鸡IFN-γ基因克隆表达及其抗球虫研究进展

鸡干扰素主要由活化的T细胞、NK细胞产生,具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用.鸡干扰素-γ基因已经被成功克隆并在Vero细胞和大肠杆菌等表达系统中表达,并且被证明与鸡球虫病的免疫有关,它可激活巨噬细胞,增强K细胞、NK细胞的抗感染作用.另外,ChIFN-γ可用作免疫增强剂,具有广泛的应用前景.     

猪γ-干扰素基因的克隆 原核表达及抗病毒活性检测

干扰素(IFN)是一类具有抗病毒、抗肿瘤、激活淋巴细胞和免疫调节等多项功能的细胞因子,在机体免疫系统中发挥重要作用.猪γ-干扰素(γ-IFN)主要是由被激活的T细胞和NK细胞产生[1].     

鸡γ-干扰素的功能及临床应用

γ-干扰素(interferon gamma,IFN-γ)是干扰素的一种,是一类具有多种调节效应的细胞因子,主要由活化的T细胞和NK细胞产生,IFN-γ是动物机体最重要的细胞因子之一,是主要的巨噬细胞活化因子.由于其具有广谱高效抗病毒、抗肿瘤活性及其强大的免疫调节作用,IFN-γ已成为当今免疫学、病毒学、细胞学、分子生物学、临床医学、肿瘤学等相关领域的研究热点,被广泛应用于人类疾病临床治疗和动物疾病防控研究.文章就鸡IFN-γ的分子结构、作用机理、生物学功能、存在问题及临床应用等方面做简要综述.     

重组猪γ-干扰素对免疫猪SRBC和BA抗体产生影响的研究

γ-干扰素(IFN-γ)是巨噬细胞、NK细胞的主要活化因子,可增强主要组织相容性复合体(MHC Ⅰ类和MHCⅡ类)分子的表达,增强抗原呈递细胞对抗原的呈递作用,促进T、B淋巴细胞的分化和成熟,促进B细胞分泌抗体.     

抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的制备及定量ELISA方法的建立

将原核表达重组鸡γ-干扰素(rChIFN-γ)以100μg/只剂量免疫8周龄BALB/c小鼠,4次免疫后进行细胞融合,以昆虫细胞表达重组鸡γ-干扰素为检测抗原,筛选出阳性克隆株,经有限稀释,获得1株稳定分泌抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌抗体亚型为IgG1型,轻链为Κ链,命名为G1株。Western blot检测显示,该单克隆抗体与原核表达和昆虫细胞表达的rChIFN-γ均具有良好的免疫反应原性。昆虫细胞表达rChIFN-γ经该G1单克隆抗体作用后,失去抑制水疱性口炎病毒(VSV)在鸡胚成纤维细胞(CEF)复制的能力。利用纯化的单克隆抗体和昆虫细胞表达rChIFN-γ建立相对定量ELISA检测方法,取吸光度值(Y)对昆虫细胞表达rChIFN-γ的抗病毒活性单位对数(X)作回归曲线,回归方程为Y=0.1164~*X-0.1281,回归系数R=0.9539,具有艮好的线性关系。     

γ干扰素及其在动物疾病防控中的应用

γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)是干扰素的一种,又称为Ⅱ型干扰素或免疫干扰素,主要由活化的T细胞和NK细胞产生.IFN-γ是动物机体最重要的细胞因子之一,是主要的巨噬细胞活化因子(macrophge-activating factor,MAF),具有强大的免疫调节作用和抗病毒、抗肿瘤作用.目前,干扰素基因工程和基因治疗研究引起了广泛关注,已被应用于人类疾病临床治疗和动物疾病防控研究.文章就IFN-γ的基本特征、生物学活性及其在动物疾病防控中的应用做一综述.     

IFN-γ研究进展及其在猪繁殖与呼吸综合征研究中的应用

γ-干扰素(interferon gamma,IFN-γ)是干扰素的一种,又称为Ⅱ型干扰素或免疫干扰素,主要由活化的T细胞和NK细胞产生。IFN-γ是动物机体最重要的细胞因子之一,是主要的巨噬细胞活化因子(macrophage activating factor,MAF),具有强大的免疫调节作用和抗病毒、抗肿瘤作用。目前,干扰素基因工程和基因治疗研究引起了广泛关注,已被应用于人类疾病临床治疗和动物疾病防控研究。作者就IFN-γ的基本特征、生物学活性、检测及其在猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)中的研究应用进行了综述。     

牛IFN-γ基因的原核表达及其产物卵黄抗体的制备

γ-干扰素(IFN-γ)主要是由活化的T细胞和NK细胞产生,具有广谱抗病毒、抑制细胞增殖和免疫调节等多种生物学活性的细胞因子,它对动物机体的免疫应答、疾病的发生发展具有十分重要的作用.     

禽干扰素基因工程表达技术研究进展

干扰素是一组具有多种功能的活性蛋白(主要是糖蛋白),是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。根据干扰素产生的来源和结构不同可分为α干扰素、β干扰素和γ干扰素三类。研究发现干扰素通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白,从而抑制病毒的复制,同时它还可增强自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力,从而起到免疫调节作用,并增强抗病毒能力。由于干扰素几乎能抵抗所有病毒引起的感染,加     

鸡干扰素-γ基因的克隆及其重组表达载体的构建

鸡干扰素-γ(ChIFN-γ)是由鸡体或培养的鸡体细胞在干扰素诱生剂作用下所产生的一类非特异性的功能调节蛋白,具有明显的抗病毒、抗肿瘤、调节机体免疫功能等多种活性.为了拓展ChIFN-γ的抗病毒图谱,探讨基因工程干扰素在家禽养殖业中的应用前景,研究采用可以同时进行原核和真核表达的pQE trisystem系统进行ChIFN-γ的表达,旨在弥补传统干扰素制备方法的缺陷,为安全、高效制备重组ChIFN-γ奠定基础.     

畜禽干扰素的研究概况

干扰素 ( Interference,IFN)是由培养的细胞或动物体因病毒感染或其他诱生剂作用所产生的一类非特异性抗病毒物质。 1 95 7年 Isaccs和 Linden-mann在研究禽流感病毒的干扰现象时 ,在鸡胚绒毛尿囊膜中首先发现了干扰素。此后 40年 ,IFN一直是病毒学、细胞学、免疫学、肿瘤学等相关学科的研究热点。1 963年 L ampson等纯化了干扰素 ,证明其是分子量为 2 0～ 34KD的蛋白质。研究表明 ,干扰素可抑制被病毒感染细胞中蛋白质、DNA的合成 ;活化自然杀伤细胞 ( NK细胞 )去杀伤病毒感染细胞 ;诱导 MHCI分子的表达和呈递抗原。即干扰素具有…     

抗鹅γ-干扰素单克隆抗体的制备及鉴定

IFN-γ也称免疫IFN,主要由CD4+ Th1细胞、CD8+T细胞和NK细胞产生,是体内具有抗病毒和免疫调节功能的重要细胞因子之一[1].IFN-γ不但具有抗病毒、抗肿瘤活性,也可作加强和改善机体 免疫应答的免疫佐剂,与病毒的保护性抗原基因共 表达可加强和改善机体免疫应答.在禽类IFN-γ的研究中,鸡、鸭等IFN-γ的相关性研究较深入,有 关鹅IFN-γ的研究报道较少[2-3].     

重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)对MDV感染SPF鸡细胞免疫的影响

用马立克氏病病毒（MDV）感染5日龄SPF鸡后,取21日龄和35日龄鸡的淋巴细胞,运用3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞对ConA和重组鸡白细胞介素18（rChIL-18）的反应,并用MTT法检测NK细胞和CTL对MD肿瘤细胞系CU147的杀伤活性及rChIL-18和IFN-γ对它们的作用。结果显示,SPF鸡感染MDV后淋转水平显著下降,NK细胞、CTL杀伤活性在感染后21日龄时升高,而在35日龄时NK细胞杀伤活性显著下降。rChIL-18对对照组和感染组SPF鸡的淋转水平和杀伤活性均有提高作用,同样IFN-γ也具有提高NK细胞和CTL杀伤活性的作用。     

应用反转录聚合酶链式反应检测鸡Th1样淋巴因子mRNA表？…

应用反转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和限制性酶切分析技术对鸡脾细胞体外受到有丝分裂原ＣonＡ刺激的情况下,其Ｔh1样淋巴因子mＲＮＡ的表达水平进行了研究。实验结 果表明,ＣonＡ诱导培养３个小时的鸡脾细胞表达α－干扰素（ＣhＩＦＮ－α）、γ－干扰素（ＣhＩＦＮ－γ）和白细胞介素－２（ＣhＩＬ－２）等鸡的Ｔh1样淋巴因子mＲＮＡ 。未诱导但培养了３小时的鸡脾细胞可表达ＣhＩＦＮ－α和ＣhＩＦＮ－γmＲＮＡ,而未     

鸡γ-干扰素在重组杆状病毒中的表达及抗病毒活性的测定

本研究构建了表达鸡-γ-干扰素（Chicken interferon-γ，ChIFN-γ）的重组杆状病毒rBac-ChIFN-γ。采用鼠抗ChIFN-γ免疫血清作为一抗进行间接免疫荧光（1FA）及间接ELISA检测，表明ChIFN-γ在重组杆状病毒rBac-ChIFN-γ感染的昆虫细胞中获得表达。细胞病变抑制法测定重组ChIFN-γ抗病毒活性试验显示，重组杆状病毒表达ChIFN-γ能有效抑制水疱性口炎病毒（VSV）在鸡胚成纤维细胞（CEF）上的复制。而且其抗病毒活性可以被鼠抗ChIFN-γ免疫血清阻断。试验结果表明，重组杆状病毒能良好表达ChIFN-γ，并具有高效抗病毒活性。     

重组鸡γ干扰素的高密度发酵生产及对肉鸡巨嗜细胞活性影响

研究了培养条件和诱导条件等对工程菌CH1的最终菌体量和表达量的影响,确立最优的高密度发酵条件,还探讨了不同补料流加方式对菌体生长的影响.结果表明,DO-stat流加方式具有显著增加菌体量的作用,发酵液最终菌体密度D600达25.31,湿菌体53.4 g/L,蛋白表达量也达到32.3%,实现了ChIFN-γ的高密度发酵和高表达.初步纯化的鸡γ干扰素以500 U/只的剂量对双A肉鸡口服给药,可以提高机体的巨嗜细胞吞噬活性(P<0.05).本试验为鸡γ干扰素的工业化生产和临床应用提供了依据.     

表达鸡IL-12重组乳酸乳球菌的构建及其生物学活性检测

鸡白细胞介素12(ChIL-12)是由IL-12p40和IL-12p35两个亚基组成的一个异源二聚体,具有促进T淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK cell)成熟的作用,能够作为黏膜疫苗佐剂。本研究中采用公认的食品级乳酸乳球菌表达系统构建表达目的融合蛋白Ch IL-12p40-(G_4S)_3ChIL-12p35(rChIL-12),并经western blot检测。结果显示:目的融合蛋白呈可溶性状态表达。体外鸡淋巴细胞刺激试验显示,经rChIL-12处理的鸡脾淋巴细胞能够产生干扰素γ(IFN-γ),表明该融合蛋白具有诱导IFN-γ产生的生物学活性。本研究结果为进一步利用rChIL-12作为粘膜疫苗佐剂的研发奠定了基础。     

表达MDV gB和/或鸡γ干扰素基因的重组鸡痘病毒免疫效力试验

将表达鸡γ干扰素基因、表达MDV gB基因、共表达MDV gB和鸡γ干扰素基因的重组鸡痘病毒进行组合免疫观察在SPF鸡、狼山鸡中的免疫保护作用。在狼山鸡中随rFPV-gB剂量的减少，保护效力逐渐下降，而在SPF鸡中10^4与10^6PFU的rFPV-gB提供相同的保护效力，但存在减缓增重的副反应；在所有的疫苗组合中，由10^6PFU的rFPV-gB、10^5PFU的rFPV-IFN-Ⅱ和4000PFU HVT组成三价疫苗的保护效力最高且不影响增重，表明鸡γ干扰素既或降低重组鸡痘病毒的减缓增重的副反应，又具有免疫佐剂作用，与重组鸡痘病毒及HVT配合成疫苗是预防MD有效的冻干制剂。     

利用MultiBac系统表达有活性鸡γ干扰素及其鉴定

MultiBac系统是一套完善而又强大的真核表达系统,可在昆虫细胞中大量表达高品质的外源蛋白,已经应用于结构生物学研究和药物开发.为了实现鸡γ干扰素(chIFN-γ)在昆虫细胞中的表达,利用零背景转座技术构建重组杆状病毒,通过感染Sf9细胞,表达并且纯化chIFN-γ蛋白.使用制得的多抗血清,在重组杆状病毒感染的Sf9细胞样品中能够检测到大小为17.8 kD的单一条带,表明chIFN-γ成功表达.对纯化得到的重组chIFN-γ蛋白进行生物活性检测,结果显示其抗病毒活性为1.6×104 U/mL,具有良好的生物活性.     

痤疮丙酸杆菌对动物的免疫调节作用及应用

痤疮丙酸杆菌(PA)是人类皮肤和自然环境中的常见微生物,具有非特异性免疫增强作用,可激活多种免疫相关细胞,具有诱生干扰素、提高体液免疫水平、上调细胞TLR-2和TLR-4的表达等多种生物学活性。PA具有显著的活化抗原递呈细胞的作用,常被用于动物的非特异性免疫刺激剂,PA制剂可提高外周血单核细胞中IFN-γ和自然杀伤细胞裂解酶水平及上调抗菌肽的表达,提高动物对病原细菌的抵抗力,胸膜肺炎放线杆菌与PA具有交叉免疫保护反应,在开发相关疫苗过程中具有潜在作用。