固定化金属螯合亲和膜制备及其性能研究

将纤维素滤纸经碱处理、环氧活化、偶联ＩＤＡ、固定化ＣＵ＋＋后制得大孔纤维素亲和膜。以ＢＳＡ为目标蛋白,研究亲和膜吸附蛋白质的性能,对亲和膜的流与负压、亲和膜性能的稳定性进行考察,并对解决金属离子泄露问题进行探讨。结果表明,采用普通纤维素滤纸可以制成性能优良的亲和膜,并有望在大规模蛋白质分离纯化上得到应用。     

氨基酸螯合金属盐对肉用仔鸡饲养效果的研究

用刚孵出的美国AA肉用仔鸡324只,随机分成6组,每组基础日粮相同,第1组添加无机锌、铜、锰硫酸盐,第2、3、4组分别添加氨基酸螯合铜,锌锰一种,另两种为无机硫酸盐,第5组三种氨基酸螯合铜、锰、锌均添加,第6组添加无机硫酸铜、锰、锌和氨基酸水解液。试验结果表明,使用氨基酸螯合金属盐的2—5组对肉用仔鸡增重效果显著(P<0.05),其中,以第5组为最好。与对照组(1组)相比增重提高5.77×10~(-2),而料肉比降低了3.59×10~(-2)。从经济效益上比较,以第4组添加氨基酸螯合锰为最好。通过屠宰试验,测定羽毛、血、肝、胫骨中铜,锰,锌的含量,以第4组锰的沉积量比对照1组有明显提高,锌,铜则无明显差异。氨基酸螯合金属盐对胴体品质无明显影响。     

柳橙皮基可降解膜的制备及其性能研究

为探索新型可降解膜材料的制备方法及其性能,以柳橙皮为成膜基材,海藻酸钠和羧甲基纤维素钠为增稠剂,甘油为增塑剂,采用流延法制备柳橙皮膜,并探究了柳橙皮浓度、增稠剂浓度、增塑剂浓度对膜力学性能和阻隔性能的影响。结果表明:柳橙皮浓度为1.5%,海藻酸钠浓度为0.1%,羧甲基纤维素钠浓度为0.2%,甘油浓度为0.2%,此时膜的综合性能最佳。其主要指标:抗拉强度为24.08 MPa,断裂伸长率为15.73%,水蒸气透过系数为1.686×10~(-12)g·cm·cm~(-2)·s~(-1)·Pa~(-1)。研究表明,柳橙皮成膜性较好,且具有良好的力学性能和阻隔性能,是一种具有开发潜力的新型包装材料。     

脂肪酶的固定化及其性能研究

以脂肪酶为原料,通过单因素试验对影响脂肪酶固定化的因素进行分析,并运用响应面方法优化最佳工艺条件。结果表明:硅烷化试剂添加量0.35%、硅藻土与酶的质量比3.5∶1、温度29℃和时间4.5 h为脂肪酶的固定化最佳工艺组合,固定后的脂肪酶活力为2 206.67 U·g-1。     

蛋白质螯合铜对母猪繁殖力、仔猪生长性能及血清微量元素水平的影响

试验选用产前4周的长白×大约克母猪72头,随机分成3组。试验共设3个日粮处理：添加100% CuSO₄·5H₂O(对照组)、30%蛋白质螯合铜+70% CuSO₄·5H₂O(30%百乐铜组)和100%蛋白质螯合铜(100%百乐铜组),各日粮处理的Cu含量一致,研究有机微量元素蛋白质螯合铜对母猪繁殖力及其仔猪生长性能的影响。试验分妊娠期(1～28 d)和哺乳期(29～50 d)两阶段。结果表明：(1)日粮添加百乐铜可明显地减少母猪哺乳失重,有利于改善仔猪初生重(P>0.05);30%百乐铜组仔猪断奶重显著高于对照组和100%百乐铜组(P<0.01);(2)百乐铜可提高母猪日粮微量元素的消化率(P>0.05),改善日粮干物质的消化率(P<0.01);(3)100%百乐铜组母猪所产仔猪在14日龄(P>0.05)和21日龄(P>0.05)阶段均呈现血清Zn,Fe,Mn和Cu微量元素水平明显提高,证明母猪日粮添加百乐铜后Cu及其他微量元素的生物利用率得到提高和改善。结果表明：母猪日粮添加有机形式的蛋白质螯合铜——百乐铜可明显地提高仔猪血清微量元素水平,并随仔猪的生长发育,微量元素体况和贮备维持在一个较高的水平上。     

丝素-壳聚糖合金膜固定化超氧化物歧化酶的研究

采用富含自由氨基的丝素-壳聚糖合金膜为载体，吸附固定从柞蚕蛹提取分离的超氧化物歧化酶(SOD)，研究并确定了固定化的最佳条件，分别为酶浓度38U／mL、pH6．3、温度4-8℃、时间15h．制得的固定化酶活力为89．1U／g载体，酶的活力回收达到35．9％．     

壳聚糖微球的制备及其固定化木瓜蛋白酶的研究

用来源丰富且廉价,并具有许多优良生物特性的壳聚糖为原料,以简单易行的服交联法制备壳聚糖微球,并对其性状进行和分析。结果表明：它复合了壳聚糖与高分子微球的功能,然后,以壳聚糖微球为载体,用吸附－交联的联合固定化方法制备固定化木瓜蛋白酶,并研究了木瓜蛋白酶的最佳固定化条件。结果显示：木瓜蛋白酶的最佳固定化条件是给酶量为１．９２ｍｇ／ｇ、４～８℃吸附１２ｈ,再用体积分数为０．５％的戊二醛溶于４～８℃交联     

新型硅基固载材料的制备及固定化酶性能

利用溶胶-凝胶原理,以正硅酸乙酯（TEOS）为原料,3?鄄缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷（KH-560）为偶联剂,在酸性条件下发生缩合反应制备新型基质材料,通过红外光谱（FT-IR）,固体核磁共振波谱（CP/MAS 13C NMR）和X-射线衍射（XRD）对基质载体进行结构表征。通过交联-包埋固定化法制备新型纤维素固载酶,分析研究了固载酶及游离酶酶解不同微观尺度纤维素基质的酶学性能。结果表明:固载酶进行酶促反应的最优pH 4.0,最优温度为60 ℃,表明固载酶的热稳定性优于游离酶;测得固载酶的米氏常数与游离酶无显著差异;固定化纤维素酶的重复使用性和储存稳定性较游离酶均有较大改善。有关研究可为制备性能优良的固载酶提供一定借鉴。图9表2参20     

改性与修饰壳聚糖亲和层析纯化抑肽酶

为了解决抑肽酶制备过程中的高污染、高成本、吸附剂使用条件苛刻等问题,本试验采用化学改性与修饰壳聚糖为载体,共价法偶联牛胰蛋白酶,制成抑肽酶亲和吸附剂,将其直接亲和层析牛肺提取液,分离纯化高比活抑肽酶。抑肽酶抑制比活单位(BAEE/mg)为3 936.46,酶活性回收率70.81%,最后的纯化倍数达到114.37倍。     

比较免疫磁珠法与A蛋白亲和层析法纯化兔抗血清中的IgG

优化了免疫磁珠分离法纯化抗血清的实验条件,并与A蛋白亲和层析法比较纯化效果,以求得到一种简便、快速、高效的纯化IgG方法.结果表明：从5只新西兰兔获得210 mL试管凝集效价高达1∶5 120的兔抗鳗弧菌抗血清,磁珠与IgG结合10 min达到平衡,其最大结合量为0.227 mg/mL;免疫磁珠分离法与A蛋白亲和层析法得到的IgG纯度都很高,经过SDS-PAGE电泳都只得到25 ku和55 ku左右的两条带;免疫磁珠分离法得到的抗体ELISA效价高于A蛋白亲和层析法;免疫磁珠分离法反应所需时间（10 min）小于A蛋白亲和层析法所需的20 min,其得率（11.5 mg/mL）也高于A蛋白亲和层析法的10.25 mg/mL.     

免疫亲和层析法分离鸡补体C3d蛋白研究

利用抗鸡C3 21肽抗体制备免疫亲和层析柱,对鸡补体C3d进行了分离,并采用间接酶联免疫吸附实验(间接ELISA),对洗脱液中的C3d组分进行了检测,以SDS-PAGE电泳方法对分离到的C3d进行了检测。结果表明,利用亲和柱层析能够分离得到纯度较高的C3d蛋白,为鸡血清中C3d的提取纯化提供了较为简便的方法。     

固定化醇氧化酶的制备和性质研究

以胺化纤维素为载体,固定醇氧化酶.应用分光光度法,找出了制备固定醇氧化酶的最佳反应条件,同时对固定化酶的性质进行测定.结果表明,固定化酶的最适反应pH值为7.4;最适反应温度为35℃,比溶液酶提高了10℃.米氏常数为13.8 mg·mL-1,略高于溶液酶(3.5 mg·mL-1).固定化酶表现出非常好的重复使用稳定性,重复使用9次后,剩余活力为70%.     

拟南芥NF-YC9重组蛋白的制备

NF-YC9是模式植物拟南芥核因子Y家族成员之一,在开花调控等过程中发挥重要作用,但其蛋白的特性及其作用的分子机制尚待探究。本文首先扩增获得了NF-YC9基因的序列,采用重组技术构建了与麦芽糖结合蛋白MBP编码基因融合的重组表达载体,将其转化到大肠杆菌BL21中,进行了MBP-NF-YC9融合蛋白的诱导表达,并借助直链淀粉亲和层析介质纯化技术获得了电泳纯的MBP-NF-YC9重组蛋白,以备进一步对NF-YC9蛋白的生化特性进行全面检测。     

玉米SOD的分离与纯化

探索高速、快速的玉米SOD分离与纯化方法,旨在为玉米SOD的规模化生产提供依据。利用金属螯合亲和层析和DEAE-纤维素离子交换层析相结合的方法分离纯化玉米SOD,得到2种达到电泳纯的SOD组分(A、B),并对它们的基本性质进行了初步分析。SDS-PAGE法测定A、B两组分的亚基分子量分别为20 kD和16.4kD;由电泳后的定位染色情况可知,这2种SOD组分均属于Cu/Zn-SOD;等电聚焦表明,A、B两组分的等电点分别为7.2和6.9。     

谷氨酸脱羧酶亲和层析介质制备

将 Sepharose 4B用环氧氯丙烷活化 ,接丁二胺臂 ,再用环氧氯丙烷活化 ,与谷氨酸的 N- 2氨基偶联。在 N ,N-二环己碳化二亚胺催化下 ,以接臂的胶与谷氨酸的 C- 5和 C- 1羧基基团偶联。结果表明 ,谷氨酸 N- 2氨基偶联和 C- 1羧基偶联的亲和介质对小麦谷氨酸脱羧酶有部分亲和作用 ,洗脱下的酶活低 ,而谷氨酸 C- 5羧基基团偶联的层析介质对小麦谷氨酸脱羧酶有完全亲和作用 ,洗脱的酶活高。谷氨酸能从亲和材料上洗脱掉脱羧酶 ,但它抑制酶活 ,而同等浓度的 4-氨基丁酸和谷氨酰胺梯度洗脱没有作用     

一种快速纯化相思子凝集素的方法

介绍了一种快速提取、纯化相思子凝集素(Abrus agglutinin,AGG)的方法。以Sepharose 6B(琼脂糖凝胶)为亲和层析介质,结合Hiload 26/60 Superdex 75凝胶层析柱,粗提物经2步层析分离纯化,获得了高纯度的AGG。SDS-PAGE电泳时其相对分子量约为65.4 kD,凝集兔红细胞的最小浓度约为0.5μg/mL,LD50为3.6 mg/kg。采用该方法可从相思豆中快速制备高纯度AGG。     

稻瘟菌Rac1蛋白的原核表达与纯化

Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)是Rho族蛋白主要成员,在稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)的侵染致病过程中发挥重要作用.本研究目的是采用结构生物学的方法进一步探究Rac1结构与功能以及与其他蛋白互作的机制,进一步阐释其致病机制.试验以稻瘟菌的cDNA为模板,根据Ras相关的C3肉毒素底物1基因(MoRac1)序列设计特异性引物进行PCR扩增,克隆了MoRac1基因并构建原核表达载体pHAT2-Rac1,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.SDS-PAGE检测与Western blot分析表明,pHAT2-Rac1在BL21(DE3)中表达,大小为25kD.通过亲和层析、离子交换与分子筛对重组蛋白进行纯化,获得了高纯度的目的蛋白.该蛋白的表达与纯化对其结构功能的研究奠定了基础.     

离子交换色谱法对肌肉中钙激活酶分离纯化的研究

试验通过离子交换色谱法对肌肉中钙激活酶(Calpain)进行定量分析研究,确定了Calpain粗提液制备工艺。对Calpain粗提液进行全波长紫外扫描说明276～280nm处有一个吸收高峰。应用DEAE离子交换层析对Calpain进行纯化,用0～500mmol·L-1NaClTris-HCl进行离子强度线性梯度洗脱,在280nm波长下测定洗脱液的光吸收值,洗脱得3个蛋白峰,μ-Calpain和m-Calpain分别在NaCl为130～180mmol·L-1和260～300mmol·L-1时洗脱下来,钙激活酶抑制蛋白(Calpastatin)在NaCl为70～110mmol·L-1时洗脱下来。Calpain分子量为110000u,通过电泳试验表明,本检测结果提取液正好在分子量约为110000u处有一条清晰的带,说明所得提取物为Cal-pain,而且纯度较高。