纹状体内注射6-羟基多巴胺制备兔帕金森病模型

应用脑立体定位技术微量注射6-OHDA于兔右侧纹状体内。术后每周观察以阿扑吗啡（Apomorphin,APO）诱导的旋转行为,并于术后6周处死兔,以黑质酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase,TH）免疫组化染色,观察黑质多巴胺能神经元的形态、结构及数量变化。结果表明,部分兔在术后即出现行动迟缓、躬身、易激怒等异常行为。术后6周时,20只兔中有16只在阿扑吗啡诱导后30min内的平均旋转圈数大于7r/min,达到成功模型标准。模型成功率达到80%。TH免疫组化染色可见正常对照组、假手术组及模型组未损侧黑质内有胞浆浓染、突起明显的TH免疫反应阳性神经元分布,神经元数量较多,轴突长度较长,且3者差异不显著（P〉0.05）;而模型组损毁侧黑质内TH免疫反应阳性神经元与上述3者相比,数目明显减少（P〈0.05）,残存的细胞染色较浅,胞体轮廓和突起均不清晰,轴突长度明显变短（P〈0.05）。结果提示,将6-OHDA注射于兔单侧纹状体是一种制备帕金森病（Parkinson’s disease,PD）模型的有效方法,此法操作简便,动物死亡率低,模型制作成功率高。     

口服百草枯建立帕金森病模型及其评价研究

通过模拟人类经消化道长期慢性暴露于百草枯的方式,建立大鼠帕金森病模型及对其进行评价。将大鼠随机分为高剂量组(20mg/kg百草枯)、中剂量组(10mg/kg百草枯)、低剂量组(5mg/kg百草枯)和对照组(生理盐水),每组16只,连续灌胃4个月后运用行为学检测系统、中脑黑质部及肺部病理学观察、高效液相色谱法检测纹状体多巴胺及其代谢物含量等进行分析及评价。给药4个月后,与对照组相比,中剂量组大鼠反应迟钝、动作僵硬、四肢震颤、学习记忆能力减退(P0.01),中脑黑质神经元细胞明显萎缩,纹状体中的多巴胺及高香草酸含量分别下降了20.0%(P0.01)和11.3%(P0.01),且肺组织有明显损伤;低剂量组与对照组相比上述变化不明显。通过口服百草枯可建立具典型行为学变化和大脑黑质纹状体多巴胺能神经系统受损的大鼠帕金森病模型,这将为帕金森病的机制及防治研究提供理想的模型动物。     

帕金森病的治疗进展

帕金森病（Parkinsondisease,PD)是以中脑黑质多巴胺能神经元的变性与消失及纹状体中多巴胺（Dopamine,DA)水平降低的一种疾病，长期困扰着中老年人，虽然病因比较明确，但目前还没有一种特别的治疗方法或药物能彻底根治PD。本文就PD治疗以及神经营养因子的应用等方面作了简要的阐述。     

不同剂量6-羟多巴胺对大鼠子宫交感神经损毁情况及其对肥大细胞分布的影响

为研究6-羟多巴胺(6-OHDA)损毁大鼠子宫交感神经的剂量及其对子宫肥大细胞分布的影响,选取180~200日龄健康的性成熟Wistar雌性大鼠24只,随机分为对照组和处理组,处理组尾静脉注射25,50,100 mg/kg的6-OHDA。结果显示:按照一次性注射100mg/kg 6-OHDA的方法可以损毁支配子宫的交感神经,而50 mg/kg未能损毁子宫内膜固有层的神经。肥大细胞观察结果显示,其主要分布在内环、外纵肌之间的血管周围,随着6-OHDA剂量的不断加大,肥大细胞数量呈减少趋势,3个处理组对比差别显著,对照组略高于25 mg/kg组。血清中组织胺含量呈相反的变化趋势。结果表明,可采取一次性注射100mg/kg的6-OHDA来建立交感神经损毁模型,交感神经影响子宫内肥大细胞的分布,对于机体组织胺释放的调控不同于子宫。     

疑核内有关神经元在机体细胞免疫调节中的作用

研究了疑核内胆碱能神经元、去甲肾上腺素能神经元、脑啡肽能神经元对机体细胞免疫机能的影响 ,并对疑核内 3种神经元之间的相互关系进行了探讨。实验用麻醉家兔 ,分 6组进行 ,分别在疑核处通过微量注射器注入氯化乙酰胆碱 ( Ach)、密胆碱 -3( HC-3)、酒石酸去甲肾上腺素 ( NA)、6-羟基多巴胺 ( 6-OHDA)、盐酸吗啡 ( MP)、盐酸纳络酮 ( NX) ,并分别于注射前和注射后不同时间取外周血 ,测定 T细胞百分率及PHA诱导的有丝分裂原反应。结果 :Ach组上述免疫指标比注射前明显升高 ;HC-3组上述免疫指标比注射前明显降低 ;NA组上述免疫指标在注射后 30、60 min时明显低于注射前 ;6-OHDA组上述免疫指标在注射后 1 0～ 1 2 0 min时明显升高 ;MP组上述免疫指标在注射后 60、1 2 0 min时明显降低 ;NX组上述免疫指标注射前、后无明显变化。提示 :疑核增强机体细胞免疫的作用可能是通过胆碱能神经元实现的 ;疑核内的去甲肾上腺素能神经元与胆碱能神经元的作用相拮抗 ;而疑核内的脑啡肽能神经元可能对前两者的活动起一种调整作用     

帕金森病的治疗进展

帕金森病(Parkinsondisease,PD)是以中脑黑质多巴胺能神经元的变性与消失及纹状体中多巴胺(Dopamine,DA)水平降低的一种疾病,长期困扰着中老年人,虽然病因比较明确,但目前还没有一种特别的治疗方法或药物能彻底根治PD。本文就PD治疗以及神经营养因子的应用等方面作了简要的阐述。     

NO对大鼠中脑腹侧被盖区DA神经元的调节

实验观察了微量注射 NOS抑制剂 L -NAME及微量联合注射 NO的前体 L-精氨酸( L-Arg) L-NAME于大鼠中脑腹侧被盖区( VTA)对该部位多巴胺神经元的调节。发现VTA注射 L -NAME( 1 mg/ 5μL )后 ,伏隔核( Acb)多巴胺 ( DA )代谢产物—双羟苯乙酸( DOPAC)水平升高到注射前的 1 2 2 .5% ( P <0 .0 0 1 ) ,小剂量注射 L-NAME( 0 .2 mg/ 5μL)对伏隔核 DOPAC水平无明显影响 ;同样方法联合注射 L-Arg( 3 0 0 μg/ 5μL) L-NAME( 1 mg/5μL)后 ,伏隔核 DOPAC水平无明显变化。结论 :VTA微量注射 L-NAME兴奋了该部位的DA神经元 ,而 L -Arg L -NAME联合注射 ,却不能影响 DA神经元的活动 ,说明 NO可以通过L-Arg-NOS-NO途径参与 VTA多巴胺神经元的调节     

Effects of Angelica Injection on the Apoptosis and Expression of SIRT1 in 6-Hydroxydopamine Induced PC12 Cell in vitro Model of Parkinson's Disease

目的:探讨当归注射液治疗对帕金森病的可能作用及作用机制.方法:采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)处理PC12细胞制作帕金森病体外模型.6-OHDA处理前2 h,将当归注射液加入PC12细胞培养液中,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,采用流式细胞仪检测凋亡率,并用免疫细胞化学SABC法和图像分析检测酪氨酸羟化酶(TH)及SIRT1表达.结果:高浓度当归注射液能明显提高PC12细胞的存活率(P＜0.01),增加TH阳性细胞数(P＜0.01),降低细胞凋亡率(P＜0.01),增加SIRT1表达(P＜0.01).结论:高浓度当归注射液对6-OHDA诱导PC12细胞帕金森病体外模型具有保护作用,当归注射液可能通过特定信号通路激活SIRT1、抑制6-OHDA诱导PC12细胞的凋亡而发挥其保护作用.     

纳洛酮对帕金森病IL-12P40表达影响的实验研究

目的 利用动物模型探讨纳洛酮对帕金森病(PD)细胞因子IL-12P40表达的影响.方法 30只SD大鼠随机分成3组,每组10只.第一组(PD组)立体定向将6羟多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)注入右侧黑质制作PD模型,术后每周用阿朴吗啡诱发旋转30min至第4周旋转>6次/min者定为成功的PD模型,第二组(纳洛酮)利用立体定向将纳洛酮注入大鼠的右侧黑质,然后用与第一组相同的方法 制作PD模型,第三组注入生理盐水作为对照组.取鼠的术侧中脑黑质利用免疫组化(IH)检测IL-12P40的表达.结果 IH检测IL-12P40,与正常对照组比较,PD组显著增加(P<0.01);与PD组比较,纳洛酮组表达显著减少(P<0.01).结论 纳洛酮对PD发病的重要干预机制之一可能是通过影响IL-12P40的表达来实现.     

骨髓间充质干细胞移植对帕金森病模型大鼠纹状体多巴胺水平的影响

旨在探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对帕金森病(PD)模型大鼠纹状体内多巴胺(DA)水平的影响。选取正常大鼠(N组),造模后4周、8周PD大鼠(M4、M8组),BMSCs移植治疗4周、8周后PD大鼠(T4、T8组)纹状体匀浆液,以高效液相色谱(HPLC)法检测各组纹状体内DA的含量。结果表明,N组大鼠纹状体内DA的含量为(15.56±2.16)μg/g;M4和M8组大鼠损毁侧脑纹状体内DA含量为(10.67±1.54)μg/g和(10.50±2.32)μg/g,均显著低于N组(P0.05);T4和T8组大鼠损毁侧纹状体内DA含量为(12.70±2.91)μg/g和(13.71±2.42)μg/g,均显著高于M4和M8组(P0.05)。T8组DA含量显著高于T4组(P0.05),表现出随细胞移植时间的延长DA水平逐渐恢复的规律。说明BMSCs移植提高了PD模型大鼠脑纹状体内DA的含量,提示移植的外源BMSCs可能通过分化为DA能神经元或促进其功能恢复,增加DA的分泌,进而改善PD模型的症状。     

大鼠慢性心力衰竭模型心电图分析

为探讨大鼠心电图(ECG)在评价大鼠慢性心力衰竭(CHF)模型中的意义,以SD大鼠36只随机分为2组,模型组24只,正常组12只.模型组采用阿霉素诱导法复制CHF大鼠模型.记录标准肢体Ⅱ导联ECG,并用心脏系数和心肌病理学检查验证.结果显示,模型组大鼠ECG典型改变为ST段凸面向上抬高(电压约升高0.12mV)和T波高...     

花粉抗动物脑衰老的机制研究

本实验使用花粉抗大鼠脑衰老，发现花粉具有预防动物海马、纹状体、下丘脑等脑区DNA的损伤作用。因此花粉可能是全世界营养学家正在寻找具有预防或修复的DNA损伤的食品之一。     

交感神经阻断小鼠妊娠早期子宫内肥大细胞的分布

为了研究交感神经对哺乳动物早期胚胎发育的影响机制,通过腹腔注射6-羟多巴胺使交感神经阻断后,观察了小鼠妊娠前期胚胎早期发育和肥大细胞数量和型别的变化。结果显示,交感神经阻断后,不仅对胚胎早期发育有影响,使胚胎着床数降低64.4%,而且影响子宫内肥大细胞的数量及其型别分布。妊娠4d(E4)时肥大细胞数量明显升高(P<0.01),同时肥大细胞分型也有所变化,即黏膜型肥大细胞主要存在于胚胎着床前和着床后,结缔组织型肥大细胞没有明显差异,混合型肥大细胞主要存在于着床期间。这一结果表明,妊娠早期子宫肥大细胞数量与型别的变化可能是交感神经影响早期胚胎发育的途径之一。     

花艽-6抗炎作用及其机理研究

本试验旨在研究和探讨抗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)药物花艽-6的抗炎作用及其抗炎机理。采用二甲苯致小鼠耳肿胀法、醋酸致小鼠毛细血管通透性增高法、甲醛和蛋清致小鼠足跖肿胀法,以及棉球致小鼠肉芽组织增生法分别研究了该药物的抗急性、亚急性和慢性炎症的作用。通过复制佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠模型研究花艽-6对其血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量的影响。花艽-6对小鼠二甲苯所致的耳肿胀、醋酸所致的腹腔毛细血管通透性增高、甲醛和蛋清所致的足跖肿胀和棉花所致的肉芽组织增生均具有显著或极显著的抑制作用。花艽-6具有抗炎作用,可显著降低AA大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,对RA具有治疗作用。     

穿王消炎粉对LPS诱导大鼠急性肺损伤的治疗作用

【目的】 研究穿王消炎粉对脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)的治疗作用。【方法】 将60只SD雄性大鼠随机分入空白组、左氧氟沙星阳性药物对照组、LPS模型组及穿王消炎粉低(1 g/kg体重)、中(2 g/kg体重)、高(4 g/kg体重)剂量组,每组10只。模型组和给药组大鼠经滴鼻法给予LPS(3 mg/kg体重)制备大鼠ALI模型,24 h后,给药组分别灌胃相应浓度的穿王消炎粉,模型组和空白组灌胃相同体积的生理盐水。治疗4 d后处死大鼠,分离血清、固定并冻存肺脏组织。测定各组大鼠肺脏组织湿/干重比;HE染色观察大鼠肺脏组织病理学变化;ELISA法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6含量;采用实时荧光定量PCR和Western blotting法检测肺脏组织中IL-1β、IL-6 mRNA表达水平和蛋白表达量。【结果】 与空白组相比,LPS模型组大鼠出现肺间质壁增厚,肺泡腔内炎性细胞浸润、出血,肺泡结构破坏等肺损伤症状,肺组织的湿/干重比极显著升高(P<0.01),血清中IL-1β、IL-6含量和肺脏组织中IL-1β、IL-6 mRNA表达水平及蛋白表达量均显著增加(P<0.05)。与LPS模型组相比,各给药组大鼠肺间质增宽现象有所改善,肺组织的湿/干重比、血清和肺脏组织中炎性因子IL-1β、IL-6 mRNA表达水平及蛋白表达量均显著降低(P<0.05)。【结论】 穿王消炎粉可有效抑制LPS诱导的急性肺部损伤和炎症程度。     

Acetylcholinesterase activity and lipid peroxidation in the brain and spinal cord of rats infected with Trypanosoma evansi

Neurological and locomotor clinical signs are described in animals infected with Trypanosoma evansi. These disturbances may be related to changes in the amount of acetylcholine (neurotransmitter) in the synaptic cleft. Therefore, changes in acetylcholinesterase (AChE) activity and lipid peroxidation in brain and spinal cord of T. evansi-infected rats were investigated. Each rat was intraperitoneally infected with 10(6) trypomastigotes kept in fresh (group A; n=13) and cryopreserved blood (group B; n=13). Thirteen served as uninfected (not-infected; group C). In days 4 and 30 post-infection (PI) the rats were anesthetized and subsequently decapitated to obtain the brain and the spinal cord (between vertebrae L1 and S2). The brain was removed and dissected (cerebellum, cerebral cortex, striatum and hippocampus) to measure the activity of AChE and lipid peroxidation, determined by TBARS levels. To verify if T. evansi was present in the central nervous system (CNS), brain structures of three rats of each group were processed by PCR T. evansi-specific. AChE activity was significantly increased in all brain structures and decrease in spinal cord in infected rats in 4 PI (P<0.05). The levels of TBARS were decreased in the brain structures, differently from spinal cord, which showed increased lipid peroxidation in 4 PI. The AChE activity in striatum, cerebral cortex, hippocampus and spinal cord reduced concomitantly with the increase of the enzyme in cerebellum of the infected rats (P<0.05), and the TBARS levels increased in cerebellum, striatum and spinal cord of infected rats compared to non-infected animals in 30 PI. The PCR was positive for T. evansi in all structures of the brain, confirming the presence of the parasite in the CNS. Based on the results, we conclude that the changes in AChE activity and lipid peroxidation in the CNS are induced by infection with T. evansi, suggesting that the parasite interferes with the cholinergic neurotransmission in this experimental condition.     

交感神经对小鼠排卵和早期胚胎发育的影响

为了研究交感神经对妊娠的调控作用,给小鼠连续5 d腹腔注射交感神经化学损毁剂——6-OHDA(100 mg/kg),将交感神经化学性损毁,然后通过阴道涂片法和显微解剖的方法,对交感神经损毁后小鼠发情周期的变化、排卵的数量和妊娠发生后胚胎数量及大小进行了观察。结果表明:交感神经化学损毁后发情周期和排卵的数量没有明显的变化,但是胚胎的数量明显减少,小鼠胚胎数量在妊娠第7天比对照组同期减少了64.4%,在妊娠第9天比对照组同期减少了69.9%;对胚胎的大小进行测量时发现,交感神经损毁组在妊娠第7天与对照组同期相比,长径减小了0.51 mm,短径减小了0.56 mm;妊娠第9天时,交感神经损毁组与对照组同期相比,长径减小了0.37 mm,短径减小了0.47 mm,差异显著(P<0.05)。说明交感神经主要影响胚胎的早期发育,对发情周期和排卵没有明显的影响。     

6-hydroxydopamine-mediated release of norepinephrine increases faecal excretion of Salmonella enterica serovar Typhimurium in pigs

Salmonella enterica serovar Typhimurium is an animal and zoonotic pathogen of worldwide importance. In pigs, transport and social stress are associated with reactivation and spread of Salmonella Typhimurium infection. The stress-related catecholamine norepinephrine (NE) has been reported to activate growth and virulence factor expression in Salmonella; however the extent to which NE contributes to stress-associated salmonellosis is unclear. We studied the impact of releasing NE from endogenous stores during Salmonella Typhimurium infection of pigs by administration of 6-hydroxydopamine (6-OHDA), which selectively destroys noradrenergic nerve terminals. Treatment of pigs with 6-OHDA 7 or 16 days post-oral inoculation with Salmonella Typhimurium produced elevated plasma NE levels and transiently, but significantly, increased faecal excretion of the challenge strain. Oral administration of NE to Salmonella Typhimurium-infected pigs also transiently and significantly increased shedding; however pre-culture of the bacteria with NE did not alter the outcome of infection. Salmonella has been proposed to sense and respond to NE via a homologue of the adrenergic sensor kinase QseC. A ΔqseC mutant of Salmonella Typhimurium was consistently excreted in lower numbers than the parent strain post-oral inoculation of pigs, though not significantly so. 6-OHDA treatment of pigs infected with the ΔqseC mutant also increased faecal excretion of the mutant strain, albeit to a lesser extent than observed upon 6-OHDA treatment of pigs infected with the parent strain. Our data support the notion that stress-related catecholamines modulate the interaction of enteric bacterial pathogens with their hosts.     

精子介导法制备转基因鸡的研究

以LacZ基因为报告基因，构建载体质粒p-OV-β-Gal，转移到鸡早期胚胎内，对外源基因的整合及表达情况进行检测分析，为制备转基因鸡探索新的方法。采用脂质体介导法、精子介导法以及电激法相结合的方法将载体质粒p-OV-β-Gal转移到鸡早期胚胎内，进行转基因鸡研究，结果发现其外源基因整合阳性率为13.2%（7/53），表达阳性率为20.7%（11/53）。说明该方法可作为制备转基因鸡的有效方法。