德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶研究

[目的]优化德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵产亚油酸异构酶工艺。[方法]以亚油酸为诱导物,考察不同因素对德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶的影响。[结果]德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶的最佳工艺为：在底物添加量1.5‰、发酵温度37℃、发酵时间35h时,亚油酸异构酶酶活可达21.67U/ml。[结论]以亚油酸为诱导物应用德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶,工艺切实可行。     

不同乳酸菌亚油酸异构酶酶学性质的比较

对不同乳酸菌菌种中提取出的亚油酸异构酶进行了酶学性质的比较。结果表明,嗜酸乳杆菌CGMCC1.1854亚油酸异构酶的最适p H为6.5,最适温度为30℃,以亚油酸为底物时酶的米氏常数Km为18.99mmo L·L-1,Vmax为1.58μg·m L-1·min-1;植物乳杆菌CGMCC 1.557亚油酸异构酶的最适p H为6.5,最适温度为45℃,以亚油酸为底物时酶的米氏常数Km为14.83 mmo L·L-1,Vmax为1.75μg·m L-1·min-1;植物乳杆菌3-9亚油酸异构酶的最适p H为6.5,最适温度为45℃,以亚油酸为底物时酶的米氏常数Km为14.26 mmo L·L-1,Vmax为1.94μg·m L-1·min-1。     

费氏丙酸杆菌谢氏亚种和植物乳杆菌亚油酸异构酶结构及酶学性质

 【目的】对来源于植物乳杆菌（Lactobacillu plantarum）和费氏丙酸杆菌谢氏亚种（Propionibacteriu freudenreichii ssp. shermanii）亚油酸异构酶酶学特性开展研究,探讨不同来源的亚油酸异构酶酶学性质存在的差异。【方法】通过酶反应动力学方法及电泳技术测定了酶的最适反应条件、米氏常数、酶的分子量,并在此基础上,采用高效液相色谱（HPLC）与电喷雾离子化/质谱（ESI-MS）相结合的方法测定了L. plantarum和P. freudenreichii ssp. shermanii亚油酸异构酶的氨基酸序列。【结果】P. freudenreichii ssp. shermanii亚油酸异构酶的最适pH为8.0,最适反应温度是30℃,Km=20.53 μmol•L-1,Vmax=0.44 μg•ml-1•min-1;L. plantarum亚油酸异构酶的最适pH为7.5,最适反应温度是为50℃,Km=17.85 μmol•L-1,Vmax=0.73 μg. ml-1•min-1。【结论】来源于L. plantarum和P. freudenreichii ssp. shermanii亚油酸异构酶的全氨基酸序列不同,但两者具有一定的同源性,且两者酶学特性也有差异。     

响应面法优化植物乳杆菌产亚油酸异构酶的发酵工艺

采用响应面法对植物乳杆菌的发酵产酶条件进行了优化.选取发酵时间、发酵温度、接种量和底物添加量作为考察因素,在单因素试验基础上选取试验因素与水平,根据中心组合(Box-Benhnken)试验设计原理,采用4因素3水平的响应面分析法并依据回归分析确定了各工艺条件的影响因子,同时以亚油酸转化率为响应值作响应面和等高线,分析了各个因素的显著性和交互作用.植物乳杆菌产亚油酸异构酶的最佳发酵条件为:发酵时间为30.21 h、发酵温度为36.23 ℃、接种量为1.99%、底物添加量为9.62%.在最佳发酵条件下,实际亚油酸转化率为20.46%.     

德氏乳杆菌对鸡肠道菌群的影响

[目的]探索德氏乳杆菌对鸡肠道菌群的影响。[方法]从肉鸡肠黏膜上分离培养制备试验菌株。在45只肉鸡雏苗中投喂添加由单一德氏乳杆菌制备的微生态制剂和土霉素,在55d的投喂期内,采用平板计数法检测好氧性异养菌、鸡伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和德氏乳杆菌的数量。[结果]从肉鸡肠黏膜上分离培养得到6株菌,均为G+菌,生理生化鉴定表明,S2为嗜酸乳杆菌,S4为德氏乳杆菌乳亚种,S6为德氏乳杆菌德氏亚种,S1、S3和S5为粪肠球菌。在投喂冻干菌粉30d后德氏乳杆菌数量达到稳定并在肠道内定植。同时,由于德氏乳杆菌的抑制作用,肠道中的鸡伤寒沙门氏菌数量下降最明显。德氏乳杆菌对鸡肠道的好氧性异养菌没有任何影响。[结论]德氏乳杆菌对鸡肠道菌群的影响与抗生素具有相近的效果,表明德氏乳杆菌作为饲料添加剂可以取代抗生素应用在肉鸡的养殖中。     

CRISPRs在德氏乳杆菌中的检测与同源性分析

本研究检测了本实验室德氏乳杆菌中的CRISPRs结构,并对其重复序列和间区序列进行了同源性分析.结果显示,供试菌株L7和L9中均含有CRISPRs序列,分别为3 323 bp和3 015 bp,多重比对后的重复序列8～12位与21～17位碱基互补形成回文结构;重复序列大小(29 bp)与标准菌株基本相同,但其同源性与菌...     

微囊化对重组亚油酸异构酶酶学性质的影响

本试验利用层层自组装技术,以聚电解质PAH和PSS为微囊化材料,将以重组菌株JM109-LAI-pQE30表达亚油酸异构酶,纯化后进行微囊化,对微囊化前后的LAI酶学性质研究。试验表明,微囊化LAI时,CaCl_2:Na_2CO_3:LAI的比例为1:1:2时,LAI的固载率达95%以上。微囊化LAI最适反应温度为55℃,最适反应pH为5.5。微囊化的LAI在热稳定性和酸碱稳定性方面优于游离LAI。此研究结果为LAI的进一步应用奠定基础。     

费氏丙酸杆菌谢氏亚种和植物乳杆菌中亚油酸异构酶的分离纯化

采用盐析、Sephacryl S-200HR凝胶过滤层析、DEAE Sepharose F.F.离子交换层析相结合的方法,分别建立了来源于费氏丙酸杆菌谢氏亚种（P. feudenreichii ssp. shermanii）和植物乳杆菌（L. plantarum）的亚油酸异构酶的分离提取步骤。结果表明不同来源的亚油酸异构酶在纯化的过程中表现出不同的洗脱特性,P. freudenreichii ssp. shermanii亚油酸异构酶的分子质量约为56 kDa, L. plantarum亚油酸异构酶的分子质量为50.65 kDa。不同来源亚油酸异构酶的分离纯化方法存在差异。     

植物乳杆菌亚油酸异构酶基因在大肠杆菌中的表达和功能鉴定

应用基因重组表达技术将一个推定的植物乳杆菌亚油酸异构酶基因(pli18)克隆到pET-30a载体的T7启动子的下游,构建pET30-pli原核表达载体。经IPTG诱导和低温培养20h后,在其宿主菌E.coliBL21(DE3)中成功表达了可溶性的PLI18重组蛋白。通过Ni-NTA亲和层析纯化和酶反应产物的气相色谱检测表明,PLI18重组蛋白具有亚油酸异构酶活性,从而证明pli18基因为1个新的亚油酸异构酶基因。为亚油酸异构酶的进一步研究及其在农产品加工中的应用打下了基础。     

枯草芽孢杆菌凝乳酶的酶学性质

对枯草芽孢杆菌凝乳酶的酶学性质进行了研究,结果表明:枯草芽孢杆菌凝乳酶作用的最适反应温度为55℃、最适pH值为5.0,在pH值为6.0时最稳定,在65℃保温60 min酶活基本丧失,Mn2+、Li+、Fe2+、Na+、K+、Mg2+、Ca2+对该凝乳酶有促进作用,Mg2+、Ca2+促进作用较为明显,而Cu2+对该酶有明显的抑制作用;酶修饰剂中β-巯基乙醇对凝乳酶活力的影响较小,EDTA可抑制该凝乳酶的活力;蛋白酶抑制剂σ-phenantroline可以明显抑制酶活性,证实该酶为金属蛋白酶类。在与商品酶对比中发现枯草芽孢杆菌凝乳酶与商品酶的酶学性质相近。     

亚油酸异构酶作用玉米油脂生产共轭亚油酸条件研究

玉米油脂中含有丰富的不饱和脂肪酸,其中主要为亚油酸和油酸。亚油酸可以经过亚油酸异构酶作用转变为功能性物质-共轭亚油酸(Conjugated Linoleic Acid,CLA)。共轭亚油酸具有抗癌、减肥、调节免疫等许多生理功能。文章主要研究亚油酸异构酶作用玉米油脂生产共轭亚油酸的条件,提高共轭亚油酸的生成量。通过试验确定其最适条件为:玉米油乳浊液浓度2%,40℃条件下反应,酶与其作用比例1:5,反应时间150min。CLA产量较高,达25.7μg·mL-1。     

共轭亚油酸生成条件试验研究

用嗜酸乳杆菌在MRS培养基中转化亚油酸(LA)生成共轭亚油酸(CLA)。结果表明:嗜酸乳杆菌在MRS培养基中(pH值4.0),38℃下,添加0.025%(V/V)LA诱导亚油酸异构酶产生,接种1.5%(V/V)、LA浓度1.8%(V/V)的条件下,CLA的总产量较大。     

接种产CLA乳酸菌对青贮中CLA含量的影响

试验研究了产CLA乳酸菌接种量、葵花籽油添加量对甘薯、马铃薯、胡萝卜以及白萝卜等4种青贮中CLA含量的影响.结果表明,在不添加油脂条件下,接种乳酸菌后4种青贮中CLA含量均明显增加(P<0.05或P<0.01);随着乳酸菌接种量的增加和油脂添加量的加大,青贮中CLA含量呈现先增加后减少的趋势,对于不同青贮原料来说,接种乳酸菌后甘薯和白萝卜青贮中CLA含量明显高于胡萝卜和马铃薯(P<0.05);当葵花籽油添加量达到9～12 mg·g-1青贮时,青贮中CLA含量最高;当乳酸菌接种量为6×107 g-1青贮时,青贮中CLA含量最高,一旦乳酸菌接种量超过8×107 g-1青贮时,青贮中CLA含量开始明显下降(P<0.05).     

一株深海细菌Idiomarina sp.406-6的微生物学特征分析

从印度洋海区水深为4 517 m的深海泥样中筛选到一株细菌,菌株号为406-6.通过形态学特征和生理生化特征分析表明,菌株406-6为革兰氏阴性菌,细胞呈稍微弯曲的棒状.菌落为乳白色,圆形.菌株406-6生长需要NaCl,62 ℃时生长微弱,能利用小分子的甘氨酸作为唯一碳源生长,但不能利用L-阿拉伯糖、D-木糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-甘露糖、蔗糖、D-甘露醇、D-海藻糖和D-纤维二糖作为唯一碳源.能水解酪素、明胶、脱脂奶粉、Tween 40和Tween 60,但是不能水解淀粉、Tween 20和Tween 80.16S rRNA基因序列比对分析表明,菌株406-6与Idiomarina属的I.fontislapidosi F23T相似性最高(98.0%),和其他属的相似性均低于94.0%.Neighbor-joining系统树中,菌株406-6和Idiomarina属内的菌种相聚成簇.基于以上微生物学特征分析表明,406-6为Idiomarina属内的一个潜在的细菌新物种,该研究丰富了Idiomarina属的物种多样性,为微生物资源的开发利用奠定基础.     

嗜酸乳杆菌生产共轭亚油酸的发酵条件研究

[目的]为提高微生物法发酵合成共轭亚油酸(CLA)的产量,优化嗜酸乳杆菌生产共轭亚油酸的发酵条件.[方法]试验以亚油酸为底物,利用嗜酸乳杆菌合成共轭亚油酸,选取对CLA的生成量影响显著的几个因素:底物浓度、接种量、pH、发酵时间、发酵温度进行单因素试验,并在此基础上进行正交试验优化发酵条件.[结果]单因素试验得到的最优发酵条件为底物浓度1.0 mg/ml、接种量4％、初始pH 5.5、发酵时间48 h、发酵温度37℃.正交试验发现,底物浓度、发酵时间、发酵温度显著影响CLA的合成产量.最终得到的最优发酵条件为底物浓度为1.5 mg/ml、接种量2％、初始pH 5.5、发酵时间36 h、发酵温度33℃.用气质联用法对产物进行定性分析,证明产物是c-9,t-11 CLA.此时,CLA的产量为91.54 μg/ml.[结论]试验优化了共轭亚油酸的发酵条件,为更有效率地利用嗜酸乳杆菌生产共轭亚油酸提供了理论依据.     

共轭亚油酸异构酶基因克隆与表达研究进展

从微生物共轭亚油酸异构酶基因的克隆,重组共轭亚油酸异构酶基因在原核和真核细胞中的表达等方面对共轭亚油酸异构酶基因克隆与表达研究的最新进展进行了综述。     

产共轭亚油酸乳酸菌的筛选及产物分析

为获得共轭亚油酸 (CLA)乳酸菌的菌种 ,从酸菜汁中筛选出 1株CLA生成能力较强的的乳酸菌 ,发酵液中CLA生成量为 2 6 7 5 μg·mL-1。此株为革兰氏阳性杆菌 ,过氧化氢酶阴性 ,4 5℃下生长 ,15℃基本不生长。基于生化试验和培养基成分的利用情况 ,鉴定为植物乳杆菌Lactobacillusplantarum。经气相色谱检测 ,该菌种合成的CLA产物为c9,t11/t9,c11 CLA和t10 ,c12 CLA的混合物。     

响应面法优化鼠李糖乳杆菌产共轭亚油酸的转化条件

以鼠李糖乳杆菌UV3-4为出发菌株,进行鼠李糖乳杆菌转化亚油酸生产共轭亚油酸转化条件的优化研究。通过单因素试验考察发酵温度、发酵时间、发酵pH和底物亚油酸(LA)添加量对CLA产量的影响,采用响应面法建立CLA产量与各影响因子之间的二次回归方程模型,获得最佳转化条件:发酵温度38℃,发酵时间23.4 h,pH 6.5,底物LA添加量为0.76 mg/m L,此条件下CLA的产量为37.28μg/m L。     

短乳杆菌产葡萄糖异构酶培养基的响应面法优化

【目的】优化产葡萄糖异构酶短乳杆菌(Lactobacillus brevis)培养基,提高短乳杆菌产葡萄糖异构酶的能力。【方法】采用基于非完全平衡块原理的Plackett-Burman法和响应面法(Response Surface Methodology,RSM),对短乳杆菌发酵产葡萄糖异构酶的培养基进行优化。【结果】①短乳杆菌产葡萄糖异构酶的3个主要影响因子为:木糖、玉米浆干粉和MgSO4.7H2O。②通过最陡爬坡试验、旋转中心组合设计及响应面分析确定的短乳杆菌最适发酵培养基组成为:木糖13.43 g/L、玉米浆干粉23.14 g/L、MgSO4.7H2O 2.54 g/L、MnSO4.4H2O 0.25g/L、酵母膏5 g/L、醋酸钠5 g/L、柠檬酸三铵2 g/L、K2HPO42 g/L、Tween-80 1 mL/Lp、H 6.2~6.4。【结论】获得了能够提高短乳杆菌产葡萄糖异构酶能力的培养基,在优化培养基的条件下,葡萄糖异构酶总活力达到80.5 U,较优化前的60.5 U提高了33.06%。