防治烟草黑胫病内生细菌的分离鉴定及促生作用研究

通过常规分离方法、平板对峙培养法从健康烟株的根、茎、叶中分离得到内生细菌127株,从中筛选出8株菌株对烟草黑胫病菌有明显抗性,并对其进行了皿内拮抗试验、发酵液抑菌试验、温室盆栽试验和发酵液浸种、灌根试验,结果表明:8个菌株培养液滤液中存在具有明显抑菌作用的活性成分。以菌株wy11对烟草黑胫病的防效最好,防效为51.7%。菌株wy2发酵液浸种对烟草幼苗有显著促生作用,能显著提高地上部分鲜重、茎围、根长、叶长、叶宽。     

致病疫霉拮抗内生细菌的筛选及离体防病作用

为了筛选对致病疫霉菌丝有显著抑制作用的植物内生细菌菌株,并测试其在马铃薯离体组织上对晚疫病的预防效果,本试验利用传统的分离培养方法从常见几种茄科植物组织内分离纯化内生细菌,以平板对峙法和滤纸片法分别测试细菌活体、无菌体发酵液和菌液对致病疫霉菌丝生长的抑制作用,在马铃薯块茎切片和离体叶片上测试菌液对晚疫病的预防效果。结果表明,分离纯化的81株内生细菌中,活体菌株对致病疫霉有抑制作用的有63株,抑制率达到50%以上的31株菌,其中以分离自辣椒果实的LJ-6和马铃薯块茎的TD-12菌株的抑制作用最强,抑菌率分别为93.12%和92.24%;同时发现活体菌株抑制率达到50%以上的31株菌的发酵液原液均无明显抑制作用,但这些菌株菌液的抑制作用普遍优于活体菌株;TD-12菌株的菌液在马铃薯块茎切片上对晚疫病具有显著的预防及诱导抗病效果,保护率均在91%以上;在马铃薯离体叶片上对晚疫病的防效为76.23%。这些结果表明TD-12菌株在防治马铃薯晚疫病方面有较大的应用潜力。     

1株烟草青枯病拮抗内生细菌的分离及鉴定

为了筛选具有生防价值的拮抗烟草青枯雷尔氏菌的内生细菌,从湖南长沙、永州、郴州烟草青枯病发病区的健康烟株采集茎秆,采用稀释平板分离法获得150个内生菌株.抑菌结果表明,21个内生菌株对烟草青枯雷尔氏菌2316菌株有拮抗效果,占总菌株数的14.0％.拮抗菌株中,F1菌株24 h对烟草青枯雷尔氏菌株2316抑菌圈直径达6.5...     

黄瓜疫霉菌拮抗内生细菌的筛选与鉴定

【目的】从黄瓜叶片中筛选抗疫霉菌效果好的内生细菌并进行鉴定,为进一步研究黄瓜疫病的理 论探索及防治应用提供实验材料。【方法】以黄瓜叶片为实验材料筛选内生细菌,根据待检菌株的镜检特征、 革兰氏染色反应、菌落排列方式和菌落形态特征等进行初步筛选。采用平板对峙法和发酵液拮抗法实验对目标 内生细菌进行拮抗作用测定。通过 16S rDNA 序列测定及同源性分析,并构建系统发育树确定目标菌株种属。 【结果】初步筛选出 32 株内生细菌将其编号为 CL1~CL32,其中革兰氏阴性杆菌 10 株、革兰氏阳性杆菌 13 株、革兰氏阳性球菌 9 株,利用平板对峙法发现 8 株对掘氏疫霉菌有较强抑制作用的拮抗菌株,菌丝抑制率为 10.3%~54.3%,抑菌半径为 1~7 mm,对其中抑菌效果较好的 3 株菌株（CL7、CL9、CL15）进行发酵液拮抗实验, 结果显示其抑菌率分别为 54.4%、72.2%、63.3%。【结论】对掘氏疫霉菌具有较强抑制作用的 3 株内生细菌（CL7, CL9、CL15）分别属于泛菌属 Pantoea sp.、假单胞菌属 Pseudomonas sp. 和葡萄球菌属 Staphylococcus sp.,其中 抑制效果最明显的为 CL9,即假单胞菌属 Pseudomonas sp.。     

西瓜枯萎病内生拮抗细菌YGRE24的分离鉴定及其特性研究

采用稀释涂布平板法结合平板对峙法,从表面消毒的西瓜根中筛选到一株能够高效抑制尖孢镰刀菌西瓜专化型3种生理小种的内生细菌YGRE24。菌株YGRE24对尖孢镰刀菌西瓜专化型3种生理小种的抑制率分别为54.76%、55.95%和55.24%,且其除菌后的培养液也具有明显的抑菌效果。该菌株对小麦赤霉病菌、水稻纹枯病菌等也具有很强的拮抗作用。此外,菌株YGRE24还具有溶磷、产吲哚乙酸、产铁载体的促生特性。盆栽试验表明,该菌株能够在接种病原菌的情况下促进西瓜苗的生长,使地上部分的鲜重和干重分别增加44.75%和30.32%,可以缓解病害对西瓜苗生长的影响。经形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析初步确定菌株YGRE24为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。     

木霉菌对烟草疫霉的拮抗作用

通过对峙培养试验测定木霉菌(Trichodermaspp.)对烟草疫霉菌(Phytophthora parasiticavar.nicotianae)的抑制作用,筛选出对烟草疫霉菌具有拮抗作用的绿色木霉(T.viride)菌株TG050609.平板对峙培养试验结果表明:该木霉菌对烟草疫霉菌菌落生长的抑制率为29.12%,且能寄生于烟草疫霉;其挥发性次生代谢产物和发酵滤液对烟草疫霉也有明显的抑制作用.盆栽防治试验结果表明,该木霉菌对烟草黑胫病的防治效果达到56.53%,优于58%甲霜灵锰锌WP.     

烟草黑胫病菌拮抗内生细菌的筛选

采用稀释分离法从黔南州采集的健康烟草组织中分离获得烟草内生细菌153株,通过平板对峙试验,从中筛选出2株对烟草黑胫病菌具有明显抑制作用的菌株LPN07和LPN09,其对黑胫病菌菌丝生长的抑制率分别为68.99%和65.97%。经16S rDNA序列分析,菌株LPN07和LPN09被鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)细菌。     

烟草疫霉生防菌的筛选及鉴定

为了筛选对烟草疫霉菌具有拮抗作用的生防放线菌菌株,从烟草黑胫病病田采集健康烟株的根际土样,采用稀释涂布分离法与对峙培养法筛选得到32株对烟草黑胫病具有拮抗作用的放线菌菌株,其中编号为F-7的菌株对烟草疫霉菌的抑制作用最强且效果稳定,抑菌率为83.11%;经形态学观察、生理生化测定以及16S rDNA基因序列分析,将该菌株鉴定为波卓链霉菌;通过光学显微镜观察,F-7菌株对烟草疫霉菌丝生长和孢子萌发都具有显著的拮抗作用。     

烟草黑胫病菌拮抗内生细菌的筛选和鉴定

为寻找防治烟草黑胫病新途径,2001至2003年,从湖南永州和宁乡等地烟草黑胫病发病严重的田块采集健株,共分离到内生细菌株120株,经测定,8株内生细菌菌株在室内有较强的拮抗作用,这8株内生细菌与烟草黑胫病菌共培结果显示,55y,NN-3,YN-4和YN-10对烟草黑胫病菌抑茵效果均在66%以上．根据内生细菌形态特征和生理生化性状,初步鉴定内生细菌55y为假单胞杆菌属铜绿假单胞菌,NN-3为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌,YN-4,YN-10为芽孢杆菌属凝结芽孢杆菌,且这4菌株均为烟草内生细菌．     

几种选择性培养基对致病疫霉和烟草疫霉分离及培养比较研究

致病疫霉 (Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｉｎｆｅｓｔａｎｓ)是疫霉属真菌中一个重要的种 ,引起马铃薯、番茄的晚疫病 ,造成马铃薯、番茄生产的严重损失。近年来 ,晚疫病对作物的为害日益严重 ,引起了广大植病工作者的重视。在植物病害防治研究工作中常进行的室内药剂筛选、抗药性监测、以及抗病育种工作中都要用到病原菌种 ,但致病疫霉的寄生性很强 ,较难分离。作者近年来参阅了国内外有关资料 ,对比了几种选择性培养基的分离效果 ,对前人的工作方法进行了一些改良 ,摸索出了一种简便、有效分离致病疫霉的选择性培养基。该选择性培养基对番茄…     

烟草疫霉两个变种的划分及疫霉属几个生物学性状的研究

本文基于对福建、浙江、江苏、上海等地9个种、51个疫霉菌株的分类研究结果,着重探讨疲霉属中烟草疫霉(phytophthora nicotianae)种内两个变种的划分,温度反应、脱落孢子囊孢囊柄长度等性状在种的鉴定中的作用,以及配对试验中交配菌株种的配对组合与藏卵器大小的关系。指出:单纯根据形态特征无法区分烟草疫霉的两个变种,因而不宜再使用P.nicotianae var.nicotianae和P.nicotianae var.parasitica这二个变种的名称;温度反应是一个不稳定性状,在种的鉴定中只能作为参考依据,菌丝最适、最低生长温度对种的鉴定作用不大;孢囊柄长度性状是稳定的,在种的鉴定中应受到重视。     

拮抗细菌W-7的鉴定及其对致病疫霉的抑制作用

为明确分离纯化自马铃薯晚疫病病叶上的一株对致病疫霉菌丝生长有明显抑制作用的细菌W-7的分类地位、抑菌作用及其防病潜力,采用传统方法和16S rDNA序列分析相结合对该菌株进行鉴定,以平板对峙法和打孔法分别测定细菌活体、菌液和无菌体发酵液以及不同浓度菌液的抑菌作用,显微镜观察该菌株对病菌菌体形态的影响,并采用块茎切片法评价菌液的离体防病效果。结果表明,综合菌落特征、生理生化特性以及16S rDNA序列分析结果,初步确定W-7菌株为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus);该菌株菌液的抑菌作用最强,抑菌率达到94.44%,菌液能使致病疫霉菌丝变形;将菌液稀释至原液浓度的25%后,抑菌率仍能达到87.65%,其在马铃薯块茎切片上对晚疫病的预防效果为73.40%。拮抗细菌W-7在防治马铃薯晚疫病方面具有一定潜力。     

广州地区茄疫病的发生及疫霉种鉴定

 1987～1999年,从广州地区茄的果实、茎、叶及根上分离得到疫霉菌,根据形态特征、培养性状及生理特性等方面研究结果,鉴定出4个种,其中以辣椒疫霉Phytophthora capsici Leon较为普遍,烟草疫霉P.nicotianae Van Breda de Haan次之, 掘氏疫霉P.drechsleri Tucker较少出现,致病疫霉P.infestans (Montagne) de Bary 仅见于春季;此外,种群分布与前作及不同季节有关。     

3株蒜头果内生木霉的鉴定及其对幼苗的促生作用研究

【目的】鉴定3株蒜头果内生木霉,并探讨其对幼苗生长发育的影响,为蒜头果内生木霉资源的利用及优质苗木培育提供参考。【方法】采用分子系统学和形态学方法,鉴定3株分离自蒜头果茎部和根部的内生木霉。通过接种效应试验,测定根施3种木霉菌液和无菌水（对照）后,蒜头果幼苗的生长性状、生物量、叶绿素含量、抗氧化酶活性、可溶性糖和可溶性蛋白含量以及木霉的根系定殖率,并结合各项指标的隶属函数值对不同处理的蒜头果幼苗品质进行综合评价。【结果】通过构建木霉属菌种系统发育树以及对菌落形态和微观结构的观察,确定3株内生木霉分别为哈茨木霉（Trichoderma harzianum,SF15）、贵州木霉（T. guizhouense,SF548）和绒毛木霉（T. tomentosum,SF434）。接种菌株SF15和SF548的蒜头果幼苗株高增量、叶片增量显著高于对照,3种木霉处理的幼苗茎粗增量均显著高于对照。接种菌株SF15和SF548的蒜头果幼苗主根长和根部吸器数量显著高于对照,而最大吸器直径显著低于对照,且不同处理组的蒜头果幼苗主根长与根部吸器数量呈一定正相关,而与最大吸器直径呈一定负相关。接种菌株SF15和SF548的幼苗地下、地上、全株鲜质量及干质量均显著高于对照,接种菌株SF434的处理组全株鲜质量及地下和全株干质量显著高于对照。3个接菌组蒜头果幼苗叶片叶绿素含量,POD、SOD、CAT活性以及可溶性糖和可溶性蛋白含量均显著高于对照。接种菌株SF15和SF548的蒜头果幼苗根系定殖率分别为64.25%和61.78%,显著高于接种SF434的根系定殖率55.57%。基于各项测定指标的隶属函数值,不同处理组幼苗品质的综合排名为：接种SF15的处理>接种SF548的处理>接种SF434的处理>对照。【结论】3株蒜头果内生木霉对幼苗生长、生物量、叶绿素含量、抗氧化酶活性以及可溶性糖、可溶性蛋白含量的提高有积极促进作用,其中菌株SF15和SF548的促生效果较为显著,为蒜头果潜在的促生菌株。     

贮藏柑桔上疫霉种的鉴定

1998年至2000年,从广州地区的贮藏柑桔病果上分离得到7株疫霉菌,鉴定出3个种,其中,柑桔褐腐疫霉Phy-tophthora citrophthora(Smith et Smith)Leon4株,柑桔生疫霉P.citricola Saw2株,烟草疫霉P.nicotianae Bread de Haan1株;建议在柑桔贮藏保鲜时,适当地将百菌清或酰苯胺类杀菌剂与常用的苯并咪唑类杀菌剂混合使用来处理果实,以控制疫霉菌的为害。     

马铃薯内生细菌StC01的鉴定与促生作用

从马铃薯组培苗上分离出1株内生细菌StC01,菌体短杆状,菌落呈圆形黄色。经过生理生化鉴定及16S rRNA基因测序鉴定,属于短小杆菌属(Curtobacterium)。对马铃薯组培苗接种培养试验表明,该菌对马铃薯生长有促进作用。接种细菌的马铃薯组培苗培养5周后,平均株高比对照增加17.85%,整株平均鲜重、单株平均地上部分鲜重、根鲜重分别增加17.56%、25.87%和2.26%。整株干重、地上部分干重、根部干重增加24.46%、38.13%和1.67%。     

烟草内生细菌Itb57和Itb295菌株的促生与抑菌作用测定

[目的]研究烟草内生细菌Itb57和Itb295的促生与抑菌作用,以探讨其在生物防治中的作用。[方法]采用温室盆栽的方法研究不同处理方式的内生细菌Itb57和Itb295菌悬液对烟草幼苗的促生作用;通过平板对峙培养法测定内生细菌Itb57和Itb295菌悬液对烟草黑胫病菌、烟草赤星病菌和烟草灰霉病菌的抑菌作用。[结果]内生细菌Itb57和Itb295菌悬液对烟草幼苗有一定的促生作用,能显著提高地上部的鲜重和干重,以浸种＋喷雾灌根处理方式的促生效果最好;菌株Itb57对烟草黑胫病菌、烟草赤星病菌和烟草灰霉病菌3种病原真菌均有较好的抑制作用,菌株Itb295仅对烟草黑胫病菌有较好的抑制作用。[结论]该研究结果为烟草内生细菌Itb57和Itb295在烟草病害生物防治中的研究及应用奠定了基础。     

烟草疫霉的快速分子检测

 根据烟草疫霉与其他疫霉菌ITS序列的差异设计了1对寡聚核苷酸引物,用于烟草疫霉的PCR检测。结果表明,在优化的反应体系与扩增条件下,该对引物表现出强特异性,只在烟草疫霉为模板的扩增体系中具有1条660bp的条带。利用此特异性引物可稳定地从含有烟草疫霉的土壤及其发病组织中检测出病原菌。本实验提供并完善了一套快速检测烟草疫霉的方法和技术,特别对土传病害的准确诊断与快速检测在实践和理论上具有重要意义。     

烟草疫霉对烟草的致病性及生理分化研究

将分离自东北，华东等１１种寄主植物上的２０个烟草疫霉（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ，等于寄生疫霉Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ）菌株接种６个烟草品种，测定了烟草疫霉对烟草的致病性及其生理分化。指出来自烟草的烟草疫霉菌株对烟草具较强的侵染能力，亦可以侵染黄瓜，茄子和番茄的果实，但大多数非烟草寄主来源的菌株经伤口接种亦可以侵染烟草，引起典型的症状。本研究还比较了不同的     

菠萝心腐病原疫霉种的鉴定

 1997～2000年,从广州及其周边地区的菠萝心腐植株上分离得到疫霉菌8株,鉴定出3个种,即柑桔褐腐疫霉(Phytophthora citrophthora)1株,烟草疫霉(P.nicotianae)5株和棕榈疫霉(P.palmivora)2株。