抑制烟草黑胫病菌和促烟草幼苗生长内生菌的分离与鉴定

【目的】有效防控烟草黑胫病。【方法】采用稀释分离法和平板对峙法从烟草种子中分离筛选拮抗烟草疫霉的内生菌,并通过发酵液抑菌、室内发芽、温室盆栽及漂浮育苗试验测定拮抗菌株对烟草幼苗的防病促生效果。【结果】从烟草种子中共计分离得到34株内生细菌,筛选出4株对烟草疫霉具有较强抑制作用的拮抗菌株,其中以YN201716的抑菌带最宽,YN201728的抑菌谱最广;温室盆栽试验结果表明:YN201728菌株发酵液灌根处理后,对烟草黑胫病的防效达58.84%。此外,YN201728菌株还促进种子萌发及烟草幼苗植株生长,与无菌水对照相比,幼苗的根长、株高、叶绿素、最大叶长、叶宽、鲜重和干重分别增加23.4%、83.3%、176.4%、124.6%、97.10%、487.8%和196.8%。结合形态特征、生理生化测试、16S rRNA基因序列测定及系统进化树分析的结果,YN201709、YN201728菌株为被鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),YN201702菌株为沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis),YN201716菌株为短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)。【结论】烟草种子内生菌YN201728菌株对烟草具有较好的防病促生效果,具有开发为微生物农药和菌肥的巨大潜力。     

晒黄烟内生菌株筛选及对青枯病生物防治

为了防治烟草晒黄烟青枯病,从湖南宁乡烟区分离烟草内生细菌菌株160株,32株对青枯菌有抑制作用,其中001,009,011抑制效果最好．经鉴定,001为枯草芽孢杆菌,009与011为短芽孢杆菌．田间试验5种内生菌的防效以011,001效果最好．     

烟草黑胫病拮抗细菌的筛选及鉴定

从毕节8个县市种植烟草的田地采集土壤样品122份,共分离到细菌菌株630株,经平板对峙培养初筛到31株对烟草疫霉有拮抗作用的菌株,再次筛选表明5株细菌菌株在室内有较强的拮抗作用.通过形态特征观察、生理生化特征测定及16SrDNA序列分析,鉴定拮抗细菌1107为芽孢杆菌属短小芽孢杆菌,7403、1205、1601、5801为芽孢杆菌属.     

菌株YC-25的分离鉴别及其对烟草的促生作用

为获得优质根际促生细菌资源，采用平板分离技术对烟草根际土壤中的可培养细菌进行分离，通过平板拮抗试验筛选抑菌活性菌株，同时进行解磷、解钾、产吲哚乙酸（IAA）活性检测，采用盆栽试验验证菌株对烟草的促生效果，并对目标菌株进行了多相分类学鉴定。结果表明：从烟草根际土壤分离获得35株不同形态菌株，依次编号为YC-1至YC-35；平板拮抗试验筛选发现YC-25抑菌最广，同时对6种病原真菌具有较为显著的抑制作用，平均抑菌率达到48%；促生功能活性鉴别显示，YC-25还具有溶无机磷、解钾、分泌IAA和产纤维素酶能力；多相鉴定结果表明，菌株YC-25为不动杆菌属（Acinetobater）的一个种，暂命名为Acinetobater pittii YC-25；盆栽试验结果显示，YC-25处理下的烟草株高增加26.29%，茎围增加27.54%，最大叶面积增加17.26%，说明菌株YC-25对烟草的农艺性状促生效果良好，作为烟草专用微生物菌剂备选遗传资源开发前景广阔。     

烟草青枯病拮抗菌TBWR1的筛选鉴定及防病促生能力

【目的】分离对烟草青枯病菌具有拮抗作用的细菌并对菌株进行分类、鉴定,以丰富烟草青枯病生防菌菌种资源。【方法】从健康烟株根际土壤中筛选拮抗菌株,测定其形态、生理生化特征及16S rDNA序列等,并对菌株进行分类鉴定,通过盆栽试验验证拮抗菌对烟草青枯病菌的拮抗活性及其对烟株的促生作用。【结果】在烟株根际土壤中分离获得1株对烟草青枯病有明显抑制作用的菌株TBWR1,序列基因登录号为EF562603,菌株TBWR1与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis KC849252和Bacillus subtilis MN062963在同一分支上且同源性达85%,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);该菌株对烟草青枯病的生防效果达71.1%,并能显著促进烟草株高、叶长、茎围生长和根系生物量增加。【结论】枯草芽孢杆菌TBWR1可作为烟草病害生物防治的候选菌株,在烟草青枯病防治中具有潜在价值。     

1株烟草青枯病生防细菌的分离与鉴定

采用系列稀释法和平板涂布法从黔江烟区土壤中分离得到细菌菌株87株,经平板对峙法初筛得到1株对烟草青枯病病原菌有强烈拮抗作用的细菌,再通过滤纸片法验证其提取物对烟草青枯病病原菌有强烈的抑制作用,对该菌株进行全细胞脂肪酸分析,初步判断该菌为芽孢杆菌.16S rDNA分析结果表明,该菌为解淀粉芽孢杆菌.     

烟草黑胫病拮抗芽孢杆菌的筛选及生防效果评价

为了防治烟草疫霉对烟草引起的病害,从不同烟田健康烟株根际土壤中筛选分离42株根际细菌,经平板对峙初筛、细菌发酵液115℃处理后复筛得到10株对烟草黑胫病病原菌(Phytophthora parasitica)具有较好抑制效果的芽孢杆菌。经分子生物学鉴定可将其分为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、枯草芽孢杆菌(B. subtilis)和贝莱斯芽孢杆菌(B. velezensis)3类。选取枯草芽孢杆菌GJ1、解淀粉芽孢杆菌GJ7和贝莱斯芽孢杆菌GJ11对各类芽孢杆菌进行纤维素酶和蛋白酶分泌特性检测、烟草根际土壤、根和茎定殖能力检测以及田间试验,得出这3种芽孢杆菌均可分泌纤维素酶和蛋白酶,均能在烟草根际土壤、根和茎中定殖,在根际土壤中定殖能力为GJ1GJ7GJ11,在根和茎中定殖能力均为GJ7GJ1GJ11。GJ1、GJ7、GJ11对烟草黑胫病田间相对防治效果分别为33.33%、80.00%、28.60%,初步确定拮抗芽孢杆菌田间防治效果取决于其在烟草内定殖能力。     

烟草黑胫病生防细菌的鉴定和防效测定

【目的】挖掘烟草黑胫病的生防资源,通过试验对前期分离到的2株生防菌进行种类鉴定和防治效果测定。【方法】根据其形态学、生理生化特征和16 S rDNA序列分析,YCYM-04菌株被鉴定为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia),YCYM-09菌株被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。【结果】平板对峙结果显示,YCYM-04菌株和YCYM-09菌株对烟草疫霉的抑菌带分别达13.7和8.9 mm。此外,YCYM-04菌株和YCYM-09菌株发酵滤液5倍稀释液菌落抑菌率分别达71.8%和50.6%;YCYM-04菌株发酵滤液造成烟草疫霉菌丝节间缩短、断裂、生长缓慢等现象,YCYM-09菌株发酵滤液造成烟草疫霉菌丝体膨大、增粗、畸形、原生质体凝结。盆栽试验表明,YCYM-04菌株和YCYM-09菌株培养液灌根处理对烟草黑胫病的防治效果分别达50.5%和61.5%。【结论】YCYM-04和YCYM-09菌株在烟草黑胫病的生物防治上具有潜在的应用价值。     

烟草黑胫病菌拮抗内生细菌的筛选

采用稀释分离法从黔南州采集的健康烟草组织中分离获得烟草内生细菌153株,通过平板对峙试验,从中筛选出2株对烟草黑胫病菌具有明显抑制作用的菌株LPN07和LPN09,其对黑胫病菌菌丝生长的抑制率分别为68.99%和65.97%。经16S rDNA序列分析,菌株LPN07和LPN09被鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)细菌。     

烟草黑胫病菌拮抗内生细菌的筛选和鉴定

为寻找防治烟草黑胫病新途径,2001至2003年,从湖南永州和宁乡等地烟草黑胫病发病严重的田块采集健株,共分离到内生细菌株120株,经测定,8株内生细菌菌株在室内有较强的拮抗作用,这8株内生细菌与烟草黑胫病菌共培结果显示,55y,NN-3,YN-4和YN-10对烟草黑胫病菌抑茵效果均在66%以上．根据内生细菌形态特征和生理生化性状,初步鉴定内生细菌55y为假单胞杆菌属铜绿假单胞菌,NN-3为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌,YN-4,YN-10为芽孢杆菌属凝结芽孢杆菌,且这4菌株均为烟草内生细菌．     

抗烟草黑胫病菌生防细菌筛选、鉴定及体外拮抗机理初探

【目的】从云南烟草黑胫病高发区烟草根际土壤分离对烟草黑胫病菌具有高效拮抗作用的菌株,明确拮抗菌株的分类地位,并进行体外拮抗机理初探,为烟草黑胫病的防治提供生防资源和参考依据。【方法】采用平板对峙法从烟草根际土壤中分离对烟草黑胫病菌具有拮抗作用的菌株,通过生理生化特性及16S rDNA序列分析对具有较强拮抗活性的菌株进行鉴定,并测定生防细菌在体外对烟草疫霉的生物防治活性及作用方式。【结果】从采集的烟草根际土壤样品中共分离出6株对烟草疫霉具有拮抗活性的细菌菌株,其中菌株CD-1表现出最强的拮抗活性,其抑菌带宽度达10.12 mm;根据生理生化特性和16S rDNA序列分析,将该菌株鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。菌株CD-1具有广谱抗真菌特性,其胞内和胞外均存在抗真菌物质,其中使用二氯甲烷作为细菌发酵液萃取剂所提取的抗真菌物质的抑制效果最好;在p H 6～8、温度40～80℃时表现出相对稳定的抑制活性;菌株CD-1在NB培养基中培养的上清液提取物和细胞提取物对烟草疫霉均表现出较强的抑制活性,其抑制率分别达76.91%和67.23%;菌株CD-1分泌的抗真...     

致病疫霉拮抗细菌的筛选及抑菌作用研究

[目的]筛选获得显著拮抗致病疫霉的细菌菌株,为深入开发利用拮抗细菌抑制致病疫霉并控制马铃薯晚疫病提供依据。[方法]用平板对峙法和滤纸片法测定61株细菌活体、发酵液及菌液对致病疫霉的抑制作用并进一步测定了SR13-2菌株的诱导抗病作用。[结果]供试的61株细菌活体对致病疫霉菌丝生长的抑制率达到60%以上的有24株,其中HT-6菌株的抑菌作用最强,抑菌率达到了89.92%;但所有供试菌株的发酵液均无显著抑菌作用,而大部分菌株菌液的抑菌作用却明显高于活体菌株,其中以S34-1菌株的抑菌作用最强,抑菌率为91.50%;同时发现SR13-2菌株的菌液具有显著的诱导抗病作用,保护率可达60%。[结论]拮抗菌株S34-1和SR13-2的活体与发酵液的抑菌作用之间无相关性,而菌液在防治马铃薯晚疫病方面有较大的应用潜力。     

贝莱斯芽孢杆菌YX-3的筛选鉴定及其抑菌效果

为了分离出对多种植物病害真菌具有生防潜力的拮抗细菌,通过平板法从银杏外种皮中分离纯化到1株细菌YX-3,采用生理生化试验及16S r DNA测序鉴定细菌的分类地位,利用平板对峙法测定菌株YX-3对6种供试植物病原菌的抑制作用。菌株YX-3菌落呈乳白色,边缘光滑,培养5 d后菌落由饱满转变为中心处塌陷,菌体呈杆状,菌体大小约0.5×3.1μm,芽孢大小约0.5×1.0μm,经革兰氏染色结果为阳性,初步确定为芽孢杆菌,经分子生物学鉴定后,其为贝莱斯芽孢杆菌。贝莱斯芽孢杆菌YX-3对灰梨孢菌、禾谷镰刀菌、藤仓镰刀菌、新月弯孢菌、串珠镰刀菌、尖孢镰刀菌6种供试植物病原菌均具有抑制作用,抑制率在60%～69%之间,贝莱斯芽孢杆菌YX-3对藤仓镰刀菌的拮抗作用较强,抑菌率为69.19%±0.24%,对新月弯孢菌的拮抗作用较弱,抑菌率为60.47%±0.09%。贝莱斯芽孢杆菌YX-3对多种植物病原物具有广谱拮抗作用,具有作为生物防治菌剂的潜在价值。     

七叶树内生细菌的分离鉴定及生物活性研究

为揭示内生细菌与七叶树之间的相互关系,从七叶树的根茎中分离鉴定内生细菌,测定其对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aure)等4种靶标菌的抑菌活性,同时构建系统发育树,分析其亲缘关系。筛选产IAA菌株,测定其产量,为菌肥的研发提供潜在资源。采用平板分离法分离七叶树内生细菌,并对其进行菌株鉴定;采用滤纸片扩散法测定七叶树内生细菌培养物对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aure)等四种靶标菌的抑菌活性。采用Salkowski法测定产IAA的能力。结果表明:共分离出48株内生细菌,分属于4个属,分布最广的类群是芽孢杆菌属(Bacillus),占总菌株的68.4%,共有3个属的28株内生细菌至少对一株拮抗菌株具有抗菌活性,占总菌株的58%。共筛选出5株产IAA的菌株,分别是WJ-66、WJ-7、WJ-57、WJ-89、WJ-19,其中WJ-7的吲哚乙酸产量为22.768mg·L~(-1)。七叶树中蕴含大量具有抑菌活性的内生细菌产IAA的菌株,可为寻找和开发新型抑菌生物制剂和微生物菌肥提供菌种资源。     

黄瓜疫霉菌拮抗内生细菌的筛选与鉴定

【目的】从黄瓜叶片中筛选抗疫霉菌效果好的内生细菌并进行鉴定,为进一步研究黄瓜疫病的理 论探索及防治应用提供实验材料。【方法】以黄瓜叶片为实验材料筛选内生细菌,根据待检菌株的镜检特征、 革兰氏染色反应、菌落排列方式和菌落形态特征等进行初步筛选。采用平板对峙法和发酵液拮抗法实验对目标 内生细菌进行拮抗作用测定。通过 16S rDNA 序列测定及同源性分析,并构建系统发育树确定目标菌株种属。 【结果】初步筛选出 32 株内生细菌将其编号为 CL1~CL32,其中革兰氏阴性杆菌 10 株、革兰氏阳性杆菌 13 株、革兰氏阳性球菌 9 株,利用平板对峙法发现 8 株对掘氏疫霉菌有较强抑制作用的拮抗菌株,菌丝抑制率为 10.3%~54.3%,抑菌半径为 1~7 mm,对其中抑菌效果较好的 3 株菌株（CL7、CL9、CL15）进行发酵液拮抗实验, 结果显示其抑菌率分别为 54.4%、72.2%、63.3%。【结论】对掘氏疫霉菌具有较强抑制作用的 3 株内生细菌（CL7, CL9、CL15）分别属于泛菌属 Pantoea sp.、假单胞菌属 Pseudomonas sp. 和葡萄球菌属 Staphylococcus sp.,其中 抑制效果最明显的为 CL9,即假单胞菌属 Pseudomonas sp.。     

烟草赤星病拮抗生防菌BS06-1的筛选

[目的]筛选对烟草赤星病具有明显拮抗作用的细菌。[方法]应用平板对峙培养法对从烟草根际分离到的细菌进行烟草赤星病拮抗性鉴定,对其中对烟草赤星病菌拮抗性较高的一株细菌利用细菌16S rRNA通用鉴定引物进行PCR扩增、测序和田间抗病性试验。[结果]共从烟草根际分离120份细菌,有6份对烟草赤星病病原菌具有一定拮抗作用,其中1份细菌拮抗作用明显,定名为BS06-1。将该细菌的16S rRNA测序结果登录NCBI网站进行Blastn序列比对,结果表明该菌株与枯草芽孢杆菌BSD-2同源性达到96%,与枯草芽孢杆菌BCRC 14718同源性达到95%,证明该菌属于枯草芽孢杆菌。田间试验证明该菌株BS06-1对烟草赤星病具有显著的抑菌效果。[结论]BS06-1细菌对烟草赤星病具有明显拮抗作用。     

烟草内生细菌Itb57和Itb295菌株的促生与抑菌作用测定

[目的]研究烟草内生细菌Itb57和Itb295的促生与抑菌作用,以探讨其在生物防治中的作用。[方法]采用温室盆栽的方法研究不同处理方式的内生细菌Itb57和Itb295菌悬液对烟草幼苗的促生作用;通过平板对峙培养法测定内生细菌Itb57和Itb295菌悬液对烟草黑胫病菌、烟草赤星病菌和烟草灰霉病菌的抑菌作用。[结果]内生细菌Itb57和Itb295菌悬液对烟草幼苗有一定的促生作用,能显著提高地上部的鲜重和干重,以浸种＋喷雾灌根处理方式的促生效果最好;菌株Itb57对烟草黑胫病菌、烟草赤星病菌和烟草灰霉病菌3种病原真菌均有较好的抑制作用,菌株Itb295仅对烟草黑胫病菌有较好的抑制作用。[结论]该研究结果为烟草内生细菌Itb57和Itb295在烟草病害生物防治中的研究及应用奠定了基础。     

枯草芽孢杆菌B2-GFP菌株的构建及其在土壤中的定殖

采用质粒消除与热激法构建枯草芽孢杆菌工程菌株B2-GFP,并测定其生长曲线、稳定性及对烟草疫霉的抑制率;同时,采用灌根和稀释平板法测定该菌株在烟株土壤中的活菌数.结果表明：工程菌株B2-GFP较野生型菌株B2提前1 h进入指数增长期,在培养11 h后同时进入稳定生长期;B2-GFP与烟草疫霉对峙培养后抑菌率达48.30%;在不含卡那霉素的LB固体培养基中继代培养10代后,在荧光显微镜下,菌落及菌体仍具有较强绿色荧光.烟株根际土壤活菌数大于根围土壤活菌数,且均呈现先升后降再趋于稳定的规律.在灭菌土壤中接种工程菌株B2-GFP第14天,烟株根际土壤活菌数达1.61×10⁷ CFU·g^-1;在自然土壤中接种该菌第42天,烟株根际土壤活菌数达1.46×10⁷ CFU·g^-1;接种第70天仍能保持绿色荧光表型.本研究证实工程菌株B2-GFP在烟田土壤中能够定殖并保持其特性.     

木香根腐病生防细菌的筛选与鉴定

以木香根腐病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)为指示菌,采用平板对峙培养法,从分离自健康木香植株根际土壤的324株细菌菌株中筛选具有拮抗作用的细菌,得到了2株拮抗效果好且具有较好稳定性的菌株at-21和at-97,抑菌率分别为66.8%和78.6%.在显微镜下观察发现,两株拮抗菌株对病原菌的菌丝生长有一定的抑制作用.经形态学观察、生理生化分析和16S rDNA碱基序列分析,鉴定菌株at-21为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis,菌株at-97为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis.     

核桃炭疽病高效生防菌株鉴定及抑菌活性

在对土壤有益微生物的分离、筛选中获得4株对核桃炭疽病菌具有较强抑制活性的拮抗细菌(编号分别为PF-1,PF-2,Bs-03,Bf-02)。通过对菌株的形态特征、染色反应、培养性状、生理生化特征、染色反应、培养性状、生理生化特性等试验项目,初步鉴定Bf-02为坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus),Bs-03为枯草芽孢杆菌(Bacil-lus subtilis),PF-1为幼虫芽孢杆菌(Bacillus lacivae),PF-2为短芽孢杆菌(Bacillus brevis)。采用平板对峙培养法测定4株拮抗细菌对核桃炭疽病菌抑菌活性,4株拮抗细菌对核桃炭疽病菌具有较强的抑制活性,抑菌率均达到83%以上,抑制活性最强的是PF-2,抑菌率为88.47%,与其它3株拮抗细菌的抑菌率在P<0.05水平上具有显著性差异。其次为PF-1,抑菌率为86.11%,Bs-03和Bf-02的抑菌率在P<0.05水平上无显著性差异。