茶叶中东莨菪素和东莨菪苷的测定及相关基因表达

东莨菪素和东莨菪苷是香豆素类化合物,具有多种生物活性,是传统中药丁公藤类生药的主要活性成分.茶树多酚、生物碱等次生代谢物丰富,但有关东莨菪素和东莨菪苷代谢相关的研究还鲜有报道.本研究建立了利用高效液相色谱测定茶叶中东莨菪素和东莨菪苷的检测方法,东莨菪素的平均回收率为93.5%,相对标准偏差(RSD)为2.64%;东莨菪苷的平均回收率为91.7%, RSD为3.32%.利用该方法检测了不同发育时期新梢(鱼叶期到一芽三叶期)、不同处理(茶尺蠖为害和低温胁迫)叶片和不同品种/单株叶片中东莨菪素和东莨菪苷的质量分数变化.结果表明,茶树新梢中东莨菪苷的质量分数高于东莨菪素,并且其质量分数随新梢成熟度增加而升高,而东莨菪素的质量分数变化无统计学意义;东莨菪素和东莨菪苷的质量分数与茶树品种遗传差异相关,其中东莨菪素质量分数为18.34～50.88μg/g,东莨菪苷质量分数为25.84～80.76μg/g;东莨菪素和东莨菪苷的质量分数受低温和茶尺蠖胁迫的影响差异无统计学意义.对不同发育阶段茶树新梢中东莨菪苷生物合成相关的基因表达水平进行检测,结果表明,合成通路上游基因的表达模式与东莨菪苷的积累模式间不...     

东莨菪内酯对家蚕乙酰胆碱酯酶活性的影响

用不同浓度天然产物东莨菪内酯处理桑叶饲喂家蚕(Bombyx mori)后,通过测定家蚕头部乙酰胆碱酯酶(AChE)活性,研究东莨菪内酯对家蚕的影响。结果表明,12 h时家蚕出现摆头、吐液等轻微中毒症状,24 h时中毒症状减轻,48 h时中毒症状消失,家蚕恢复正常;5龄第三天家蚕饲喂浸过不同浓度东莨菪内酯的桑叶后,头部AChE比活力变化趋势与对照变化趋势相反,且除了药后24 h时的比活力高于对照外,其余时间段比活力均显著低于对照,表现为抑制作用;在一定浓度范围内,东莨菪内酯对家蚕头部离体AChE活性的抑制作用呈剂量效应关系,且抑制率随东莨菪内酯浓度的升高而升高。5.0×10-2、2.5×10-2mol/L东莨菪内酯对家蚕头部离体AChE活性的抑制率分别达到99.4%、90.6%,当东莨菪内酯浓度小于5.0×10-4 mol/L时,其对家蚕头部离体AChE活性的抑制趋势逐渐变缓,抑制中浓度IC50为4.03×10-3mol/L。     

HPLC测定万应跌打酒中东莨菪素的含量

［目的］建立万应跌打酒中东莨菪素的HPLC分析方法。[方法］采用Diamonsil C18（5 μm×250 mm×4.6 mm）色谱柱,以乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为360nm,柱温为35 ℃。［结果］ 东莨菪素含量9.008-90.080（甲醇）μg/ml 范围内与其峰面积呈良好的线性关系,r＝0.999 9;平均回收率为98.83％（RSD＝1.18％）。10批万应跌打酒中东莨菪素的含量在0.03-0.12 mg/ml。［结论］该方法科学准确、操作简单、重复性好,可用于万应跌打酒的质量控制。     

不同产地树头菜中维生素C含量的测定

以2％草酸溶液为提取溶剂,超声提取维生素C。在254nm波长下,以0．05mol／L磷酸二氢钾：甲醇（90：10）为流动相,采用HPLC法,检测出石屏、普洱、西双版纳和建水共4个产地树头菜嫩叶中维生素C含量分别为0．79、1．4、1．5和1．6mg／g,其中建水产地的维生素C含量最高,石屏产地的含量最低。该方法准确可靠...     

白术辐射诱变株系中白术内酯Ⅰ、Ⅲ的含量测定

为了提高白术药材的品质和产量,从长势较好的4个白术辐射诱变株系中筛选出高产优质的优良品种,采用高效液相色谱法测定了白术有效成分-白术内酯Ⅰ、Ⅲ的含量。结果表明：初步优选出的白术辐射诱变株系的白术内酯Ⅰ、Ⅲ的含量均高于或接近于对照材料,为今后进一步选育出产量高品质优的优良白术品种展示了很好的应用前景。     

不同产地煨葛根的鉴定及含量测定

采用显微鉴别法对四川、安徽、湖北3个产地煨葛根外观形状及内部组织结构进行初步鉴定,利用薄层色谱法(TLC)鉴定煨葛根中的主要有效成分葛根素,通过高效液相色谱法(HPLC)对它们的含量进行检测,比较分析3个产地煨葛根中有效成分葛根素的含量及其差异性。结果表明,3个产地煨葛根中均含有葛根素,四川产地样品药材葛根素含量优于安徽和湖北产地,但不同产地的煨葛根中葛根素含量均符合《中国药典》标准,同时葛根素的含量与产地有一定关系。     

菜芙蓉醇提物金丝桃苷含量测定及对肿瘤细胞生长抑制作用

[目的]建立测定菜芙蓉（Abelmoschus manihot（L.）Medic）醇提物金丝桃苷含量的方法以及研究菜芙蓉醇提物对Hela肿瘤细胞生长的抑制效果。[方法]采用体积分数为80%的乙醇提取总黄酮,HPLC法测定菜芙蓉不同植株部位中金丝桃苷含量。色谱柱为伊利特C18（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.05%磷酸溶液（V/V,60∶40）,流速为1.0 ml/min,柱温为25℃,检测波长为360 nm和进样量为10μl。另外,MTT法测定菜芙蓉提取物体外抗Hela肿瘤细胞活性。[结果]金丝桃苷在0.040.4 mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.999 8。菜芙蓉不同部位金丝桃苷含量分布为：花〉叶〉茎〉根〉籽,花中平均含量最高达4.002%。平均回收率和RSD值分别为99.23%和1.08%（n=6）。菜芙蓉黄酮提取物能够有效地抑制Hela细胞的生长,IC50约为228μg/ml。[结论]该方法准确、简便、重复性好,可作为菜芙蓉金丝桃苷定量分析方法;菜芙蓉总黄酮具有抑制肿瘤细胞生长的作用。     

红稗多糖的分离纯化工艺

为研究红稗粗多糖不同的脱蛋白工艺,并确定DEAE-52纤维素交换层析柱纯化分离红稗多糖的最优条件。用Sephadex G-100柱层析分离纯化得到的红稗多糖并采用柱前衍生化高效液相色谱法对纯化后的红稗精多糖的单糖组成种类进行测定。结果表明:红稗粗多糖的最佳上样浓度为5 mg/mL,洗脱速度0.5mL/min,上样体积25mL;采用Sevage法除蛋白3次,得到的蛋白清除率以及多糖保存率均较高,通过DEAE-52纤维素的柱层析分离纯化后可得到大组份多糖;再由Sephadex G-100柱层析分离纯化得到的大组份红稗中性多糖;再利用柱前衍生化高效液相色谱法(HCLP)测定分离纯化后的红稗多糖主要由L-鼠李糖(rhamnose,Rham)、D-葡萄糖醛酸(glucuronic acid,Glu)和葡萄糖(glucose,Glc)3种单糖组成。     

一株产紫杉醇的曼地亚红豆杉内生真菌的分离及鉴定

[目的]分离并鉴定1株产紫杉醇的曼地亚红豆杉内的内生真菌.[方法]从曼地亚红豆杉树皮内表皮中分离得到32株内生真菌,并通过高效液相色谱法检测其发酵产物.[结果]筛选获得1株可以产紫杉醇的内生真菌M57,其紫杉醇产量为45～50μg/L,并通过对M57菌落的形态学观察以及18S rDNA序列分析初步将其鉴定为根霉属(Rhizopus)真菌.[结论]该菌株的发现为微生物发酵法生产紫杉醇提供了具有潜在应用价值新的菌种. Abstract： [Objective] The aim was to isolate and identify a taxol-producing endophytic fungus from Taxus media.[Method]32 strains of endophytic fungi were identified form the inner bark of T.media,and their fermentation products were detected by high performance liquid chromatography (HPLC). [Result] Through the screening,a strain of taxol-producing endophytic fungi M57 was obtained,which could produce 45-50 μg/L of taxol,and M57 was defined as Rhizopus sp.through morphological observation and 18S rDNA sequence analysis. [Conclusion] The finding of Rhizopus sp.M57 provided a promising strain for producing taxol with taxol-producing fungi fermentation process.     

白背叶的胚胎学研究

通过对雌配子发育、胚珠结构、胚乳与胚结构和发育的观察,研究了白背叶胚胎与其生殖生物学特征。     

橡胶树胶乳中橡胶粒子凝集相关蛋白研究进展

排胶时间是限制天然橡胶产量的关键因子之一,而乳管伤口堵塞物的形成决定着排胶时间的长短。橡胶粒子凝集与乳管伤口堵塞物的形成密切相关,其凝集过程主要受胶乳中的蛋白质调节。笔者综述橡胶粒子凝集相关蛋白的研究进展,旨在为橡胶树乳管堵塞机理的研究及排胶相关分子标记的研发提供参考资料。     

巴西橡胶树HbICE2基因的克隆及表达分析

ICE(inducer of CBF expression)介导的非依赖ABA信号传导途径在植物应对低温胁迫反应中起重要的调节作用。采用RT-PCR技术从橡胶树无性系热研8-79的叶片中扩增到1条全长c DNA,共1 677 bp,包括1 593 bp的开放阅读框,编码530个氨基酸,含有bHLH结构域,其中包含19个特征性的保守KMDRASILGDAI(D/E)YLKELL氨基酸序列,命名为HbICE2(Gene Bank登陆号:KY406163)。该基因编码的蛋白分子质量为58.02 KDa,理论等电点为5.95。荧光定量PCR分析结果表明,HbICE2主要在叶片和树皮中表达,而且在原生皮中的表达量显著高于再生皮,在抗寒性较强的橡胶树无性系PR107的树皮中表达量显著高于抗寒性弱的橡胶树无性系热研8-79。HbICE2可能在橡胶树树皮应对低温胁迫的反应中起重要的调节作用。     

一种快速高效适于橡胶树叶片AFLP分析的DNA提取方法

以近200个巴西橡胶树种质材料（品种及无性系）幼嫩叶片为材料．采用改良的cTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究。结果表明,该方法提取的DNA溶液无色透明,DD260／DD280的比值均为1．8～2．0,1％琼脂糖凝胶电泳为清晰的一条带,无降解现象,KNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析（引物EcoRI-TA／MseI—CTT）条带清晰,多态性好,说明此方法提取的巴西橡胶树幼嫩叶片基因组总DNA较适于AFLP分析。     

草甘膦对巴西橡胶树芽接苗叶片莽草酸和4种激素含量的影响

为探究草甘膦诱导橡胶树芽接苗叶片畸变的作用机理,以巴西橡胶树品种‘热研7-33-97’芽接苗为材料,喷施188 g a.i/hm2的草甘膦剂量,分析芽接苗不同形态叶片莽草酸和4种激素含量变化规律。结果表明:莽草酸积累量在草甘膦施药前后呈显著差异,当叶片出现半黄半绿表型时,莽草酸积累量较未施药前上升12.40%,而在2种再生畸形叶(叶片长度7 cm和7 cm)和恢复叶时分别下降75.01%、77.48%和62.69%;喷施草甘膦后各类型叶片生长素和赤霉素的含量均与未施药前对照叶片差异不显著,脱落酸和玉米素含量较对照差异显著,半黄半绿叶片脱落酸含量较未施药对照下降12.40%,玉米素较施药前下降33.54%;2种再生畸形叶出现后,脱落酸含量较未施药前分别升高30.40%和45.61%,玉米素分别升高41.48%和86.02%。说明莽草酸和植物激素共同调节着橡胶树的生长,且影响了橡胶树叶片畸形。     

HPLC法测定烟台柴胡中柴胡皂苷a和d的含量

[目的]建立烟台柴胡中柴胡皂苷a、d含量的HPLC测定方法,研究烟台柴胡中柴胡皂苷a、d的含量,为评价烟台柴胡品质提供科学方法。[方法]采用Thermo ODS-2 HYPERIL(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈和水,梯度洗脱;流速1 m L/min;柱温25℃;检测波长210 nm。[结果]方法学考察表明柴胡皂苷a、d的峰面积积分值和进样量的线性关系良好,精密度试验的RSD分别为0.67%和0.75%;加样回收率分别为99.4%和98.7%,RSD分别为1.53%和1.76%。不同来源的烟台柴胡中柴胡皂苷a、d的含量相当,总量在0.772%~1.079%。[结论]该方法稳定、重现性好、操作简单,可用于烟台柴胡的质量控制。烟台柴胡中柴胡皂苷a、d含量高于药典规定的柴胡标准,可以作为柴胡的药材新资源。     

利用单因子和正交设计双重实验法优化鹧鸪茶RAPD-PCR反应体系

为了建立鹧鸪茶RAPD-PCR的优化反应体系,首先通过单因素试验选定其各影响因子比较适宜的浓度范围,再利用正交试验设计方法,对影响鹧鸪茶RAPD-PCR反应的5种因素进行4水平优化试验。并运用SAS软件对试验结果进行了分析,最后确定优化的RAPD-PCR反应体系为:10×Buffer缓冲液2.5μL+Mg2+2.5mmol/L+dNTPs0.2mmol/L+TaqDNA聚合酶1.5U+S28引物0.48mmol/L+80ng模板,定容至25μL。PCR扩增程序为:94℃预变性4min,然后按94℃变性30s,38℃退火45s,72℃延伸120s,进行45个循环,最后72℃延伸10min;16℃保存。该优化的RAPD-PCR反应体系具有良好的稳定性和重现性,可应用于鹧鸪茶不同居群间亲缘关系和遗传多样性分析。     

Cd和模拟酸雨复合污染对密叶绢藓生理生化指标的影响

[目的]为密叶绢藓作为环境监测的指示植物提供参考。[方法]通过实验室模拟试验,研究了重金属Cd（0~50 mg/L）和模拟酸雨（pH值分别为3.5、4.5和5.6）复合污染对密叶绢藓生理生化指标的影响。[结果]随着酸雨强度的增大和Pb处理浓度的增加,密叶绢藓的可溶性蛋白质含量在Cd浓度为20 mg/L,pH值为3.5时达到最大值,比对照高出40.91%;超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）活性则是先升高后降低;而可溶性糖和游离脯氨酸含量则是随着Cd含量的增加而增加,在pH值3.5酸雨胁迫下,密叶绢藓受害程度最高。[结论]密叶绢藓对酸雨有较好的耐受能力,酸雨和Cd复合污染比单一污染对密叶绢藓造成的胁迫更严重。     

莲藕过氧化物酶的分离纯化及性质研究

经40%-85%硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析纯化,得到莲藕过氧化物酶（POD）电泳纯制品.该酶纯化倍数为39.77倍,回收率为11.76%.酶学性质和动力学性质研究表明,该酶最适pH为5.0;最适温度为35℃;以不同浓度的过氧化氢与莲藕POD在25℃、pH5的条件下反应,测得其Km值为9mmol/L.CuSO4和ZnSO4对莲藕POD活性有激活作用;BaCl2、MgCl2及SDS对其活性影响不大;Na2SO4、Li2SO4、KCl和NaCl对POD活性有一定的抑制作用;MnSO4和FeSO4对POD活性有较强的抑制作用;ASA能完全抑制POD的活性.