液相色谱串联质谱法在检测鸡肉中环丙沙星残留的应用

建立了鸡肉中环丙沙星的高效液相色谱串联质谱测定方法,试样经EDTA-Na缓冲盐提取和净化后,C18柱HPLC进行分离,多反应选择离子检测。方法的回收率和变异系数分别在90%~110%和3%~10%。该方法对鸡肉中环丙沙星检测限为1μg/kg。     

牛奶中氟喹诺酮类药物残留同步快速检测的酶联免疫吸附法研究

建立同时快速检测牛奶中环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星和洛美沙星六种氟喹诺酮类药物残留的酶联免疫吸附法。ELISA法的操作在20℃～25℃下进行,以50%抑制浓度、最低检测限反映方法的灵敏度,同时进行加标回收试验。结果表明,本文所建立的ELISA法的最低检测限为1.48μg/L,50%抑制浓度的范围在0.254～0.361μg/L;在环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星和洛美沙星药物添加浓度为5、25、50μg/L时的回收率为84.58%～115.92%,批内变异系数均小于15.0%,批间变异系数均小于16.0%。本方法简便快捷,灵敏度、准确度和精密度高,适用于牛奶中FQs残留的同时快速检测。     

伏马菌素FB2间接竞争ELISA检测方法的建立

用卵清白蛋白与伏马菌素B2的偶联物(OVA-FB2)做包被抗原,标准伏马菌素B2(FB2)做竞争抗原,初步建立了检测玉米粉中伏马菌素B2的间接竞争ELISA方法.优化后的ELISA检测方法,线性范围为7.81～250μg/L,最低检测限为6.09 μg/L.曲线回归方程为y=-47.038x+120.25,R2=0.983 5,批内平均变异系数为3.92%,批间平均变异系数为5.53%.对玉米粉加标样品测定结果表明,利用甲醇-EDTA法提取样品的平均加标回收率达到了96.11%.     

阿莫西林残留ELISA检测试剂盒质量验证

为了对用于检测牛奶中阿莫西林残留的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒进行质量验证,试验采用不同梯度浓度的方法进行研究。结果表明:阿莫西林标准品浓度在0.5~13.5μg/L范围内具有较好线性关系,50%竞争抑制浓度为2.0μg/L,试剂盒对牛奶中阿莫西林的最低检测限为4.6μg/L。牛奶中分别添加5.0,10.0μg/L的阿莫西林标准品,回收率在72.2%~108.7%之间,批内变异系数小于8.9%,批间变异系数小于11.9%;试剂盒可在37℃条件下保存7 d,可同时检测牛奶中阿莫西林、青霉素、氨苄西林、萘夫西林等药物的残留总量。与仪器方法进行实际样品检测相比,ELISA方法检测结果具有良好的可信度。     

环丙沙星(ciprofloxacin)在鸡蛋中残留的研究

应用高效液相色谱法(HPLC)检测了鸡蛋中环丙沙星的残留。鸡蛋经乙腈溶液提取,提取液真空干燥后用流动相溶解。以0.015mol/L四丁基溴化铵/乙腈(94/6,V/V)作流动相,用SymmetryC18柱(5μm,3.9mm×150mm),在激发波长280nm、发射波长455nm处,用荧光检测器检测。将环丙沙星以0.05、0.50、1.00mg/kg分别添加到空白鸡蛋样品中,测得鸡蛋样品中环丙沙星的回收率分别为(82.2±6.8)%、(84.5±5.9)%、(87.9±4.7)%,相对标准差均低于8.3%。用该方法测定鸡蛋中环丙沙星的最低检测限为0.01mg/kg。各试验组产蛋鸡给药剂量分别按10.0、20.0mg/kg(体质量)内服环丙沙星水溶液,每天给药1次,连续5d。停药后鸡蛋中环丙沙星残留消除缓慢;休药8~9d时,鸡蛋中环丙沙星残留量低于0.03mg/kg;休药9~10d时,鸡蛋中环丙沙星残留量均低于最低检测限(0.01mg/kg);且随着环丙沙星给药剂量的增大,环丙沙星在鸡蛋中的残留量也相应增大。     

鸡肉中硝基咪唑类药物残留ELISA检测试剂盒的研制

分别利用戊二酸酐法和碳化二亚胺法合成半抗原和免疫抗原免疫动物,制备特异性强的单克隆抗体.在筛选硝基咪唑类单克隆抗体的基础上,建立ELISA检测方法,并研制出对鸡肉中硝基咪唑类药物残留检测试剂盒.试剂盒最低检测限为0.04μg/kg,样本添加回收率为69.4%～107.5%,批内变异系数为7.8%～14.6%,批间变异系数为10.90%～16.5%.该方法的建立为硝基咪唑类药物残留的检测提供了便捷、准确的分析检测手段.     

高效液相色谱法检测多种动物组织中氟喹诺酮类药物残留量的研究

建立了猪、牛、羊、鸡、兔的肌肉、脂肪、肝脏和肾脏四种组织中环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星和二氟沙星残留量检测的高效液相色谱法。试样经磷酸盐溶液提取,C18固相萃取柱浓缩净化后,用高效液相色谱分析,荧光检测器检测,外标法定量。5种药物在0.1～100μg/L浓度范围内线性关系良好。环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星和二氟沙星在五种动物肌肉、脂肪组织中的定量限为5μg/kg,在肝脏、肾脏组织中的定量限为10μg/kg;达氟沙星在肌肉、脂肪组织中的定量限为1μg/kg,在肝脏、肾脏组织中的定量限为2μg/kg。在指定的三个浓度添加水平下,5种药物在各组织中的平均回收率为62%～103%;批内变异系数为0.30%～18%,批间变异系数为1.0%～17%。该方法操作简单,准确度和精密度好,动物品种及动物组织覆盖范围广,可以很好地满足实际检测工作的需要。     

玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测方法的初步建立

为了研究玉米赤霉烯酮的间接竞争ELISA检测方法,试验采用牛血清白蛋白与玉米赤霉烯酮的耦联物(ZEN-BSA)做包被抗原,标准玉米赤霉烯酮(ZEN)做竞争抗原,以制备的可稳定分泌抗ZEN的单克隆抗体为基础,初步建立了ZEN间接竞争ELISA检测方法。结果表明:间接竞争ELISA检测方法线性范围为0.363 2～78.985 2μg/L,最低检测限为0.231 9μg/L;曲线回归方程为y=68.711-25.666x,其中R2=0.987 1,批内平均变异系数为3.10%,批间平均变异系数为6.26%,与相似毒素的交叉反应率均小于0.01%。说明建立的检测方法可以用于ZEN的检测。     

用于检测牛奶中噻苯咪唑ELISA检测试剂盒的研制

在噻苯咪唑(TBZ)单克隆抗体制备基础上,建立间接竞争酶联免疫吸附法(ELISA)并组装试剂盒。结果表明,试剂盒标准曲线的线性范围为1.0⁸1.0μg/L,回归方程为Y=-2.104 8x+1.038 2(R2=0.999 8),抗体对TBZ 50%的抑制浓度为4.3μg/L;对牛奶中TBZ的最低检测限为40μg/L,牛奶样品的加标回收率范围在75.8%81.0μg/L,回归方程为Y=-2.104 8x+1.038 2(R2=0.999 8),抗体对TBZ 50%的抑制浓度为4.3μg/L;对牛奶中TBZ的最低检测限为40μg/L,牛奶样品的加标回收率范围在75.8%¹04.8%,批内变异系数范围为6.4%104.8%,批内变异系数范围为6.4%¹1.9%,批间变异系数范围为8.2%11.9%,批间变异系数范围为8.2%¹0.0%;TBZ试剂盒(TBZ-Kit)对TBZ特异性良好,并可在210.0%;TBZ试剂盒(TBZ-Kit)对TBZ特异性良好,并可在2⁸℃条件下保存至少360 d。该试剂盒各项指标符合相关技术要求,具有快速、灵敏、专一、稳定的特点。     

直接竞争ELISA检测氯霉素残留的方法建立及初步应用

用混合酸酐法合成氯霉素的CAP抗原,用过碘酸钠氧化法合成CAP酶标记抗原,用ELISA方法对合成的CAP抗原、CAP酶标记抗原进行鉴定表明其与抗CAP单克隆抗体具有特异性反应。在此基础上建立了包被二抗的直接竞争ELISA方法。特异性试验结果表明,CAP琥珀酸酯、CAP琥珀酸钠盐的交叉反应率分别为107%、106.4%;甲砜霉素、氟甲砜霉素与CAP的交叉反应率小于0.016%;与其他结构类似物间未见交叉反应。该方法对CAP的检测限可达到0.1μg/L,IC50为11.6μg/L,线性范围0.1～100μg/L,批内变异系数小于11.5%,批间变异系数小于19.6%。对猪肉、鸡肉、蜂蜜分别添加1.0、3.0、10.0、30.0μg/L CAP标准品,回收率61.0%～102.0%,变异系数为6.6%～15.8%;对猪肉、鸡肉、蜂蜜中CAP的最低检测限分别为0.48、0.42、1.20μg/kg。