响应面法优化碱性蛋白酶制备酪蛋白抗菌肽的研究

酪蛋白抗菌肽作为一种新型抗菌剂,分子量较小、热稳定性强、水溶性好、无免疫原性、对人无毒副作用等特点,可广泛应用于食品、药品、化妆品、饲料行业中。因此本研究利用碱性蛋白酶水解酪蛋白,以碱性蛋白酶浓度、酶解时间、酶解温度为影响因子,在单因素试验结果的基础上,应用Centure-Composite Design中心组合方法进行三因素三水平的实验设计,以酪蛋白水解液抑菌圈直径为响应值,运用响应面法对水解条件进行进一步的优化。结果表明：酶解温度、酶浓度、酶解时间对酪蛋白水解液抑菌圈直径影响显著;酪蛋白抗菌肽制备的最佳工艺为：水解温度为55.73℃,酶添加量为0.67%,酶解时间为66.07 min。回归方程预测酪蛋白水解液抑菌圈直径理论值可达到21.66 mm,3次验证实验的平均抑菌圈直径为21.67 mm,与理论最大值接近,可见该模型能较好地预测酪蛋白抗菌肽制备的最佳条件。     

酶膜耦联反应降解酪蛋白制备抗菌肽

利用木瓜蛋白酶降解分离酪蛋白,采用间歇式酶解反应、间歇式膜分离反应、酶膜耦联反应3种不同的模式制备抗菌肽,以金黄色葡萄球菌为指示菌,用比浊法测定抑菌率。结果表明,间歇式酶解反应所得的抑菌肽抑菌效果最差;间歇式膜分离反应组酶解时间7 min的透过液抑菌效果最好,抑菌率达23.60%;酶膜耦联反应分离后分子量<4 kDa的组分抑菌效果最佳,透过液抑菌率最高达24.10%。将酶解反应与膜分离耦合来水解酪蛋白,发现水解物的不同分子量成分与抑菌效果有关,证明此方法可用来工业化生产抗菌肽。     

酶膜耦联反应降解酪蛋白制备抗菌肽

利用木瓜蛋白酶降解分离酪蛋白,采用间歇式酶解反应、间歇式膜分离反应、酶膜耦联反应3种不同的模式制备抗菌肽,以金黄色葡萄球菌为指示菌,用比浊法测定抑菌率。结果表明,间歇式酶解反应所得的抑菌肽抑菌效果最差;间歇式膜分离反应组酶解时间7 min的透过液抑菌效果最好,抑菌率达23.60%;酶膜耦联反应分离后分子量4 k Da的组分抑菌效果最佳,透过液抑菌率最高达24.10%。将酶解反应与膜分离耦合来水解酪蛋白,发现水解物的不同分子量成分与抑菌效果有关,证明此方法可用来工业化生产抗菌肽。     

中性蛋白酶和碱性蛋白酶对玉米蛋白水解作用的研究

文章研究了中性蛋白酶和碱性蛋白酶对玉米蛋白粉中玉米蛋白的水解效果,结果表明,中性蛋白酶水解玉米蛋白的较佳水解条件是底物质量分数为2．5％、pH值为7．5、酶底比为2％、温度为50℃,水解4h水解度可达24．75％;碱性蛋白酶水解玉米蛋白粉的较佳水解条件是底物质量分数为1．5％、pH值为10.0、酶底比为1％、温度为60℃,水解4h水解度可达31．04％。     

猪中性粒细胞中抗菌肽的提取及体外抗菌活性研究

抗菌肽是生物体内诱导表达具有广谱抗菌活性的小分子多肽。这些多肽是生物体非专一性的免疫应答产物,是生物体内免疫系统的重要成分。目前国内关于猪源抗菌肽的研究,主要针对于猪的小肠中的抗菌肽,而猪血中抗菌肽的提取及抗菌活性研究在国外虽已有少量报道,在国内却未见报道。由于猪血液中白细胞是免疫系统中起主要作用的免疫细胞,而其中性粒细胞约占白细胞总量的70%,从猪血液中性粒细胞中分离提取抗菌肽也就比较合理。因此本实验采用从猪血液中性粒细胞中分离提取小分子多肽,根据小分子多肽抗菌活性特点进而分离鉴定出抗菌多肽。同时,通过优化提取工艺,提高抗菌肽的得率和含量。     

2种昆虫高活性抗菌肽制备方法的优化

以黄粉虫(Tenebrio molitor)幼虫和甜菜夜蛾(Spodoptera exigua Huber)幼虫为材料,比较了针刺蘸大肠杆菌、针刺蘸高效氯氰菊酯、紫外线照射、饥饿等诱导方式对抗菌肽活性的影响,并对其提取方法及特性进行了研究.结果表明,几种处理方式均能诱导2种昆虫产生抗菌肽,以针刺蘸大肠杆菌法得到的抗菌肽的抑菌活性最强,其次是针刺蘸高效氯氰菊酯法,饥饿处理法的活性最弱.用1 mol/L乙酸铵溶解抗菌肽抑菌活性提高;在pH 5～9的条件下处理抗菌肽对其活性影响不大;反复冻融活性下降.     

水飞蓟源抗菌肽的制备与抑菌性初探

本研究以水飞蓟为原料制备抗菌肽,并以四种细菌作为指示菌对其进行了抑菌性初探。结果表明:水飞蓟源抗菌肽对受试菌株均具有一定的抑菌作用,以革兰氏阳性菌较为敏感、革兰氏阴性菌次之。推测其抑菌机理可能与菌体细胞壁结构有关。     

卡那霉素人工抗原的制备及鉴定

为了人工制备卡那霉素完全抗原。将卡那霉素标准品与牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)偶联,制备人工抗原。利用两种不同的偶联方法：碳二亚胺法(EDC)和戊二醛法(GDA),分别制备出KAN-BSA（作为免疫原）,KAN-GDA-OVA（作为包被原）。利用SDS-PAGE凝胶电泳鉴定和动物免疫试验等,鉴定了完全抗原偶联情况。结果显示：制备的卡那霉素完全抗原能刺激小鼠机体产生相应抗体,且抗血清效价均达到1:2.56×10⁴,其中一号小鼠的IC₅₀值为22.28 ng/mL,说明完全抗原免疫原性良好,抗原制备成功。     

抗菌肽的研究现状及应用前景

抗菌肽是一类广泛存在于生物界的活性多肽,具有广谱抗菌性、热稳定性好、抗菌机理独特等优点,成为医药、食品、畜牧业的研究热点。综述了抗菌肽膜损伤型和非膜损伤型的抗菌机理,不同来源获得抗菌肽及其在医药领域和食品领域的应用前景和存在问题。天然抗菌肽的推广及应用关键在于能否高效获得,并降低其生产成本。     

耐高温中性蛋白酶产生菌株KN1的部分酶学性质及发酵条件的研究

为了给酶的应用提供理论依据,采用Folin-酚法测定蛋白酶活性,通过单一变量控制对KN1菌株的蛋白酶酶学特性和发酵条件进行研究。该酶的最适作用温度为75℃,最适作用pH值为7.5,Cu2+离子对酶活有促进作用;EDTA对酶活有明显的抑制作用,而PMSF对酶活的抑制作用小,推测KN1菌株产生的是一种金属蛋白酶;经SDS处理后KN1的蛋白酶仍能保持较高的活性。KN1菌株的蛋白酶的最佳发酵条件为37℃培养4天,最佳碳源为玉米粉,最佳氮源为豆饼粉。KN1菌株的蛋白酶是一种耐高温中性蛋白酶,最适作用温度达到75℃,在最适合条件下,酶活性可达1498.84 U/mL,具有良好的应用前景。     

乳酪蛋白肽的固定化酶法制备工艺研究

以壳聚糖为载体,戊二醛溶液为交联剂,制备固定化木瓜蛋白酶。试验分析了壳聚糖浓度、给酶量、交联时间及戊二醛浓度对木瓜蛋白酶固定化效果的影响,并初步探讨了固定化木瓜蛋白酶水解制备乳酪蛋白肽的工艺。     

利用抑菌率对羊骨酶解产物的制备中最佳用酶的筛选

利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、动物蛋白酶、酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶分别在各自最适条件下对羊骨进行酶解,以大肠杆菌、枯草杆菌和藤黄球菌为供试菌种,以抑菌性为指标,对7种酶作用下所得酶解产物的抑菌性进行评定,以选出水解最佳用酶。结果表明,在各自最适条件下,胃蛋白酶酶解产物(pH值为3.0,37℃,底物质量浓度0.2kg/L,酶添加浓度2000U/g,作用时间6h)的抑菌效果最佳。     

牦牛乳酪蛋白酶解产物抗氧化活性研究

为了研究藏区牦牛乳源抗氧化肽活性,对复合蛋白酶优化工艺制取的牦牛乳酪蛋白酶解液进行体内、体外抗氧化试验。以1,1-二苯-2-苦肼基自由基(DPPH·)、超氧阴离子自由基(O₂^-·)、羟自由基(·OH)清除率及还原力为体外评价指标,以小鼠体重、脾脏质量、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSG-Px)活力为动物试验评价指标。结果表明:当酶解液蛋白浓度在0~50.0 mg/mL时,对DPPH·、O₂^-·、·OH均具有一定的清除能力,在0~30.0 mg/mL时,DPPH·清除率和·OH清除率均随着蛋白浓度的升高而提高,酶解液蛋白浓度为50.0 mg/mL时对DPPH·、O₂^-·和·OH的清除率分别达到66.45%±1.59%、60.40%±1.96%和46.02%±2.26%,另外还原能力也达到了1.775±0.004,具有较强的抗氧化活性,但都始终低于VC。小鼠试验结果表明,小鼠的体重及脾脏指数与对照组相比,中剂量组和高剂量组均有显著增加,其中脾脏指数最高增加了17.01%。与对照组相比,低、中及高剂量组小鼠血清中SOD活力与GSH-Px活力均有提升,MDA含量有一定程度的下降。因此说明牦牛乳酪蛋白酶解产物具有一定的抗氧化活性。     

牛气管抗菌肽在山羊乳腺组织中的表达

根据已经发表的牛气管抗菌肽（bTAP）cDNA序列设计4条短的寡核苷酸片段,以重叠延伸PCR的方法合成bTAP基因,将其克隆至pMD-18T载体,序列测定正确后,构建bTAP基因的乳腺组织特异性表达载体pBcp-bTAP,将其溶于生理盐水后直接注射山羊乳腺小叶,使bTAP基因在乳腺组织内表达,收集注射质粒前后的奶样,测试奶样对金黄色葡萄球菌,大肠杆菌的抑制能力,结果显示注射pBcp-bTAP后的奶样表现出对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有明显的抑制作用,这种抑制活性可以持续至20h以上。     

菜籽粕酶解条件的研究

以菜籽粕为原料,以水解度为衡量指标,对碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的作用进行了比较,确定采用碱性蛋白酶、酸性蛋白酶进行水解菜籽粕。考察了不同料液比对碱性蛋白酶、酸性蛋白酶酶解菜籽粕的影响,结果表明,当料液比为1∶15时,水解度可达10%。对碱性蛋白酶和酸性蛋白酶联合水解菜籽粕进行了研究。结果表明,先用2400U/g碱性蛋白酶水解2h后,再用2400U/g的酸性蛋白酶水解4h,菜籽粕的水解度为15%。     

酪蛋白结构及其酶解特性研究进展

酪蛋白是牛奶中的主要蛋白成分,因其酶解产物中可分离出多种生物活性肽而广受关注。综述了酪蛋白的结构及其酶解特性的研究进展。酪蛋白由α_(s1)-酪蛋白、α_(s2)-酪蛋白、β-酪蛋白与κ-酪蛋白4种组分组成,在溶液中以胶团形式存在,其稳定性除与κ-酪蛋白有关外,还受到外界环境的影响,然而对于酪蛋白胶团内部结构的推断仍存在争议。此外,全酪蛋白及其组分的酶解特性也得到了较深的研究,包括推断酶解反应历程、酶解产物分子量分布变化、蛋白结构功能特性的变化及生物活性肽段序列的确定等。     

制备高得率豌豆多肽工艺参数的研究

采用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶和中性蛋白酶制备豌豆肽,并采用单因素试验方法进行了不同底物质量分数、水解时间、不同酶与底物质量比对豌豆肽的水解度及肽得率的影响,最终筛选出制备高得率豌豆肽的工艺参数为:碱性蛋白酶、底物质量分数7%,酶与底物质量比3%,水解3 h的水解产物具有较高的水解度和肽得率。     

一个棉花黄萎病抗菌肽基因25a2的克隆与表达

 将棉花黄萎病抗菌肽A2的N端15个氨基酸序列在NCBI进行同源序列比较,根据同源蛋白的DNA序列设计引物,以解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）RS-25菌株基因组为模板,应用PCR扩增出一条约300 bp的DNA片段。序列分析表明,DNA片段长354 bp,编码117个氨基酸,将该基因命名为25a2。构建表达载体pET-28a-25a2,转化大肠杆菌（Eschrichia coli）BL21,37℃培养,应用终浓度为1 mmol·L^-1的IPTG诱导,表达产物经SDS PAGE分析,得到分子量约15 kDa表达蛋白条带,与理论蛋白分子量相符。