱导愈伤组织的最适外植体为茎段,其诱导率≥72.8%。叶柄次之,叶片和茎尖较差。[结论]综上,不同激素种类及其浓度和外植体类型对‘哈斯’油梨愈伤组织诱导影响显著。最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂。愈伤组织诱导最佳外植体为茎段,但诱导形成的愈伤组织难以分化出芽。     

钩藤愈伤组织的诱导与植株再生

为了建立钩藤愈伤组织诱导与植株再生体系。以药用植物钩藤[Uncaria rhynchophyllai (Mip.)Jack]嫩茎、嫩枝、嫩叶为外植体,通过优化激素组合,进行愈伤组织诱导和分化、幼苗生根和移栽,初步建立了钩藤愈伤组织诱导和植株再生体系。结果表明,以钩藤嫩枝作为外植体出愈情况较好,污染率低,继代后愈伤组织生长快。培养基成分为WPM+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA较适宜愈伤组织的诱导和增殖,诱导率可达83.3%。培养基成分为WPM+2.0 mg/L KT+0.2 mg/L NAA能分化出芽,愈伤组织率分化率达到82.3%;而1/2WPM+1.0 mg/L IBA适宜于试管苗生根,生根率达92.0%。以钩藤嫩枝为外植体诱导获得了质量良好的愈伤组织,并成功再生成植株,结果的获得可为解决钩藤人工栽培过程的资源和品质问题以及进行细胞培养和分子遗传改良奠定基础。     

大麦成熟胚胚性愈伤组织的高频诱导和植株再生

大麦成熟胚的初代愈伤组织是水质、柔软的非胚性愈伤组织，在继代培养中能以一定频率出现胚性愈伤组织。本文研究了基因型、有机添加物和胚切割等因素对大麦胚性愈伤组织诱导频率的影响。结果表明：供试的１０个大麦品种在胚性愈伤组织诱导率和植株再生率上有显著差异；培养基中添加水解酷蛋白、Ｌ－脯氨酸以及提高维生素Ｂ１和肌醇的浓度可以促进胚性愈伤组织的形成；胚芽段比全胚或胚根段更易形成胚性愈伤组织。胚性愈伤组织转入无     

崇明水仙鳞片愈伤组织诱导和再分化影响因素研究

以崇明水仙鳞片为外植体材料,对愈伤组织的诱导和再分化过程中的影响因素进行研究,摸索出最有利的组培条件,获得崇明水仙试管小鳞茎,并对组培过程中冷处理时间、鳞片位置及激素配比等影响因子进行研究。结果表明:鳞茎冷处理时间以3周为佳;内层鳞片诱导率和再分化率更高;冷处理3周的内层鳞片愈伤组织诱导和再分化的最佳培养基为MS+BA 1 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂4 g/L,诱导率和再分化率分别为48.4%和23.3%。试验摸索出了鳞片愈伤组织途径获得崇明水仙试管小鳞茎的最佳条件,为崇明水仙的规模化生产提供技术支持。     

唐古红景天愈伤组织诱导及植株再生

为解决唐古红景天种质资源短缺问题,本研究建立了唐古红景天愈伤组织诱导及再生体系。以唐古红景天幼嫩的叶片、茎段和根为外植体,筛选出最优的外植体灭菌处理方法;探索愈伤组织诱导和增殖,不定芽诱导和扩增的最佳激素配比;观测不定芽的生根情况以及再生苗生长状态。结果表明：唐古红景天诱导愈伤组织的最佳外植体为叶片,愈伤组织诱导的培养基为MS₀+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,诱导率为85.37%;最佳愈伤组织增殖的培养基为MS₀+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,增殖率为62.5%;最佳不定芽诱导、扩增的培养基为MS₀+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,诱导率为66.67%;不定芽在1/2MS生根诱导培养基中的生根率为42.5%,再生苗移栽于混合基质(泥炭∶珍珠岩∶蛭石=2∶1∶1)成活率为24.9%。该研究为唐古红景天种质资源的保存及人工栽培提供了有效的技术参数。     

甘草愈伤组织再分化的研究

以多年野生乌拉尔甘草的不同营养器官为外植体进行愈伤组织诱导,试验结果表明:适宜的愈伤组织诱导培养基为:MS+BA2mg/L+2,4D0·5mg/L;分化培养基为:MS+BA2mg/L+NAA1·0mg/L;以甘草芽做外植体愈伤组织分化率达到100%。利用愈伤组织进行再分化是较为理想的增殖途径,其繁殖系数达20~40倍。比芽的增殖系数高2·5倍。     

唐菖蒲愈伤组织的诱导及植株再生

本试验以唐菖蒲无菌试管苗叶片、茎段、幼芽为外植体,探讨其愈伤组织诱导及植株再生情况。结果表明叶片愈伤组织诱导率极低。茎段愈伤多为黄色致密的非胚性愈伤,幼芽愈伤多为乳白色胚性愈伤。幼芽的愈伤组织诱导率和分化率以及分化速度也均高于茎段外植体。初步表明幼芽是建立愈伤组织再生体系的良好外植体。最佳愈伤组织诱导培养基为MS 2,4-D4．0 6BA0．5。     

韭菜愈伤组织诱导条件优化的研究

本试验利用韭菜种子胚根为外植体诱导愈伤组织并继代培养的方法,研究了激素配比对韭菜愈伤组织的培养和继代的影响。结果表明,MS＋NAA（1mg／L）＋6-BA（2mg／L）适宜胚根诱导愈伤组织并进行继代培养,生长激素的合理搭配有利于韭菜快速形成愈伤组织。     

蓖麻花药愈伤组织诱导的研究

以通蓖5号为试验材料,诱导蓖麻花药的愈伤组织.分别以接种密度(1/5个、2/5个、3/5个、4/5个、1个花蕾)、基本培养基种类(MS、NB、B_5、N_6)、低温预处理时间(0d、1d、3d、5d、7d、9d)、培养基添加物(糖、生长激素、脯氨酸、水解酪蛋白、抗坏血酸)等因素为变量,对蓖麻花药愈伤组织进行诱导试验.结果表明,3/5个花蕾的接种密度、30g/L的糖浓度、MS培养基(添加1.5mg/L 6.BA和0.9mg/L NAA)以及5d的低温(4℃)预处理均有利于花药愈伤组织的形成;同时脯氨酸、水解酪蛋白、抗坏血酸等的加入均可有效地提高蓖麻花药愈伤组织诱导率.     

盐胁迫下金花菜和紫花苜蓿试管苗的转录组分析及其耐盐基因筛选

为筛选金花菜和紫花苜蓿的耐盐基因,本研究以盐胁迫下的金花菜(JHC)和紫花苜蓿(ZHMX)试管苗为试验材料进行转录组分析。结果表明：金花菜组和紫花苜蓿组差异基因数为26722,金花菜组vs紫花苜蓿组有15850个基因下调,有10872个基因上调。金花菜组和紫花苜蓿组差异基因KEGG富集显著的Pathways有核糖体、光合作用天线蛋白、糖酵解/糖异生、光合作用、苯丙烷生物合成等。金花菜组耐盐基因有碱性亮氨酸拉链43、NAC转录因子47、ABC转运A家族成员7、晚期胚胎发生丰富蛋白2、乙烯反应转录因子ERF110等基因;紫花苜蓿组耐盐基因有WRKY转录因子、蛋白TIFY 8、转录因子MYB13、核运输因子2A、低温盐响应蛋白等基因。本试验结果可为了解金花菜和紫花苜蓿的耐盐分子机制及选育金花菜和紫花苜蓿耐盐新品种提供理论依据。     

接种不同根瘤菌对紫花苜蓿固氮效能及生物量的影响

为了在晋北生态区给主要推广品种筛选适宜的高效根瘤菌,使紫花苜蓿-根瘤菌共生体充分发挥共生固氮作用,建立高效、高产、优质紫花苜蓿生产体系。将中国农业科学院菌种保藏中心筛选出的9株紫花苜蓿根瘤菌作为试验材料,以山西大同地区的土壤为基质,结合温室盆栽和田间试验,比较供试材料的结瘤数、固氮酶活性、株高、生物量等指标的变化情况。筛选出适合供试材料巨能耐盐紫花苜蓿品种的4株高效根瘤菌CCBAU30015、CCBAU NMC024-1、HBU07004和CCBAU30198,并将这4株菌进行田间接种效果验证。结果表明,接种CCBAU30015、CCBAU NMC024-1、HBU07004和CCBAU30198后,全年干草产量分别比对照增加18.7%,15.8%,11.3%和13.3%,单位面积蛋白质产量分别比对照增加10.9%,10.2%,9.7%和10.1%,其中,CCBAU30015表现最为突出,在各个指标上与对照间差异均显著(P0.05)。说明通过土壤筛选的高效根瘤菌可以应用到实际生产中。     

紫花苜蓿(Medicago sativa)YABBY基因家族的生物信息学分析及其对逆境胁迫的响应

YABBY转录因子家族是植物特有转录因子,与植物形态有关,在植物响应胁迫方面也有重要的调控作用。为了研究YABBY基因家族在苜蓿抗逆性中的作用,本研究利用生物信息学对苜蓿的YABBY转录因子家族成员、分布及结构等进行分析。对苜蓿、大豆、水稻和拟南芥进行系统进化树的分析,表明该家族基因在植物中具有同源性。理化性质和结构分析表明,苜蓿中YABBY基因主要分布在第2、4、5条染色体上,苜蓿YABBY家族基因中包含5个保守结构域,其蛋白质主要以无规则卷曲的形式构成,α-螺旋、β-折叠和β-转角含量较少,启动子序列分析发现该家族存在ABRE顺式反应元件,能够响应盐胁迫及ABA(Ascisic acid)胁迫,通过基因表达模式分析,发现MsYABBY2基因响应盐、碱、干旱等逆境胁迫,推测其在抗逆境胁迫中起到关键调节作用。本研究为后续研究MsYABBY基因的抗逆机制及调控机理提供了理论基础。     

GsZFP1基因植物表达载体构建及对苜蓿的遗传转化

从野生大豆中获得的具有耐旱、耐冷特性的锌指转录因子GsZFP1基因,构建到以CaMV35S为启动子、E12为增强子的植物表达载体pCEOM中,以bar基因为筛选标记基因,通过农杆菌介导法将构建的植物表达载体转化苜蓿品种农菁1号的子叶节,用含0.5mg/L草丁磷的筛选培养基进行筛选,获得了70株抗性植株,用PCR检测得到20株bar基因阳性植株,将获得的转基因植株进行GsZFP1基因的RT-PCR鉴定,获得3株RT-PCR阳性植株。结果表明,GsZFP1基因在苜蓿中得到表达。     

不同品种紫花苜蓿中总皂苷含量的比较研究

采用比色法测定了北京地区栽培不同年限的45个紫花苜蓿品种茎、叶中总皂苷的含量。结果表明，各品种苜蓿叶片中的皂苷含量均高于茎，在不同品种之间存在明显差异。4年生植株中皂苷含量最高的品种“Vernal”为1.174%，最低的品种“Empress”为0.606%；3年生植株中最高的品种“WL442”为1.141%，最低的品种“农保”为0.788%；2年生植株中最高的品种“胜利者”为1.293%，最低的品种“全能”为0.722%。综合比较，含量最低品种与最高的品种相差2.13倍。栽培年限对紫花苜蓿皂苷含量具有一定影响。     

几种多花黑麦草与紫花苜蓿品种的化感作用研究

本文对三个多花黑麦草与两个紫花苜蓿品种的茎、叶和根的水浸提液化感作用进行了研究分析。结果表明：三种花黑麦草与两种紫花苜蓿品种对受体赛迪7有一定的化感影响,对赛迪7的种子发芽都有抑制作用;多花黑麦草 Barextra和Barmega两个品种的根、茎、叶水浸提液对赛迪7的苗高、根长及生物量的积累都存在低促高抑的化感作用;供体不同部位化感作用不同;紫花苜蓿两个品种茎的水浸提液在三种浓度下均对赛迪7的根长有促进作用,对苗高有抑制作用。     

外源维生素对高NaCl胁迫下紫花苜蓿种子萌发及恢复性的影响

为给改进紫花苜蓿在盐碱地区的生产提供依据,笔者研究了14610 mg/L高浓度NaCl胁迫下,外源水溶性维生素（VB₁、VB₂、VPP、VB₆、VH、VB₁₂与VC）对紫花苜蓿种子萌发及恢复萌发性状的影响。结果表明：62.5 mg/L VPP显著提高了恢复萌发后的芽鲜重,1000 mg/L VB₆、500 mg/L VB₁₂和1000 mg/L VC促进了紫花苜蓿高盐胁迫下的萌发,但对胁迫减轻后的恢复萌发没有显著影响。250 mg/L VB₁₂对高盐胁迫下紫花苜蓿的萌发及恢复萌发均有显著性改进,使高NaCl的致死性从19.667%降低到4.667%。VB₁、VB₂和VH未能有效改进高NaCl胁迫对萌发的抑制效应。试验显示外源VB₆、VB₁₂、VC对高NaCl胁迫下紫花苜蓿种子的萌发特性有一定程度的调节作用。     

新疆大叶紫花苜蓿(Medicago sativa.L)子叶、下胚轴、根的植株再生

随着植物抗逆性研究和植物转基因技术的发展，通过异源目的基因转化培育耐盐碱苜蓿品种的研究已引起人们的关注，植物受体高频再生体系的建立是异源转化高效的基础。选取新疆大叶紫花苜蓿种子萌发5~7d无菌苗的子叶、下胚轴及根为外植体，诱导愈伤培养基为MS+2,4-D 0.1~3.0 mg/L(8种不同水平)或MS+2,4-D 2.0 mg/L+ KT 0.01~0.5 mg/L(10种不同水平)，诱导芽培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.05 mg/L，生根培养基为MS。结果表明，外植体在MS+2,4-D 2.0 mg/L+ KT 0.2 mg/L培养基中能够产生状态较好可再分化的愈伤组织，子叶、下胚轴、根的平均出愈率分别为93.1%、100%、100%。愈伤组织在MS+6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.05 mg/L培养基中培养40~80d中均可分化芽，子叶、下胚轴、根的芽平均分化率为50%、78%、50%，将2 cm以上的芽转入MS培养基中诱导生根，14d后，生根的小植株炼苗移入花土中，成活率达90%以上。子叶、下胚轴、根在该体系中均能获得再生植株，根也是一种较好的植株再生材料，以根为外植体进行植株再生的研究报道还较少。     

短期NaCl与Na2CO3胁迫对紫花苜蓿种子萌发可恢复性的影响

探讨短期钠盐胁迫对紫花苜蓿种子萌发特性的影响。试验共设盐分类型、盐分浓度、温度及胁迫时间等4个因子,测定发芽率（势）等指标。结果表明：短期钠盐胁迫解除后,30℃发芽率最低,但温度无持续效应,前期温度仅影响前3天发芽,而不影响后期发芽;Na2CO3具有持久的抑制效应,各个测定指标均低于NaCl;随盐分浓度提高,发芽率逐渐降低,尽管250 mM显著抑制前3天发芽,但第5天该处理有显著恢复性萌发,表明盐分浓度为暂时性抑制效应;胁迫时间与盐分浓度效应类似,随胁迫时间延长,发芽率逐渐下降,30 h抑制前3天萌发,但胁迫解除后有较高的恢复萌发。     

混合碱胁迫对碱茅和紫花苜蓿种子萌发的影响

采用室内种子萌发实验方法,以碱茅(Puccinellia distans),紫花苜蓿(Medicago sativa L)两种牧草种子为研究对象,以NaHCO₃和Na₂CO₃为基础盐分,将NaHCO₃ 和Na₂CO₃按照1:0,2:1,1:1,1:2,1:1的比例配成相同浓度的复合溶液,研究不同混合盐分胁迫对碱茅和紫花苜蓿种子发芽率、发芽势、发芽指数、芽长和芽重的影响。结果表明：不同比例的混合盐分胁迫对碱茅和苜蓿种子的发芽率、发芽势、发芽指数和芽长均有明显地抑制作用。但是,不同盐分组合处理间对碱茅和紫花苜蓿的芽重的影响比单一盐分要小。单一盐分比较,NaHCO₃的抑制作用更强。NaHCO₃ 和Na₂CO₃的比例为1:1时,对两种种子的发芽抑制作用最强。两种牧草比较,Na₂CO₃ 和NaHCO₃混合盐分胁迫对碱茅种子萌发的抑制作用较弱,对紫花苜蓿种子萌发的抑制作用较强。