同位素示踪技术在动物营养研究中的应用

饲料中各种营养素在动物体内的消化、吸收、代谢规律的研究对于制定动物饲养标准、评定饲料营养价值、制定合理的饲料配方,最终提高养殖业的经济效益有重要作用。同位素示踪技术以其灵敏度高、实验周期短等优点在动物营养研究中具有广阔的应用前景。本文重点讨论了同位素示踪技术在动物矿物元素、蛋白质、碳水化合物的吸收、代谢规律方面的应用。     

15N同位素示踪技术在动物蛋白质代谢研究方法中的应用

氮素是动物营养最重要的元素之一，准确研究蛋白质(氮素)的代谢对于动物饲养标准的修订、饲料原料营养参数的准确性和合理配制日粮具有重要意义。同位素示踪技术在农业中的应用，重点讨论了稳定同位素15N示踪技术在动物营养研究特别是在蛋白质代谢研究中应用的先进性、准确性和可行性。     

猪圆环病毒2型病毒样颗粒研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪圆环病毒相关疾病的主要病原体,给养殖业造成重大经济损失。一直以来,对于PCV2的防控主要通过疫苗接种。目前使用的疫苗可大致分为全病毒灭活疫苗、嵌合病毒疫苗、重组亚单位疫苗三大类。病毒样颗粒(VLPs)作为一种伪病毒,以其高免疫原性、高安全性成为新型疫苗的研究热点。本文综述了VLPs在国内外的最新研究动态、研究和开发的意义,提出了VLPs作为一种基因转载工具,其研究为疫苗研发开拓了新的方向。     

病毒样颗粒疫苗及其在猪病防控中的应用研究进展

病毒样颗粒(VLPs)疫苗因其免疫原性好、安全性好,已成为研制安全高效的预防人和动物病毒性疾病的潜在候选疫苗。文章综述了VLPs疫苗在猪病防控中的应用研究进展,以期为兽医科技工作者和广大养殖业主更好的了解和对疾病进行有效的预防和控制提供参考。     

猪圆环病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中表达形成病毒样颗粒的研究

本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将猪圆环病毒（Porcine circovirus,PCV）PCV2b的ORF2基因插入供体质粒pFastBacTMⅠPPH启动子控制下的多克隆位点,构建的质粒转化DH10BAC感受态细胞,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒rBacmid-cap。将rBacmid-cap转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,间接免疫荧光试验证明目的蛋白在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得了表达。将该重组杆状病毒感染HighFiveTM细胞后,用Western blot在细胞培养上清中检测到了目的蛋白,并于d 5达到表达高峰。电镜观察结果显示上清中的目的蛋白可以装配成直径约为17 nm的病毒样颗粒。病毒样颗粒在培养上清中的大量存在,为目的蛋白进一步的分离和纯化提供了便利,也为PCV2基因工程疫苗的产业化奠定了基础。     

牛细小病毒病毒样颗粒的组装及其免疫原性评价

为研究牛细小病毒(BPV)VP2衣壳蛋白自组装病毒样颗粒(VLPs)以及VLPs的免疫原性.本研究以BPV-1型C7-5中国分离株的基因组序列为模板扩增VP2蛋白的编码基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,利用E.coliB J5183内同源重组将VP2基因插入腺病毒骨架质粒pAdEasy-1中,获得携带BPVVP2基因的重组腺病毒质粒(pAd-BPV-VP2).该重组质粒经Pac Ⅰ线性化后转染Ad293细胞,获得重组腺病毒rAd-BPV-VP2,第8代时滴度为107.25 TCID50/mL.间接免疫荧光、westemblot以及电镜观察结果显示,BPV VP2蛋白可以在腺病毒系统中稳定表达,并有效组装VLPs.将rAd-BPV-VP2肌肉注射免疫BALB/c小鼠,结果显示,针对BPV的血清IgG和中和(VN)抗体分别于加强免疫后2周和8周达最高水平,高峰抗体可持续至15周,VN抗体的最高滴度可达1:4 000.此外,与对照小鼠血清相比,免疫小鼠血清中的IL-2、IL-4及IFN-γ含量显著升高(p＜0.05).结果表明,rAd-BPV-VP2免疫小鼠后可以诱导机体产生针对BPV的特异性体液和细胞免疫.本研究为BPV的免疫预防及载体的开发奠定了基础.     

绿色荧光示踪马传染性贫血病毒样颗粒在活细胞中的组装过程

马传染性贫血病毒(EIAV)gag基因编码的多聚Gag蛋白能够自动组装形成病毒样颗粒(VLPs)。为研究EIAV衣壳蛋白合成、组装及释放过程,本实验通过构建表达EIAV Gag-GFP融合蛋白重组质粒,并将其转染293T细胞,采用western blot检测不同时间点VLPs的产生及释放。并进一步通过活细胞和3D成像技术观察Gag-GFP在细胞中的表达动态及VLPs的组装过程。结果表明:Gag和GFP蛋白融合表达不影响VLPs的组装,转染约6 h后EIAV Gag蛋白进行合成并在细胞胞质聚集完成组装形成VLPs。该实验结果为进一步研究EIAV在细胞中的组装路线和机制奠定了重要基础。     

病毒样颗粒疫苗的研究进展

病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是含有某种病毒的一个或多个结构蛋白的空心颗粒,没有病毒核酸,不能自主复制,在形态上与真正病毒粒子相同或相似,俗称伪病毒、假病毒.VLPs有3个突出的优势:第一,以化学交联或基冈工程的方法对其表面进一步修饰和改造;第二,VLPs可包裹分子质量及电荷适中的核酸或非核酸分子;第三,多数病毒的VLPs在真核表达系统及少数病毒的VLPs在原核表达系统巾都能够有效地实现自我组装.     

含非洲猪瘟病毒核酸序列病毒样颗粒的研制及其在检测方法中的应用

非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）引起的烈性传染病,为了保证其检测结果的准确性和可靠性,需要研制试剂盒中使用的阳性标准质控品。本试验旨在研制含ASFV核酸序列的病毒样颗粒,并探究其在检测方法中的应用。首先扩增p72基因的全长片段,利用昆虫杆状病毒系统,包装出含有p72基因的ASF DNA病毒样颗粒。为了进一步验证该病毒样颗粒在应用中的可靠性,本研究将病毒样颗粒与ASF的组织毒及细胞毒同时进行DNA核酸提取,进行实时荧光定量PCR。结果表明,本研究制备的病毒样粒子能很好的取代ASFV在实时荧光定量PCR检测方法中作为阳性质控品,且能对核酸提取过程进行质控,实时荧光定量PCR检测试剂盒中,病毒样粒子的最低包装浓度为10² TCID₅₀。进一步研究发现该病毒样颗粒也适用于普通PCR及LAMP检测方法中,最低浓度分别为10³和10¹ TCID₅₀。本试验结果将为规范ASF检测方法,促进ASF检测方法的转化应用及保证检测结果的准确度和可靠性提供科学依据。     

非洲猪瘟病毒入侵细胞机制的研究进展

病毒进入宿主细胞的机制决定了病毒的趋向性和发病机理,病毒感染细胞包括吸附、穿入、脱壳、复制、组装及子代病毒颗粒的释放等步骤,对病毒入侵机制研究可以为开发有针对性的预防策略提供思路。非洲猪瘟病毒作为一种有囊膜双链DNA病毒,其入侵宿主细胞的机制与其他病毒有一定的相似之处,同样也有其特殊性。目前,人们对非洲猪瘟病毒与宿主细胞相互作用,特别是入侵机制的了解仍然非常有限。为此,本文就ASFV入侵细胞的有关研究进展进行了综述,以期为非洲猪瘟病毒致病机制相关研究提供参考。     

牛病毒性腹泻病毒侵染细胞机制的研究进展

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是反刍动物和猪体内广泛存在的危害动物健康的重要病原体.BVDV感染牛后主要引起牛的持续性感染、免疫耐受、免疫抑制、繁殖障碍及急慢性黏膜病等临床症状,给养牛业造成重大的损失.其致病机理非常复杂,给该病的治疗和根除带来极大的困难.随着分子病毒学研究的发展以及对猪瘟病毒和黄病毒科其他成员的研究,人们在BVDV分子水平和细胞水平的研究方面也取得了一些进展.就此,作者从BVDV入侵细胞、在细胞内的复制以及与宿主蛋白分子相互作用等方面进行综述,有助于阐明BVDV致病和在体内持续存活的机制,为该病的防治和疫苗研发提供新的思路和对策.     

口蹄疫病毒反向遗传技术研究进展

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的一种高度接触性传染病,被世界动物卫生组织（OIE）列为必须报告的传染病之首,其暴发会严重影响畜牧业发展、人民生活以及国民经济。但目前对口蹄疫病毒的了解仍存在盲区,口蹄疫疫苗还有许多不足。病毒反向遗传学技术的飞速发展为口蹄疫病毒结构的深入研究与新型疫苗及其生物制品的研制提供了一种新的高效的技术方法。论文就国内外运用反向遗传学技术对口蹄疫病毒分子致病机理研究及利用反向遗传学操作技术研制新型 FMD 疫苗进行综述,并且展望口蹄疫病毒反向遗传学研究新动向。     

哺乳动物体细胞克隆技术应用的研究进展

哺乳动物体细胞克隆技术是一项高新的生物技术,这一技术不仅为许多学科发展带来了机遇,它的应用将给畜牧业生产、转基因动物和医学带来了革命性的变化。作者就这几个方面的应用做一简要综述。     

基因芯片技术及其在动物微生物研究中的应用

介绍了基因芯片技术及其在动物微生物研究中病原体检测和分型、致病机理、宿主与病原体的相互影响以及耐药性检测等方面的应用情况,分析了限制该技术应用和发展的主要问题,并对其应用前景作了展望。     

生物技术在畜牧业上的应用研究

从生物技术与畜禽品种、动物遗传育种,动物饲料资源开发,动物疫病的预防与诊断几个方面,论述了其在畜牧业中的应用,以期用生物技术来推动我国畜牧业的更快发展.     

生物技术在畜牧业上的应用研究

从生物技术与畜禽品种、动物遗传育种,动物饲料资源开发,动物疫病的预防与诊断几个方面,论述了其在畜牧业中的应用,以期用生物技术来推动我国畜牧业的更快发展。     

动物细胞规模化培养及其在兽用疫苗生产中的应用

哺乳动物细胞大规模培养技术已经广泛应用于生产各种生物制品,也广泛应用于各种兽用疫苗的生产.细胞培养生产兽用疫苗不但能够降低成本,而且提高产品质量.细胞培养生产兽用疫苗已经成为各个生物制品公司关注的焦点.凡是影响细胞大规模培养的因素,都直接或者间接的影响疫苗质量.论文针对哺乳动物细胞大规模培养相关影响因素、相关技术和在兽用疫苗中的应用进行概述.     

胚胎细胞遗传操作的研究进展及其在畜牧业的应用前景

胚胎遗传操作是现代生物技术研究最为活跃的领域之一。本文简要介绍了动物胚胎工厂化生产及胚有细胞基因导入所取得的进展;并展望了该项技术在畜牧生产中的应用前景。     

动物RNA病毒感染性cDNA的研究进展

RNA病毒不仅对各国畜牧业的发展带来了严重的破坏,而且影响着畜产品进出口。感染性cDNA的研究虽然起步晚,但发展迅速。文章探讨了构建感染性cDNA的主要策略,并对正、负链RNA病毒感染性cD-NA的研究现状、国内外研究进展和应用情况,如基因组功能、研制标记疫苗和基因工程疫苗等做了综述,认为在此病毒上构建感染性cDNA有着广阔的前景,值得作进一步的探索,这对预防和控制RNA病毒引起的疾病将起重要的作用。     

蛋氨酸羟基类似物的生产工艺及其在动物营养中的应用

蛋氨酸羟基类似物(MHA)作为蛋氨酸(Met)替代物被广泛应用于饲料添加剂中.MHA因其特殊的结构性质,不仅具备Met的营养功能,而且可以发挥Met不具备的酸化剂、抗生素等功能.随着我国畜牧和饲料添加剂行业的发展,MHA合成方法的研究及应用必将得到进一步的关注,因此,本文概述了MHA的生产工艺及其在动物营养中的应用.