促卵泡素与促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

探讨了促性腺激素(FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,最终找到了其合理的使用剂量。在成熟液中添加LH浓度分别为1,5,10 IU/mL时,与没有添加FSH与LH的对照组(15.9%)相比,成熟率有显著提高,成熟率分别为49.1%,30.0%,36.3%。LH浓度为1 IU/mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组(p<0.05);然后以成熟液中只添加1 IU/mL LH为对照组,实验组分别添加1,5,10 IU/mL FSH。试验结果表明:添加FSH浓度为5和10 IU/mL时其成熟率分别为40.1%,27.6%,低于对照组(49.0%)。添加FSH浓度为1 IU/mL时其成熟率(49.1%)高于对照组(49.0%),但差异不显著。两组试验同时得出,随着LH与FSH添加浓度逐渐增加,成熟率呈下降趋势。通过本试验结果得出,在体外成熟培养猪卵母细胞时,各添加1 IU/mL LH与FSH时,得到最佳的成熟效果。     

激素对牛卵母细胞体外成熟的影响

研究了促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)和17 β雌二醇(17β-E2)分别使用时对牛卵母细胞体外成熟的作用.结果表明,这三种激素单独使用时,都具有促进牛卵母细胞体外成熟的能力.在低浓度范围内,随着激素浓度的上升成熟率也上升,FSH和LH在50μg/mL,17β-E2在20μg/mL浓度时达到最好成熟效果.     

山羊卵母细胞的体外成熟研究

1.比较了在卵母细胞成熟液中添加相同浓度(10ng/ml)的表皮生长因子(EGF),胰岛素样生长因子(IGF),EGF IGF后,不同生长因子对卵母细胞体外发育率的影响。结果表明,在成熟培养液中添加EGF后,其卵母细胞的成熟率(70.9%)与对照组(67.3%)相比有所提高,但差异不显著;在成熟培养液中分别添加IGF、EGF IGF,其卵母细胞的成熟率分别为80.0%,82.4%,显著高于对照组卵母细胞的成熟率(67.3%)。2.比较了不同季节采集的卵母细胞在体外成熟的情况。结果发现,12月份到来年的1月份,采集的卵母细胞,其体外成熟率最高,为81.0%;11月份采集的卵母细胞,其体外成熟率次之,为74.1%;3—5月份和9—10月份采集的卵母细胞,其体外成熟率为66.0%、69.6%;6—7月初采集的卵母细胞,其体外成熟率最差,为54.7%。3.比较了OM液pH值对卵母细胞体外成熟的影响。当OM培养液的pH值为7.2和6.8￣7.0时,卵母细胞成熟率的为66.2%和61.0%,显著高于pH≥7.5时的成熟率(50.9%,P<0.05)。     

猪腔前卵泡卵母细胞体外成熟培养初探

【研究目的】为了进一步挖掘猪的遗传潜力,为体外受精、动物克隆和转基因等胚胎生物技术研究提供大量优质卵源。【方法】以极体排出情况为判断标准,采用一步法和两步法成熟培养猪腔前卵泡卵母细胞,来考察猪腔前卵泡卵母细胞最佳成熟方式。【结果】采用任何一种方法卵母细胞经体外成熟后都没有达到MⅡ。然而,腔前卵泡体外培养5d后,分离出的卵丘卵母细胞复合体再培养12d,卵母细胞平均直径达到102.68μm(102.68±12.21),接近正常成熟卵母细胞的体积,为卵母细胞的成熟创造了条件。【结论】用两步法培养猪的腔前卵泡,其卵母细胞能够达到接近正常成熟卵母细胞的体积,说明采用两步法培养猪腔前卵泡卵母细胞是可行的。     

山羊卵泡卵母细胞体外成熟的研究

为了建立针对山羊卵母细胞的理想体外成熟培养体系,对山羊卵泡卵母细胞的采集方法,FSH和LH对山羊卵泡卵母细胞体外成熟的作用,及培养时间对卵母细胞体外成熟的影响进行了研究。结果表明:采用切割法平均每枚卵巢采集到的A,B级卵母细胞的数量明显多于抽吸法;采用TCM199添加体积分数为10?S,1~2 mg/L 17β_E2,10 mmol/L Hepes,0.12 mg/mL丙酮酸钠,0.1 mg/mL链霉素和0.125 mg/mL青霉素,10 mg/L FSH及20~50 mg/L LH的培养体系,有利于山羊卵母细胞的体外成熟,并放出第一极体。山羊卵母细胞体外成熟培养20,22,24 h,成熟率显著高于培养18,26,30 h(P<0.05)。     

外源性孕酮对牛卵母细胞体外核成熟的影响

了研究外源性孕酮对牛卵母细胞体外核成熟的作用,通过向成熟培养液中添加10 μg/mL FSH +10 μg/mL LH（对照组）和0 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL、1000 ng/mL的外源性孕酮,对牛卵丘卵母细胞复合体进行体外成熟培养,在培养8 h后用醋酸地衣红染色观察各自的生发泡破裂率,然后在成熟22 h统计第一极体率,体外受精后7~8天统计囊胚率。结果表明,对照组卵母细胞的生发泡破裂率(75.0%)和极体率(79.6%)均明显高于添加不同浓度孕酮的各处理组(P<0.05),而囊胚率各组之间均无显著差异(P>0.05)。因此,外源性孕酮不能促进牛卵母细胞的核成熟,单独添加外源性孕酮不能起到与内源性孕酮相同的作用。     

EGF对牛卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响

在卵母细胞体外成熟液（含FSH）中分别添加10,30,50ng/ml表皮生长因子（EGF）,24h检查成熟率,并进行孤雌激活。结果表明：添加10ng/ml、30ng/ml EGF组牛卵母细胞成熟率较对照组（未添加EGF）无显著差异（79.8% vs 71.5% vs 70.4%,p>0.05）,但EGF添加至50ng/ml时牛卵母细胞第一极体排出率显著提高,达85.4%（P<0.01）;在实验1的基础上,比较培养液中添加10ng/ml、30ng/ml 、50ng/ml EGF对牛孤雌激活胚胎体外发育的影响,结果发现在培养液中添加EGF并不能显著提高牛卵母细胞体外孤雌发育囊胚率（P>0.05）,但可显著提高其囊胚孵化率（P<0.01）。     

成熟液中添加白藜芦醇对猪卵母细胞体外发育和抗冻能力的影响

为探究猪卵母细胞成熟培养液中添加白藜芦醇(Resveratrol,RES)对其体外发育与抗冻能力的影响。本试验通过添加不同浓度的RES,观察其对卵母细胞体外发育和相关基因的表达的影响;通过OPS(Open Pulled Straw)玻璃化冷冻和解冻,观察RES对卵母细胞冷冻前后线粒体功能、凋亡和发育能力的影响。结果表明：(1)成熟培养液中添加2 μmol/L RES有利于提高猪卵母细胞的体外成熟和发育能力,提高RES浓度至10 μmol/L时则表现为细胞毒性作用;(2)添加2 μmol/L RES可显著提高卵母细胞Sirt1,MATER,SOD1和Bcl2基因的表达量,并显著降低c-mos,MAPK和Mfn2的表达;当RES添加量增至10 μmol/L时,卵母细胞凋亡相关基因的表达呈现出促凋亡状态;(3)添加RES后,成熟卵母细胞在冷冻前后的ROS水平均要低于未添加组,ATP含量和线粒体膜电位值则高于未添加组;(4)成熟液中添加RES后,卵母细胞冻后FDA染色存活率和孤雌激活卵裂率均高于未添加组,,早期凋亡率则低于未添加组,其中FDA染色存活率差异显著。综上所述,2 μmol/L的RES在猪卵母细胞成熟液中添加,可通过改善其发育和凋亡相关基因的表达,提高线粒体功能,达到提高卵母细胞发育和抗冻能力的目的。     

CdCl2对牛卵母细胞体外成熟及凋亡的影响

利用不同浓度(0,0.8,1.6,2.4 μg/mL)的氯化镉(CdCl2)对处理牛卵母细胞前后对其成熟率、凋亡率、Ca2分布、线粒体膜电位、Bcl-2与Bax的基因表达的影响,初步为重金属对雌性哺乳动物生殖细胞发育及细胞凋亡机制的进一步研究打下基础.利用0,0.8,1.6,2.4 μg/mL的氯化镉(CdCl2)处理...     

猪卵母细胞冷冻损伤的研究进展

卵母细胞冷冻保存技术的发展为体外受精、核移植以及转基因动物生产等胚胎工程技术提供了极大的灵活性,同时为家畜保种及珍稀濒危动物的保护提供了新的技术途径。在此,综述了以猪为主的家畜卵母细胞的冷冻保存的原理及冷冻保存对卵母细胞超微结构和发育潜力的影响,以期为猪卵母细胞的冷冻保存研究提供一定的理论参考,从而提高猪卵母细胞冷冻后的成活率和体外受精生产效率。     

来源和质量不同对山羊卵母细胞体外成熟率的影响

比较了卵母细胞级别对体外成熟率的影响,以及促卵泡素(FSH)处理山羊对卵母细胞采集的数量和质量的影响。结果表明:卵母细胞级别对体外成熟率有显著影响,不论是来源于FSH处理卵巢还是屠宰场卵巢,均是A、B级卵母细胞的成熟率高于C级卵母细胞,差异极显著(P<0.01)。但是A、B级卵母细胞之间差异不显著;卵巢来源对卵母细胞采集的数量和质量有显著影响,A、B级卵母细胞在获卵总数中所占的比例,平均每个卵巢获卵母细胞数及A、B级卵母细胞数,均是FSH处理卵巢高于屠宰场卵巢,差异显著(P<0.05);卵巢来源对卵母细胞体外成熟率有显著影响,来自于FSH处理卵巢的卵母细胞体外成熟率高于屠宰场卵巢(81.6%比67.6%),差异极显著(P<0.01)。     

组织蛋白酶抑制剂E-64对猪卵母细胞体外发育能力的影响

为探明外源性组织蛋白酶抑制剂(E-64)对猪卵母细胞体外发育能力的影响,通过向成熟液中添加1、5、10μmol/L的外源性组织蛋白酶抑制剂,对猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)进行体外成熟培养46 h,统计第一极体率,随后分别进行体外受精和孤雌激活,统计第2天的卵裂率和第7天的囊胚率。结果表明,成熟液中加入1μmol/L E-64的第一极体排出率显著高于未添加的对照组以及5、10μmol/L E-64的添加组。将体外成熟的卵母细胞进行体外受精及孤雌激活,体外受精后胚胎的卵裂率与囊胚率结果均为成熟液中加入1μmol/L E-64的添加组显著高于对照组以及5、10μmol/L E-64的添加组;孤雌激活后,4组间胚胎的卵裂率差异不显著,囊胚率为10μmol/L E-64的添加组显著低于其他3组。因此1μmol/L E-64能促进猪卵母细胞的核成熟,并能进一步提高其体外受精后的卵裂率和体外培养的囊胚率。     

山羊卵泡卵母细胞的采集及体外成熟效果研究

为了获取高质量的卵泡卵母细胞，提高山羊体外胚胎生产的效率，采用切剖法与抽吸法采集卵泡卵母细胞，并对获得的可用卵母细胞进行了体外成熟培养。结果表明，切剖法能够获得较多的可用卵母细胞，可以明显增加用于体外成熟的卵母细胞数；卵母细胞的体外成熟率与卵泡直径密切相关，大卵泡与中卵泡的卵母细胞成熟率明显高于(P<0.05)小卵泡；山羊卵泡卵母细胞的体外成熟培养液中FCS的添加比例以10% ~ 15%为益。在一定范围内，提高FCS的浓度，并不能提高卵母细胞的成熟率。