苦马豆素降解酶的酶促降解特性

【目的】研究苦马豆素(Swainsonine,SW)降解酶的酶促降解特性。【方法】应用渗透休克原理,提取SW降解菌株YLZZ-1粗酶液,进行酶促降解研究,并考察SW降解酶的酶活力、动力学参数及稳定性。【结果】YLZZ-1菌株的胞内粗酶液对SW的降解率高达91.73%。SW降解酶对SW酶促降解的最适pH为8.0,最适温度为30℃,在pH6.0~8.5、温度25~45℃具有较好的降解活性,其米氏常数Km为0.073 98 mmol/L,最大反应速度Vmax为0.111 5μmol/(mg.min)。SW降解酶有较好的pH稳定性,但对热不稳定。【结论】菌株YLZZ-1的SW降解酶属于胞内诱导酶,具有良好的降解能力。     

恶臭假单胞菌XP12对拟除虫菊酯类农药的酶促降解特性及其应用研究

试验选用使用量较大、毒性较强、不易自然降解的高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和高效氯氟氰菊酯作为参试农药,对一株能高效降解拟除虫菊酯类农药的恶臭假单胞菌XP12进行深入的研究,以期了解该菌株在拟除虫菊酯类农药的生物降解体系中酶的分布特征、酶促降解的动力学特征.结果表明:对拟除虫菊酯类农药起催化作用的酶属于组成型胞内酶,反应pH值为6.5～8.0时,降解酶对高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和高效氯氟氰菊酯的降解率都在70%左右,最适反应pH值为7.5:反应温度在25～40℃时,降解率在70%以上,最适反应温度为30℃.在最适反应pH和温度条件下,降解酶粗酶液对高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和高效氯氟氰菊酯的Km分别为42,78、50.64和77.90 nmol/mL,Vmax分别为12.05、10.31和16.39 nmol/min.粗酶液在叶类蔬菜上拟除虫菊酯类农药的降解也有明显效果,对高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和高效氯氟氰菊酯的降解率分别为93.3%、85.2%、83.5%.     

乐果降解酶产生菌的筛选及产酶条件的优化

采用室内培养实验方法 ,从农药长期污染的土样中分离到一株铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)P -1,该菌株可以利用乐果为唯一碳源和能源进行生长,生长的最适pH为7.0～7.5,最适温度为30～35℃。在组分为0.3 %蛋白胨,0.05 %牛肉膏,0.05 %乐果,0.5 %NaCl的培养基中摇床(35℃,150r/min)培养24h,可产生最高的乐果降解酶活性,达到约8u/mL。     

木霉T2-2产多菌灵水解酶的条件及酶学特性

木霉T2-2是一株多菌灵高效降解菌.为了利用该菌产生的酶为去除环境中的多菌灵残留提供理论依据,对T2-2产生的多菌灵水解酶进行了研究.结果表明,在PD培养基中,T2-2产生多菌灵水解酶的适宜条件为pH值5.0 ～7.0,培养温度28℃,培养时间28 h；该酶在22～28℃,pH值＜7.0的条件下比较稳定,在pH值=6.0和温度为28℃时显示出最大的多菌灵水解酶活性；酶定域试验结果显示该酶为胞内酶.     

黑曲霉有机磷农药降解酶的纯化及其性质

采用细胞破碎、硫酸铵分级沉淀和Sephadex G-75凝胶过滤的方法,对黑曲霉(Aspergillus niger)J6产生的有机磷农药降解酶进行分离和纯化,并对其酶学性质进行研究。结果显示:黑曲霉J6有机磷农药降解酶定位在细胞膜上,其分子量为66 000。该降解酶最适pH值为7.0,最适反应温度为70℃,Fe3+、Cu2+、Li+、Zn2+、Mg2+、NaN3、EDTA、SDS、PSMF对该降解酶有不同程度的激活作用,而Mn2+对其有轻微的抑制作用,Ca2+和Triton对其有强烈的抑制作用。     

菊酯类农药降解酶Est825的降解 效果及安全性评价初报

通过试验表明高密度发酵制备的菊酯类农药降解酶Est825 对菊酯类农药的降解率达70%以上,其降解 农药的最适活力浓度为120 U/mL,最适反应温度范围为32~37益;测定了菊酯类农药降解酶对SD 大鼠急性经口毒 性,LD50跃6 g/kg 体重,属实际无毒;皮肤变态试验结果表明该酶制剂不引起皮肤变态反应。     

降解菌DDS-1产3-AC-DON氧化酶的酶学特性

【目的】研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol,DON）降解菌Devosia sp. DDS-1产生的3-AC-DON氧化酶的酶学特性,掌握DDS-1降解3-AC-DON到3-酮基-DON特性,为该酶的开发应用奠定理论基础。【方法】LG培养基培养DON毒素降解菌Devosia sp. DDS-1后,用PBS离心洗涤菌体后采用超声波破碎,用硫酸铵沉淀菌体破碎液获得粗酶液;然后在不同的酶反应体系中检测3-AC-DON氧化酶的酶活性。【结果】降解菌DDS-1产生3-AC-DON氧化酶的最适条件为：pH 7.0、25℃、培养36 h;该酶酶反应的最适温度为35℃,最适反应pH为7.0;该酶在20—40℃,pH 5.0—9.0的范围内能保持80%以上的酶活性;大多数金属离子在浓度为0.2—2 mmol•L-1对3-AC-DON氧化酶有促进作用;乙二胺四乙酸（EDTA）对该酶活性有抑制作用;酶的定域试验结果显示该酶为胞内酶;DDS-1产生的粗酶液能很好地降解小麦中的DON、3-AC-DON毒素。【结论】Devosia sp. DDS-1产生的3-AC-DON氧化酶的酶学特性研究表明,DDS-1产生的3-AC-DON氧化酶具有较好的温度和酸碱稳定性,该酶反应需要金属离子作为辅因子。     

芽孢杆菌L4菌株角蛋白酶的酶学性质研究

采用室内实验方法,对芽胞杆菌L_4菌株产生的角蛋白酶进行了系列的酶学性质研究.结果表明,以角蛋白溶液为底物时该酶的最适酶促反应温度为40℃,最适酶促反应pH为7.0,其Km值为1.88 mmol·L~(-1),Vmax为2.72×10~(-2)mmol·L~(-1)·s~(-1).利用不同的蛋白酶抑制剂进行酶活性抑制实验,发现该酶受邻啡罗啉和EDTA的抑制,推测该酶可能是一种含Zn~(2+)的金属蛋白酶.微量元素对该酶活力的影响显著,Ca~(2+)和Mg~(2+)对酶活力有促进作用,高浓度的Fe~(2+)和Cu~(2+)明显抑制角蛋白活力.     

三唑酮降解菌SM3的降解特性及其应用研究

以课题组前期筛选到的1株三唑酮高效降解菌SM3为研究对象,对其降解特性、酶学性质及应用潜力进行了初步研究。结果表明：在纯培养条件下,温度30℃、pH 7.0、接菌量5%、盐浓度10 g·L^-1及葡萄糖含量1%为高效降解菌株SM3最适培养条件;通过对降解酶定位发现,降解三唑酮关键酶为胞内酶,且酶促降解最适pH为7.0,最适温度为30℃;室内模拟三唑酮污染土壤分别设置了0.4、2和5 mg·kg^-1 3个浓度,同时添加菌剂,于1、5、10、15、20和25 d后取样测定土壤中的三唑酮含量。25 d后,3个浓度污染土壤中三唑酮降解率分别达到99.7%,79.1%和58.1%,降解过程符合一级动力学方程。结果可为三唑类杀菌剂三唑酮的生物降解和环境治理提供优良的菌株资源。     

三唑磷降解菌的分离鉴定及降解特性

[目的]筛选高效降解三唑磷的降解菌,为三唑磷残留的微生物修复提供降解菌资源.[方法]采用富集培养、划线分离筛选降解菌;根据形态学、生理生化结合16S rDNA基因序列分析,鉴定降解菌;液—液萃取结合气相色谱法(LLE-GC)测定三唑磷残留量.[结果]筛选出一株三唑磷降解菌TDB-2.通过形态特征、生理生化特征及16SrDNA基因序列鉴定,确定TDB-2属巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium);该菌株能以三唑磷为唯一碳源,生长最佳条件为pH 7.0和35 c;在最佳生长条件下培养9h对50 mg/L三唑磷的降解效率为69.71％.[结论]菌株TDB-2能高效降解三唑磷农药,具有开发成环境兼容性好的三唑磷降解菌剂的潜力.