鸡IFN-γ基因克隆表达及其抗球虫研究进展

鸡干扰素主要由活化的T细胞、NK细胞产生,具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用.鸡干扰素-γ基因已经被成功克隆并在Vero细胞和大肠杆菌等表达系统中表达,并且被证明与鸡球虫病的免疫有关,它可激活巨噬细胞,增强K细胞、NK细胞的抗感染作用.另外,ChIFN-γ可用作免疫增强剂,具有广泛的应用前景.     

重组鸡γ干扰素的抗球虫作用

鸡 γ干扰素 (Ch IFN- γ)是一种重要的细胞因子。对 r Ch IFN- γ抗球虫作用进行初步研究。在 7日龄对试验雏鸡口服接种 4× 10 4 个成熟的柔嫩艾美耳球虫卵囊时 ,结果表明 ,r Ch IFN-γ可以增加试验雏鸡的相对增重率 ,同时还发现 r Ch IFN-γ可以减少 OPG值和肠道病变记分 ,各 r Ch IFN-γ处理组中以肌肉注射 5 0 0 0 U r Ch IFN-γ组的相对增重率最高 ,为 93.0 %,其肠道病变记分和 OPG分别为 1.8和 6 .6 1万 / ml,ACI为 14 1.7     

抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的制备及定量ELISA方法的建立

将原核表达重组鸡γ-干扰素(rChIFN-γ)以100μg/只剂量免疫8周龄BALB/c小鼠,4次免疫后进行细胞融合,以昆虫细胞表达重组鸡γ-干扰素为检测抗原,筛选出阳性克隆株,经有限稀释,获得1株稳定分泌抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌抗体亚型为IgG1型,轻链为Κ链,命名为G1株。Western blot检测显示,该单克隆抗体与原核表达和昆虫细胞表达的rChIFN-γ均具有良好的免疫反应原性。昆虫细胞表达rChIFN-γ经该G1单克隆抗体作用后,失去抑制水疱性口炎病毒(VSV)在鸡胚成纤维细胞(CEF)复制的能力。利用纯化的单克隆抗体和昆虫细胞表达rChIFN-γ建立相对定量ELISA检测方法,取吸光度值(Y)对昆虫细胞表达rChIFN-γ的抗病毒活性单位对数(X)作回归曲线,回归方程为Y=0.1164~*X-0.1281,回归系数R=0.9539,具有艮好的线性关系。     

鸡γ-干扰素基因的克隆及原核表达

参照Digby发表的鸡γ-干扰素的核苷酸序列，设计一对引物，应用RT—PCR技术，从ConA诱导过的鸡脾淋巴细胞中特异性地扩增出大小约为500bp的基因片段。将该扩增基因进行克隆测序，结果表明其序列与Digby报道的CHIFN-γ基因序列的同源性达100％。将该基因插入原核表达载体pGEX-4T-γ中构建成重组表达载体pGEX—CHIFN-γ，并将其导入大肠杆菌BL21中，诱导表达的重组蛋白经SDS—PAGE分析，分子量约为43ku，表明所克隆的CHIFN-γ基因在原核细胞中得到了表达。     

鸡γ-干扰素基因的克隆及原核表达

参照Digby 发表的鸡γ-干扰素的核苷酸序列,设计1对引物,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从Con A诱导过的鸡脾淋巴细胞中特异性的扩增出大小约为 500 bp的基因片段。将该扩增基因进行克隆测序,结果表明其序列与Digby报道的CHIFN-γ基因序列的同源性达100%。将该基因插入原核表达载体pGEX-4T-1中构建成重组表达载体pGEX-CHIFN-γ,并将其导入大肠杆菌BL21中,诱导表达的重组蛋白经 SDS-PAGE 分析分子质量约为 43 ku,表明所克隆的CHIFN-γ 基因在原核细胞中得到表达。     

鸡γ-干扰素基因原核表达及多抗血清的制备

将扩增的鸡γ-干扰素基因(CHIFN-γ)克隆至原核表达载本pET30a上,构建了重组表达质粒pET-30a-CHIFN-γ.将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中,于37℃不同时间诱导表达,经SDS-PAGE分析表明该蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,且以可溶蛋白的形式存在.蛋白通过镍离子亲和树脂进行纯化,并作为免疫原制备兔抗CHIFN-γ多抗血清.Western-blotting结果表明目的蛋白与多抗血清有免疫反应性.     

鸡γ-干扰素在毕赤酵母中的表达及其生物活性检测

将鸡γ-干扰素(Ch IFN-γ)基因克隆至p PICZαA,以线性化质粒p PICZαA-IFN-γ电转化酵母GS115细胞,筛选出表达重组Ch IFN-γ(r Ch IFN-γ)的酵母菌株。r Ch IFN-γ通过离子交换层析纯化后,经水泡性口炎病毒(VSV)检测其抗病毒活性为10 240 IU/m L。以r Ch IFN-γ与H9亚型禽流感灭活疫苗联合免疫SPF鸡,使用r Ch IFN-γ试验鸡的血清HI抗体水平显著高于未使用r Ch IFN-γ试验鸡(P0.05);用H9亚型禽流感病毒攻击后,使用r Ch IFN-γ试验鸡排毒率显著低于未使用r Ch IFN-γ试验鸡(P0.05),说明r Ch IFN-γ具有佐剂的活性。     

鸡γ-干扰素的功能及临床应用

γ-干扰素(interferon gamma,IFN-γ)是干扰素的一种,是一类具有多种调节效应的细胞因子,主要由活化的T细胞和NK细胞产生,IFN-γ是动物机体最重要的细胞因子之一,是主要的巨噬细胞活化因子.由于其具有广谱高效抗病毒、抗肿瘤活性及其强大的免疫调节作用,IFN-γ已成为当今免疫学、病毒学、细胞学、分子生物学、临床医学、肿瘤学等相关领域的研究热点,被广泛应用于人类疾病临床治疗和动物疾病防控研究.文章就鸡IFN-γ的分子结构、作用机理、生物学功能、存在问题及临床应用等方面做简要综述.     

鸡球虫疫苗研究进展

鸡球虫疫苗研究进展李秉鸿（广西兽医研究所５３０００１）李筠（广西兽药监察所５３０００１）鸡的球虫病引起家禽生产严重的经济损失，目前主要使用药物来控制，但是这些球虫对药物逐渐产生抗药性，其中包括近年来开发利用并占抗球虫药物市场８０％的聚醚类离子载体抗生...     

鸡常用的抗球虫药

鸡的球虫病是养禽生产中常见的 种疾症,它主要危害3月龄内的雏鸡,15～51日龄时受害更为严重,除引起死亡外,病愈鸡长期生长缓慢,增重、产蛋受到严重影响。由于球虫不同于细菌和病毒,阳光中的紫外线和消毒剂在低浓度情况下很难将其杀灭,所以它在外界环境中能存活很长的时间。实践业已证明,药物防治是控制球虫病最重要的措施。目前用于     

柔嫩艾美耳球虫免疫期间鸡盲肠扁桃体γ干扰素表达动态的检测

根据GenBank鸡β-actin、IFN-γ的基因序列设计引物,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术克隆获得β-actin和IFN-γ基因,采用β-actin为内参的半定量方法检测IFN-γ mRNA在鸡柔嫩艾美耳球虫免疫前后不同时间的表达情况,以探讨IFN-γ的表达动态与柔嫩艾美耳球虫免疫的关系。结果显示,IFN-γ在两次免疫期间的表达量整体上呈现双峰模式,首免后第7天达到一个高峰,二免后第7天达到另一个高峰。     

鸡鼻相关淋巴组织中IFN-γ和IL-2mRNA表达水平的动态变化

本研究旨在观察鸡鼻黏膜相关淋巴组织（NALT）在不同日龄时细胞因子上干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-2（IL-2）mRNA的表达水平,分析鸡NALT免疫功能的建立情况,试验以不同日龄海蓝白鸡鼻腔后部组织为研究对象,采用SYBRGreen1qRT—PCR方法,检测鸡在胚胎时期和出壳后初期鼻相关淋巴组织中IFN-γ和IL-2mRNA的表达水平。研究发现：NALT中于18胚龄检测到IFN-7和IL-2mRNA,随后表达水平逐渐升高,并于21日龄时达到峰值。此外,在4日龄时2种细胞因子与CD4＋细胞出现的时间相同,表明2种细胞因子由该免疫活性细胞所分泌。NALT在4日龄时开始具有-定的免疫功能,并随日龄增长逐渐增强,21日龄时达到成熟水平。     

鸡γ-干扰素基因的分子克隆与序列测定

应用逆转录 -聚合酶链式反应 ( RT-PCR)技术 ,从 Con A诱导培养 2 4 h的鸡脾淋巴细胞中扩增得到了大小约 50 0 bp的基因 ,将其平端连接到 p UC1 9质粒上 ,进行质粒 PCR和 Eco RI、Hind 双酶切鉴定后 ,筛选阳性重组克隆。序列分析表明 ,该基因阅读开放框架由 4 92个核苷酸组成 ,与马和人γ-干扰素基因序列的同源性分别为 3 5%和 3 2 %,与鸡 型干扰素基因的同源性仅为 1 5%,与国外报道的鸡 γ-干扰素基因序列完全一致。表明鸡脾淋巴细胞受到有丝分裂原刺激后 ,其 γ-干扰素基因 m RNA发生了表达 ,试验成功地克隆得到了鸡 γ-干扰素基因     

新兴猪γ-干扰素基因克隆及其真核表达质粒的构建

为研发猪γ-干扰素(interferon-gam-ma,IFN-γ)制剂,根据已发表的猪IFN-γ基因序列设计一对引物,应用RT-PCR技术从3周龄新兴猪脾细胞中扩增出约500 bp的基因片段;将其片段连接到pMD18-T载体,经PCR、酶切及序列测定表明,该基因片段由501个核苷酸组成,共编码166个氨基酸,与NCBI GenBank上登载的猪IFN-γ基因序列完全一致。新兴猪IFN-γ基因的成功克隆及真核表达质粒的构建,将为进一步研发猪干扰素制剂奠定了基础。     

合理使用抗鸡球虫药

1　如何合理使用抗球虫药1.1　合理选择药物　目前市售抗球虫药品种繁多 ,选择余地较大。但每种药物对球虫的作用峰期、有效虫种不尽一致 ,各种药物间的配伍禁忌、协同效果不完全一样 ,药物的安全性也相差很大。理想的抗球虫药标准 :一是抗球虫谱广 ,性质稳定 ;二是能够提高饲料报酬 ,促进鸡的生长发育 ;三是组织中残留量少 ,无毒性 ,多用途 ,又不影响鸡产生免疫力 ;四是价格低廉 ,容易与饲料混合或易溶于水。但是对一个具体的鸡场而言 ,还要结合自身特点加以考虑。这些因素包括 :鸡场的不同优势虫种、鸡场球虫的抗药性特点、鸡的品种 (是肉…     

鸡γ-干扰素基因的克隆及原核表达

参照Digby发表的鸡γ-干扰素的核苷酸序列，设计一对引物，应用RT-PCR．技术，从ConA诱导过的鸡脾淋巴细胞中特异性地扩增出大小约为500bp的基因片段。将该扩增基因进行克隆测序，结果表明其序列与Digby报道的CHIFN-γ基因序列的同源性达100％。将该基因插入原核表达载体pGEX-4T-1中构建成重组表达载体pGEX-CHIFN-1，并将其导入大肠杆菌BL21中，诱导表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析，分子量约为43ku，表明所克隆的CHIFN-γ基因在原核细胞中得到了表达。