木聚糖酶高产菌株的筛选、鉴定及其酶学性质研究

试验以玉米芯粉为唯一碳源,通过富集培养定向筛选技术,从土壤中分离获得一株产木聚糖酶较高的霉菌菌株X-1,经初步液体发酵木聚糖酶活高达724.63 U。依据《真菌鉴定手册》初步鉴定该菌株为黑曲霉(As-pergillus nigeer)。同时对该菌株所产木聚糖酶的酶学性质进行了研究,结果表明:该木聚糖酶的最适作用温度为45℃,最适pH值为6.0;在70℃保温30 min后酶活力仍为90%以上;在pH3.0~7.0范围内稳定性较好,酶活仍为90%以上。     

一株产脂肪酶海洋细菌的筛选、鉴定及其酶学性质

【目的】研究海洋环境中产脂肪酶菌株的形态、生理生化特性及其所产胞外脂肪酶的酶学性质。【方法】以三丁酸甘油酯作为唯一碳源,利用平板涂布法从黄海胶州湾海泥中筛选到一株产脂肪酶的菌株,对其进行形态、生理生化和分子水平的鉴定,并对其产生的脂肪酶的部分酶学性质进行研究。【结果】产脂肪酶的菌株为薄壁芽孢杆菌属(Gracilibacillus)成员,命名为Gracilibacillus sp.DN-X7。酶学性质研究表明:对该菌所产脂肪酶的最适作用温度、pH和NaCl质量浓度分别为60℃、pH 9.0和30g/L。稳定性试验表明,该酶具有良好的耐热、耐碱和盐稳定性。甘氨酸甜菜碱的存在能够显著提高酶的热稳定性,60℃保温30min酶活力仍保持46%以上。底物特异性试验结果表明DN-X7菌株所产酯裂解酶是脂肪酶,能够分解不同种类的甘油酯和植物油。【结论】分离得到了一株能够产耐热、耐盐的碱性脂肪酶的海洋细菌。     

产脂肪酶菌株的筛选、鉴定以及酶学性质的研究

【目的】筛选高产脂肪酶菌株并鉴定其种属,研究脂肪酶的酶学性质.【方法】以橄榄油为唯一碳源对富含油污土壤中产脂肪酶微生物进行富集培养,用中性红平板进行初筛,结合改进铜皂分光光度计法测定酶活力;对筛选的高产脂肪酶菌株进行形态学观察和相关生理生化实验,再结合16S rDNA序列分析确定其种属;确定该菌株所产脂肪酶的最适作用温度和pH值,并研究金属离子、有机溶剂以及表面活性剂对酶活的影响.【结果】筛选得到一株高产脂肪酶菌株LZ-5,其所产脂肪酶的酶活力为4.78 U/mL;菌种鉴定为表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis).该酶最适作用温度为40℃,最适pH值为9.0;Ca~(2+)、Mg~(2+)对酶活力有促进作用,Fe~(2+)、Zn~(2+)、EDTA、SDS、甲醇和乙醇对酶活力有抑制作用,对Na~+、K~+、丙三醇的耐受力较高.【结论】成功分离一株表皮葡萄球菌高产脂肪酶菌株.     

产碱性纤维素酶真菌的筛选鉴定及酶学性质研究

经过初筛和复筛从从碱性土样中分离出的7株产纤维素酶的真菌中获得1株能够产碱性纤维素酶的丝状真菌t42。经18SrRNA基因序列分析和,确定该菌株为镰刀霉菌（Fusarium sp）。酶学性质初步研究显示t42的CMC酶最适作用pH值为7．5,在pH值7．0～8．5的范围内具较高的稳定性：反应温度以50℃左右为宜,且在55℃以下具有较高的温度稳定性;Mg^2＋、Mn^2＋和Zn^2＋对酶反应有促进作用,Pb^2＋和Cu^2＋对酶反应有抑制作用。     

高产几丁质降解酶菌株的分离鉴定及其酶学性质研究

从海南热带海洋红树林土样中分离得到一株高产几丁质酶菌株HN12,经形态、生理生化和16S rDNA基因手段鉴定,其为一新种,命名为Chitiniphilus haikoumanggrovensis(GenBank No.HQ877498,type strain CGMCC No.5142)。单因素试验研究菌种酶学性质,结果显示:其最适酶反应温度为50℃,但在此温度下酶活力下降较快,综合酶的温度耐受性,酶促反应温度定为40℃;最适酶促反应pH值为7.0;在测试的9种金属离子中,未发现有金属离子能提高酶活力;酶解产物主要为几丁四糖;在优化后的酶解反应条件下测定酶活力达到2.1 U/mL。     

产甘露聚糖酶细菌的分离鉴定、酶的部分纯化及酶学性质研究

以魔芋粉为惟一碳源作为富集条件,利用刚果红染色法从玉米地土壤中筛选到1株产β-甘露聚糖酶的菌株,经摇瓶培养后其酶活力达到101 U/mL。经形态观察及16S rDNA序列分析,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析和疏水层析对酶进行了部分纯化。对酶的酶学性质研究发现,该酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为5.0;在45~55℃时酶的稳定性较好,保温30 min后其残留活性在80%以上,在pH4.5~5.5时酶的稳定性较好,保持30 min后其残留活性在80%以上。     

水稻几丁质酶的表达及其酶学基本性质

利用甲醇诱导重组Pichia pastoris在发酵罐中表达几丁质酶,在发酵过程中根据溶氧变化控制甲醇流加速度.结果显示,蛋白表达量随菌体密度的增加而增加,酶活最高达56 U/ml.该几丁质酶具有良好的耐热性和pH适应性,在pH 2.0和pH 5.0有2个最适反应pH;在pH 3.0稳定性最好;40 ℃为其最适反应温度;在60 ℃保温3 h仍保持81%的酶活性;该几丁质酶对病原菌生长有一定程度抑制作用.     

产几丁质酶芽孢杆菌的筛选鉴定和酶活力测定

从103份采自中国各地的土样中分离得到了312株芽孢杆菌，用平板透圈法筛选到3株产几丁质酶菌株G1、G2和G3。经鉴定，G1为短芽孢杆菌（Bacillus brevis）；G2为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）；G3为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。它们的几丁质平板上的透明圈直径以G1＞G3＞G2 ，在以Schales‘法测定壳聚糖酶活力时，其摇瓶发酵上清液的酶尖力以G3＞G1＞G2为序。本文首次报道短芽孢杆菌产生几丁质酶和壳聚糖酶。     

耐甲醇脂肪酶产生菌的筛选鉴定及其酶学性质研究

[目的]筛选耐甲醇脂肪酶产生菌,并对其酶学性质进行研究。[方法]采用培养基中添加不同浓度甲醇（0、5%、10%、15%、20%）的方法筛选甲醇耐受性脂肪酶产生菌,形态学和ITS序列分析确定菌株的种属关系,硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sepharose FF纯化脂肪酶,并对纯化的酶进行耐甲醇试验和酶学性质研究。[结果]筛选到183株脂肪酶产生菌,菌株SXL-107对浓度20%甲醇具有较好耐受性,脂肪酶活力达104 U/ml;ITS同源性分析确定该菌为Galactomyces geotrichum;经过纯化的SXL-107脂肪酶在浓度10%甲醇溶液中作用48 h后,剩余酶活为96.15%;该酶最适温度为40℃,pH为7.0,50℃温浴60 min仍有80%的酶活力,在pH 4.0~9.0间稳定,微量的Mg2＋、K＋和Zn2＋对该酶有激活作用,Mn2＋和CO2＋有抑制作用,分子量约为66 kDa。[结论]筛选到一株耐甲醇能力较强的脂肪酶产生菌,为该酶在生物柴油中的应用奠定基础。     

毛壳菌几丁质酶的酶学性质及抑菌活性研究

【目的】研究毛壳菌(Chaetomiumsp.YMF1.00843)产胞外几丁质酶的酶学性质及抑菌活性,为几丁质酶的抑菌作用机理研究提供依据。【方法】利用蛋白活性电泳方法纯化几丁质酶液,测定几丁质酶的酶学性质,并用酶液浸泡病原菌菌块,研究酶液的抑菌活性。【结果】用蛋白活性电泳方法得到几丁质酶的纯酶液,经检测为电泳纯条带,分子质量为43ku。毛壳菌几丁质酶的最适反应温度为40℃,最适pH为6,40℃以下保温30min均能保持其初始活性,在pH 5~9保温30min仍旧具有较高的活性,Ca2+和Zn2+能明显增强几丁质酶的活性,其纯酶液能抑制立枯丝核菌和烟草赤星病菌的菌丝生长。【结论】毛壳菌几丁质酶在比较温和的条件下能保持一定的活性,纯酶液对部分病原真菌有较强的抑制作用。     

1株产几丁质酶菌株的鉴定

为向几丁质酶资源的开发提供研究基础,鉴定1株具有较高产几丁质酶活性的菌株,将未知菌株CB5-13活化后,经形态、生理生化及16S rDNA序列鉴定未知茵.结果表明:经鉴定该茵属链霉菌属,命名为左氏链霉菌CB5-13(Streptomyces drozdowiczii CB5-13),是一种新的几丁质酶产生茵.原核生物经形态、生理生化及16S rDNA序列分析后,鉴定结果可信,方法可行.     

一株硫酸盐还原菌DSRBa的分离鉴定及特性分析

从内循环厌氧反应器颗粒污泥中分离、纯化得到一株硫酸盐还原菌命名为DSRBa,经形态和基于16SrDNA序列分析,该菌株归属于脱硫弧菌属(Desulfovibrio)。分别以甲酸钠、乙醇、乳酸钠、葡萄糖等为碳源,以硫酸盐、硫代硫酸盐、亚硫酸盐、单质硫为硫源,研究了不同温度、pH及不同硫酸根浓度对该菌株的影响。结果表明,菌株最适宜生长温度为30～35℃,最佳生长pH为7.0,无需绝对严格厌氧,当溶液中氧化还原电位(ORP)≤-40mV时,该菌株能较好生长,且生长4d后使溶液内氧化还原电位值达到-380mV,随后溶液内氧化还原电位基本保持不变。当系统内乳酸钠和酵母提取物浓度分别为3.5g·L-1和1g·L-1时,硫酸根浓度在1～4.5g·L-1范围对菌株生长无明显影响,且当SO24-浓度≤3g·L-1时,菌株生长4d对硫酸根的去除率达到90%以上。     

纤维素降解菌T-6的分离鉴定及产酶条件

从东北地区的自然环境中初步筛选得到多株纤维素酶高产菌,经过滤纸糖化能力(FPA)、羧甲基纤维素钠酶活力(CMCase)和滤纸崩解能力及失重率测定,获得1株菌T-6,CMCase为65 U、FPA为82.4 U,在培养的第7天滤纸崩解成糊状、失重率为50%。形态、生理生化鉴定和16Sr DNA基因序列鉴定该菌株为缺陷短波单孢菌(Brevundimonas diminuta)。该菌最佳产酶条件:玉米粉0.2%,大豆粉0.5%,K_2HPO_40.6%,Tween-80 0.03%,pH 7.0,培养温度30℃,接种量1%,优化后CMCase达76 U、FPA达92 U。     

纤维素降解菌的分离、鉴定及其产酶特性研究

从纤维素富集的环境中分离到3株能以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为唯一碳源的纤维素降解菌,采用纤维素-刚果红染色法进一步筛选,获得透明圈较大的菌株1株,命名为为B1。经菌落、菌体形态观察、生理生化实验及分子生物学鉴定,初步确定为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus),该菌株表现出了较高的滤纸崩解能力和较高的纤维素酶活力。通过培养条件的优化,发现该菌株在起始p H值为5.0的培养基中,37℃培养36 h,其纤维素酶活力可达64.22 U/m L。     

灭线磷降解菌DS-1的分离鉴定及其降解特性

【目的】筛选能降解灭线磷的微生物,解决土壤环境中存在的灭线磷残留问题。【方法】从长期施用灭线磷的土壤中采集土样,通过富集培养方法分离能降解灭线磷的微生物。用紫外分光光度法测定灭线磷的含量。【结果】获得一株能以灭线磷为唯一碳源生长的细菌DS-1,结合生理生化特性及16SrDNA序列相似性分析将其鉴定为蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)。生长特性和灭线磷降解试验结果表明,灭线磷浓度为10mg·L-1时降解率最高为77.1%,50mg·L-1的相对降解量最高为26.8mg·L-1;DS-1在温度为30℃时对灭线磷的降解率为51.6%,显著高于4℃、25℃以及40℃的降解率。【结论】DS-1降解灭线磷的最适温度为30℃,最适pH为7.0,最佳碳源和氮源分别为蔗糖和硫酸铵,最佳碳氮摩尔比为4:1。     

一株低温脂肪酶产生菌的筛选鉴定及酶学特性

[目的]分离获得低温脂肪酶产生菌和研究其酶学特性.[方法]对采自阿勒泰等地区的75份土样中脂肪酶产生菌进行富集和筛选,目的菌株经16S rRNA基因序列比对鉴定后,对其产生的脂肪酶进行酶学特性分析.[结果]菌株N6-12归属于假单胞属菌,可能为新种;其产生的脂肪酶的最适催化温度为30℃;酶催化的最适pH为6.5;金属离子Cu2、Fe3+等对酶有较大的抑制作用,而Na+对酶有激活作用.[结论]菌株N6-12产生的脂肪酶属于低温脂肪酶.     

甲醇降解菌的筛选、鉴定及其特性研究

为了更有效的治理工业废水污染，实验以甲醇作惟一碳源，利用富集培养的方法从化工厂活性污泥中分离到一株甲醇降解菌CYW-32，经对其形态特征、生理生化及16SrDNA序列分析，将菌株鉴定为嗜有机甲基杆菌（Methylobacterium organophilium）。通过比色酸法明确了菌株CYW-32在24h内可高效降解500mg·L^-1的甲醇，降解率达到97．75％。进一步分析环境因素对菌株生长的影响，确定了最佳培养条件为pH值7．0，温度32℃，转速150r·min^-1，装液量为100mL／250mL。同时证实了菌株CYW-32对甲醇的降解为胞内酶代谢途径。甲醇降解菌株的筛选为工业废水的生物处理提供了基础。     

石油污染土壤中高效苯酚降解菌的分离鉴定及特性研究

[目的]从石油污染土壤中分离高效苯酚降解菌,对其进行鉴定,并研究其特性,为含酚废水的处理及环保工程菌株构建奠定基础,具有一定的理论和实际应用价值。[方法]从四川省南充市炼油厂附近石油污染土壤中筛选、驯化得到1株高效苯酚降解菌株XH-10。通过形态学、生理生化特性研究及16S rDNA进化分析对其进行鉴定。最后,对XH-10的生长和苯酚降解特性进行研究。[结果]XH-10为短杆、革兰氏阴性、端生鞭毛、无荚膜,16S rDNA与多株黏质沙雷氏菌（Serratia marcescens）的同源性高达99.2%,初步确定XH-10为黏质沙雷氏菌属。XH-10最适生长和降解苯酚的温度为20~35℃,最适pH为6.0~9.0;24 h内对10 mmol/L的苯酚降解率达到99.29%,在含有20 mmol/L苯酚的无机盐培养基中该菌也能生长。[结论]XH-10具有很强的适应能力和苯酚降解能力,可用于高浓度含酚废水的生物处理,有较高的研究及应用前景。     

维氏气单胞菌几丁质酶ChiC的性质和与几丁质结合蛋白协同作用的研究

为了探索维氏气单胞菌B565低酶活几丁质酶ChiC的性质及突破其低酶活的应用瓶颈,构建了重组ChiC毕赤酵母工程菌GS115/PIC9\|ChiC,进行甲醇诱导表达纯化,研究其基本酶学性质。结果表明,ChiC在毕赤酵母中分泌表达,甲醇诱导48 h后,达到摇瓶水平最大表达量232.6 mg/L。ChiC最适反应pH为8.0,温度为40℃。最适反应条件时比活力为7.6 U/mg。ChiC具有较宽的pH及温度适应性,在pH 3.0~10.0,40℃或者0~40℃,pH 7.0, 均可以保持80%以上最适酶活力。同时几丁质结合蛋白CBP21于大肠杆菌中实现胞内可溶表达,其表现出对虾壳几丁质和胶体几丁质的具有不同的结合能力。但CBP21促进ChiC降解胶体几丁质的能力(提高约9倍)明显高于其促进ChiC降解虾壳几丁质的能力(提高约2倍)。上述结果为该几丁质酶基因的深入研究奠定了理论基础,为突破该低酶活几丁质酶的应用瓶颈提供了一种可能的解决方案。     

新疆酸马奶中优良乳酸菌的分离鉴定及发酵特性分析

从新疆地区自然发酵酸乳中分离到25株乳酸细菌,通过在牛乳中的传代发酵试验筛选出3株遗传性状稳定、凝乳状态好、风味独特乳酸菌菌株,其中杆菌1株,球菌2株,经形态特征、生理生化特性和16 Sr DNA序列同源性分析,将菌株5-3鉴定为肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides),菌株6-7鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),菌株1-6鉴定为嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus),同时对3株菌进行发酵性能测定及感官综合评价,结果表明:3株菌都具有较好的发酵性能和良好的发酵风味.