文冠果种子蛋白质提取及组分分析

探索文冠果种子蛋白质及其蛋白质组分的提取方法,采用凯氏定氮法及聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)进行分析,为文冠果种子蛋白的高效提取与开发利用奠定基础。结果表明,文冠果种仁的蛋白质质量分数为26.29%,经脱脂后其脱脂粉中蛋白质量分数为62.04%。采用连续分级提取法得到文冠果种脱脂粉中球蛋白、清蛋白、谷蛋白及醇溶蛋白组分的质量分数分别为26.38%、21.50%、2.49%和1.99%,并采用一次直接提取法可得到水溶蛋白、盐溶蛋白、醇溶蛋白与碱溶蛋白的提取率分别为34.63%、75.57%、7.26%和80.09%。采用碱溶酸沉法对脱脂后的文冠果种进行蛋白提取,蛋白质提取率达84.06%,得率为36.40%,可得到纯度为83.92%的蛋白粉。SDS-PAGE分析图谱表明文冠果种子蛋白的主要亚基分子质量分布在20～60ku,并计算得出4种蛋白组分的主要亚基分子质量,为文冠果蛋白组分的进一步研究提供依据。     

几种植物叶蛋白质溶解特性的研究

本文研究了几种植物叶蛋白在五种溶剂中的溶解特性,结果表明:(1)同种植物的叶蛋白在五种溶剂中,均有一定的溶解性。(2)不同种植物的叶蛋白溶解性各不一样,不同种植物叶蛋白的提取,必须分别探索其适当的溶剂和浓度。(3)花生、水葫芦、苜蓿、葛藤四种植物的叶片,分别提取的粗蛋白,占总可溶性粗蛋白的百分率趋势是:水溶部分>碱溶部分>醇溶部分>酸溶部分(或盐溶部分),而且水溶部分与碱溶部分之和均在53%以上.由此笔者认为,水和稀碱溶液可作为自绿叶中提取蛋白质的良好溶剂。     

白果蛋白质的分离、纯化、理化特性及其抗氧化活性研究

 选用江苏省泰兴市大佛指白果为原料，采用盐溶和盐析的方法，从白果中分离制备出清蛋白（GAP）、球蛋白（GGP）和盐溶蛋白（GSP）。白果蛋白中以清蛋白和球蛋白为主,醇溶蛋白、碱溶蛋白和复合蛋白含量很少。化学成分分析表明，制得的GAP、GGP和GSP中以GAP的蛋白质纯度高，氨基酸组成丰富、合理，属于优质蛋白质。活性试验结果表明GAP的抗氧化活性远高于GGP。     

玉米蛋白质组分电泳特性的比较研究

对比了10种玉米的盐溶蛋白和水溶蛋白，乙酸溶蛋白，醇溶蛋白以及胚和胚乳蛋白酸性PAGE的谱带，结果发现，玉米水溶蛋白，盐溶蛋白，乙酸溶蛋白和胚蛋白酸性PAGE谱带极为相似，均可以用于品种鉴定。     

盐胁迫下番茄幼苗中不同性质蛋白表达差异的研究

[目的]分析不同盐浓度胁迫下番茄幼苗叶中不同性质蛋白表达的差异。[方法]以番茄种子为试材,置于附加不同盐浓度的1/2MS培养基上培养出番茄幼苗,然后分别提取其叶中的水溶蛋白、盐溶蛋白、酸溶蛋白、醇溶蛋白和总蛋白,并运用SDS-PAGE技术对其蛋白组成和表达量进行比较分析。[结果]不同盐浓度处理下,叶片蛋白质的组成和数量均发生变化,高盐浓度时多出了66.2 kD左右的蛋白质,说明在高盐浓度胁迫下植物产生了某些抗逆性蛋白;总蛋白条带比较相似,总蛋白含量和盐溶蛋白含量略微减少,水溶蛋白含量略微增加,并且在盐溶蛋白中增加了1条带,这些蛋白变化可能是盐胁迫下应激反应的相关蛋白。[结论]该研究为植物的抗病性选育提供一定的理论基础。     

玉米胚芽分离蛋白提取率及氨基酸组分分析

利用水、氯化钠、乙醇、氢氧化钠,分别提取玉米胚芽中的水溶蛋白、盐溶蛋白、醇溶蛋白、碱溶蛋白,确定各种分离蛋白的最佳溶剂条件.样品过80目筛后,脱脂处理,取5 g脱脂样品进行试验.结果表明,水溶蛋白的最佳溶剂量为水80 mL,提取率为37.13％;盐溶蛋白的最佳溶剂浓度为质量分数为6％的氯化钠溶液,提取率为25.34％;...     

用15N示踪研究小麦品种 Ⅱ.后期施N肥对冬小麦籽粒品质及籽粒蛋白质组分的影响

本文主要用~(15)N 研究示踪后期追施肥对冬小麦籽粒品质及蛋白质组分的影响。试验结果表明随追肥时期后延,面粉中的蛋白质和赖氨酸含量逐渐增加,但蛋白质中的赖氨酸的含量逐渐降低,从组分氨基酸的分析结果看:盐溶蛋白的必需氨基酸最平衡,谷蛋白和残渣蛋白居中,醇溶谷蛋白最差。随籽粒蛋白质含量的增加、谷蛋白和残渣蛋白的比例较稳定,盐溶蛋白则逐渐降低、醇溶谷蛋白逐渐提高。当以面粉中的各组分百分含量表示时,盐溶蛋白在处理间无显著差异,残渣蛋白也较稳定,醇溶谷蛋白和谷蛋白的百分含量均随蛋白质的百分含量增加而增加。另外随蛋白质含量的提高,面粉沉淀值显著增加,从分析结果看,沉淀值与醇溶谷蛋白和谷蛋白有高度相关。试验结果还表明:杨花期施肥对面粉中的谷蛋白含量贡献最大。其次是醇溶谷蛋白。无论是营养品质还是烘烤品质,同一处理均是 NE_(70112)优于农大139。     

利用RNAi抑制B-hordein合成降低大麦籽粒蛋白质含量

【目的】通过RNAi策略抑制大麦籽粒B-hordein的表达,获得高氮肥水平下籽粒蛋白质含量降低的转基因大麦新种质,探索大麦品质改良新途径。【方法】采用同源PCR技术克隆大麦B-hordein核心保守序列,通过Gateway技术构建大麦B-hordein的RNAi植物表达载体pBract207-zz-gp4,利用农杆菌介导法转化大麦Golden Promise幼胚,获得转基因植株。通过PCR检测、Southern杂交验证RNAi构件在转基因大麦及其后代基因组的整合情况。采用半定量RT-PCR分析转基因大麦花后不同发育时期B-hordein转录表达情况。基于近红外谷物分析仪测定蛋白质含量,并进行醇溶蛋白SDS-PAGE检测,以筛选蛋白质含量降低的转基因大麦株系。开展氮肥运筹相关试验,检验RNAi效率及高氮肥水平下转基因大麦蛋白质含量变化情况。【结果】获得大麦B-hordein片段2条（Gp4和Gp5）,测序结果表明该片段大小为349 bp,聚类分析表明该序列跟已知大麦醇溶蛋白基因同源性最高达92%,与该基因已登录的mRNA序列同源性高于98%,确认所得片段为大麦B醇溶蛋白基因片段。利用Gateway技术将Gp4片段正反向插入载体pBract207,反向重复序列用i18 和 iv2 intron连接,构建了Ubi启动子驱动的大麦B-hordein RNAi植物表达载体 pBract207-zz-gp4。通过农杆菌介导转化大麦Golden Promise幼胚,结合目标基因及筛选标记基因的PCR验证,获得含有RNAi构件及筛选标记基因的转基因大麦株系11个。Southern杂交检测表明RNAi构件已经稳定整合到T₂/T₃转基因大麦基因组。随机选取6个T₃转基因大麦株系,半定量RT-PCR结果表明花后不同发育时期转基因大麦籽粒B-hordein表达水平明显低于非转基因对照,20 d时转基因株系表达量不仅相比同期对照降低28.19%-55.19%,而且在各时期中也最低。利用随机选取的T₁和T₃籽粒进行蛋白质含量测定表明,8个转基因大麦株系的蛋白质含量相比非转基因对照显著降低,SDS-PAGE电泳结果显示与非转基因相比,转基因各株系B-醇溶蛋白比率有不同程度降低,其中3个株系B-醇溶蛋白比率降低明显,平均减幅为49.42%。采用蛋白质含量降低的转基因大麦株系RNAi-20开展氮肥运筹试验,结果表明,高氮肥水平HN₂及HN₃处理,该株系蛋白质含量显著低于非转基因对照;施以等量高氮肥时,伴随氮肥后移（HN₂到HN₃）,该株系总蛋白含量相对非转基因对照逐渐降低。SDS-PAGE电泳结果显示B醇溶蛋白含量降低,电泳带型发生变化。【结论】RNAi技术能抑制籽粒B-hordein表达,降低B-醇溶蛋白含量,高氮肥水平下能显著降低大麦蛋白质含量。     

转高赖氨酸含量基因(Cflr)小麦植株的获得及种子中蛋白质和赖氨酸的含量分析

为了获得种子总蛋白和赖氨酸含量都提高的转基因小麦新种质,构建了高赖氨酸蛋白基因(Cflr)的植物表达载体pAHC25-Cflr,用基因枪法将其导入扬麦158,通过PCR、RT-PCR和半定量PCR对转基因小麦植株T0及T1代进行了检测,同时对种子总蛋白含量与结合态系赖氨酸含量进行了测定和分析。检测结果表明外源基因已稳定整合到转化植株T0和T1代基因组中,并在小麦不同转基因株系的T1代中获得了表达,但不同株系的表达丰度不同。在检测的12株转基因株系中,有11个株系籽粒蛋白质的含量与其受体品种有显著差异,其中有6个株系的增幅在10%以上,最高的增加了22.6%;有10个株系种子干重的结合态赖氨酸含量有明显提高,8个株系与受体品种的差异达极显著水平,最高的Y1-2增幅达39.5%;从种子的蛋白质赖氨酸含量来看,有9个株系较受体品种有显著提高,其中4个株系与受体品种的差异达极显著水平,增幅最高的Y1-12蛋白质中赖氨酸含量比受体品种提高了22.9%。     

玉米种子蛋白质电泳鉴定品种的研究──醇溶蛋白和盐溶蛋白的比较

用十二烷基碘酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）对玉米种子醇溶蛋白和盐溶 蛋白分别用于区分不同品种的效果作了比较。种子醇溶蛋白采用了７０％乙醇和 ５５％异丙醇两种溶剂分别提取。结果表明，两种溶剂提取的醇溶蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ 带谱均较简单，品种间差异小，难以把各供试品种互相区分开来。而种子盐溶 蛋白则显示出丰富的带谱，品种间在谱带数目、带的分布与强弱等特点均可见 较明显的差异，据此可将各供试品种互相区分开来．杂交后代中，还可见到某 些“杂种带谱”。利用玉米种子盐溶蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ在玉米品种鉴定中显示了一 定的应用潜力。     

高粱颖果发育过程中蛋白质组分、氨基酸、淀粉和丹宁含量变化的研究

本文以9个高粱品种为试材,研究了高粱颖果发育过程中蛋白质及蛋白质组分,清蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶性蛋白、赖氨酸、色氨酸、淀粉、丹宁的累积变化过程。结果表明：清蛋白和球蛋白的含量在颖果发育的各个时期均为最少,仅占总蛋白质的10-15%,累积高峰在灌浆至乳熟期;谷蛋白的含量居第二位,在成熟颖果中占总蛋白质的20-30%,累积高峰在灌浆至乳熟期;醇溶性蛋白的含量在颖果发育的各个时期均居首位,累积高峰在蜡熟至完熟期;赖氨酸含量随颖果成熟度的提高而减少,积累高峰在灌浆期;色氨酸的累积过程则和赖氨酸相反,蜡熟至完熟期颖果中的含量最高;总淀粉和直链淀粉的累积过程基本一致,随颖果成熟度的提高而上升,累积高峰在蜡熟至完熟期;枝链淀粉则相反,累积高峰在灌浆至乳熟期。     

优质稻颖果发育过程蛋白四组分和氨基酸含量变化

本文以两个优质籼稻品种为材料研究优质稻颖果在发育进程中蛋白四组分、赖氨酸、色氨酸含量的累积变化过程。结果表明:颖果干重和蛋白质含量从开花后6—21d期间持续增长,尤以花后前16d更甚,两个品种颖果在整个发育过程中干重变化金晚1号呈“S”形曲线,金优1号呈抛物线,蛋白四组分在开花后8-11d期间都有很高的生成速率,赖氨酸的百分含量随颖果成熟度的提高而降低,色氨酸的百分含量变化则相反。     

利用PTN系统快速解析转基因水稻种子可溶性蛋白非预期变异的来源

【目的】建立转基因（genetically modified,GM)水稻安全性评价的亲本对照-转基因株系-非转基因对照（parent control-transgenic plant-nontransgenic control,PTN)系统。通过实质等同性比对分析,追溯GM水稻种子蛋白质非预期变异的技术根源,为GM水稻的安全性评价提供技术支持。【方法】根据GM水稻植株培育的技术原理,收集转基因株系（transgenic line,T）、亲本品种（parent variety,P）及其他遗传学背景相关的非转基因组培再生株系（non-transgenic regeneration line from tissue culture,NR）和非转基因遗传分离阴性后代株系（non-transgenic segregated negative offspring line,NS）等对照样本。以转2mG2-epsps抗草甘膦GM水稻株系T13和T23及各自的PTN系统对照样本（P、NR和NS）为试验材料,以种子蛋白质含量和组分的非预期变异为研究对象,根据PTN样本间的多重比较结果解析并追溯GM水稻非预期变异的技术根源。水稻种子可溶性蛋白的提取采用分级提取法,依次用蒸馏水、5% NaCl、70%乙醇和0.1 mol·L-1 NaOH提取稻米清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白。蛋白含量测定应用Bradford法,蛋白组分分析采用SDS-PAGE电泳法。【结果】GM水稻株系T13和T23种子总可溶性蛋白含量分别比亲本显著降低3.29%和6.84%,主要受谷蛋白变异影响,但GM水稻变异的最大幅度小于天然水稻亲本P1和P2品种间差异,说明GM水稻种子可溶性蛋白含量变异在安全范围之内。与各自亲本相比,GM水稻株系种子清蛋白和醇溶蛋白组分差异不显著,球蛋白和谷蛋白个别组分存在显著或极显著变异,主要表现为含量的增减。T13株系的56 kD和24 kD球蛋白含量比亲本P1显著增加,T23的65 kD球蛋白含量比亲本P2极显著降低。GM株系T13和T23的谷蛋白组分变异趋势相似,与相应亲本相比,主要表现为19-23 kD和33-38 kD谷蛋白含量显著增加,100 kD和9 kD谷蛋白含量显著减少。突出的变异是GM水稻新增加了41 kD和56 kD谷蛋白组分,但这些变异新组分也同样存在于NR和NS对照样本中。GM水稻株系T13和T23的可溶性蛋白非预期变异的特征与相应的NR对照样本基本一致。NS23对照株系的清蛋白含量和球蛋白组分存在不同于T23和NR23的独特非预期变异。【结论】GM水稻种子总可溶性蛋白质变异主要受谷蛋白含量变异影响,变异幅度小于天然水稻品种间差异。GM水稻种子的清蛋白、醇溶蛋白组分未发生显著变异,球蛋白和谷蛋白个别组分发生了显著变异。GM水稻种子蛋白质非预期变异主要来源于组织培养无性系变异,转基因插入突变的影响较小。     

不同大豆品种籽粒及其豆腐中蛋白质组分的研究

选用２３个春大豆和夏大豆栽培品种。调查单株粒重，测定豆腐产量性状，籽粒蛋白质含量和蛋白质各组分含量。研究表明：大豆籽粒中球蛋白，清蛋白，，谷蛋白，醇溶谷蛋白，２Ｓ，７Ｓ，１１Ｓ球蛋白含量分别平均为２７．５４３％，６．９５２％，５．２９２％，１．９０１％，４．８６２％，５．３７４％和１７．３１４％。籽粒蛋白质各组分含量变异系数大。豆腐湿重，豆腐干重，豆腐湿体积与籽粒中７Ｓ，１１Ｓ球蛋白，清蛋白含量呈     

玉米高蛋白高赖氨酸新种质的选育及相关性研究

饲养业迫切要求高蛋白质又高赖氮酸的“双高”玉米，我们用高蛋白质种源与高赖氮酸种源杂交，在其后代中分别用选株自交、回交、系内混合授粉等方法结合蛋白质、赖氨酸的测定来选择“双高”优株，并对自交后代进行有关相关性研究。现已选育出一小批蛋白质含量１５．７９％～２２．８８％，赖氨酸含量０．４６％～０．６４％的双高种质；在相关关系分析中证明了籽粒蛋白质和赖氨酸含量呈显著正相关关系；在蛋白质四种组分分析中证明０２基因同样可以调整高蛋白质中四种蛋白的比例，富含赖氨酸的谷蛋白占粗蛋白的比例大幅度增加，上升到４０％左右，而赖氨酸含量极少的胶蛋白占粗蛋白的比例由普通玉米的５０％下降到２０％左右，可以认为，通过遗传育种手段可以同步提高玉米籽粒中的蛋白质和赖氨酸含量。     

南疆三种绵羊血清蛋白电泳分析

本研究采用醋酸纤维素薄膜电泳法测定也新疆南部三种绵羊血清蛋白及其各组份的含量。结果表明：新疆南部肉脂兼用型多浪羊血清总蛋白含量高，清球比值低。羔皮型卡拉库尔羊清球比高。但三种绵羊血清总蛋白含量和清球比的差异均不显著。而位于高寒区的肉脂兼用型巴音布鲁克羊γ－球蛋白的含量明显高于其它两种绵羊，差异显著。     

玉米品质性状的遗传相关和选择方案研究

 利用三重测交法对东农 2号玉米改良群体的 12个品质性状进行遗传相关及选择预期遗传进度的分析。结果表明 ,提高玉米的粗蛋白含量以直接选择为好 ,但是单纯地提高粗蛋白含量并不能改善蛋白质品质 ;对清蛋白与谷醇蛋白含量比的直接选择较易奏效 ,是改善玉米蛋白质品质的可行途径。提高玉米的总淀粉含量以直接选择为好 ,根据籽粒容重进行间接选择也可能有一定的效果 ,但是单纯提高总淀粉含量的同时可能会引起支链淀粉含量的提高 ;提高玉米的粗脂肪含量以直接选择为好 ,通过增加胚 /胚乳重进行间接选择也可能有一定的效果。     

甜杏仁分离蛋白的组成及部分理化特性

【目的】明确甜杏仁分离蛋白的相关理化性质,研究蛋白质性质变化与产品加工特性间的关系,开发高质量的甜杏仁产品。【方法】通过碱溶酸沉法制得甜杏仁粗蛋白,经Osborne分级法制备分离蛋白—清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,利用全自动氨基酸分析仪、环境电子扫描显微镜(ESEM)、圆二色光谱(CD)、差示扫描量热法(DSC)、热重法(TGA)及流变仪等,研究甜杏仁分离蛋白的氨基酸组成、表面形态特征、二级结构、热性质及流变性,并拟合出温度与分离蛋白黏度间的线性方程,计算其活化能Ea及频率因子K0。【结果】甜杏仁4种分离蛋白的氨基酸组成丰富,含有17种人体所需的氨基酸,包括8种必需氨基酸(含组氨酸),谷氨酸含量最多;清蛋白、球蛋白及醇溶蛋白表观结构较为紧密,呈聚集态,而谷蛋白则表现为松散、多孔的片状;分离蛋白二级结构分子构象中,α-螺旋及无规则卷曲占主要部分。由DSC结果可知清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白的热变性温度分别为62.84、72.98、78.33和45.70℃,热稳定性关系为:醇溶蛋白球蛋白清蛋白谷蛋白,结合DSC与ESEM可知聚集程度为:清蛋白醇溶蛋白球蛋白谷蛋白。4种甜杏仁分离蛋白的溶液均属于非牛顿流体,其黏度与温度符合阿累尼乌斯(Arrhenius)指数方程,能够很好地对实际情况进行拟合,可运用于指导实际生产。【结论】甜杏仁分离蛋白可作为一种优质植物蛋白来源,本研究结果对甜杏仁蛋白质产品的开发具有参考意义,有利于在产品开发及生产加工过程中对含蛋白产品的功能及品质进行控制,提高其附加值进而促进甜杏仁产业发展。     

不同产地芡实种仁中蛋白质与 淀粉组分差异性研究

以4个不同产地的芡实(Euryale ferox Salisb.)为试验材料,对其种仁中主要营养成分如蛋白质、淀粉组分进行了分析测定.结果表明,芡实种仁蛋白质主要由清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白构成;不同产地芡实的总蛋白质含量无显著差异,但4种不同蛋白的含量存在显著差异,其中3号芡实的清蛋白和球蛋白含量最高、醇溶蛋白和谷蛋白含量最低,1号芡实的醇溶蛋白和谷蛋白含量最高、清蛋白和球蛋白含量最低.SDS-PAGE图谱分析表明,4种不同产地的芡实均在45.0～66.2 kD处均含有一条明显的蛋白谱带,而3号芡实在20～45 kD范围内含3条明显蛋白谱带,表明3号芡实含有更多类型的蛋白组分或同工酶成分.此外,不同产地芡实种仁的直链淀粉和支链淀粉含量比值差异显著,其中2号芡实的支链淀粉含量最高,3号芡实支链淀粉含量最低.     

杂交水稻寻杂29种子蛋白质组分的研究

 本研究用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析寻杂29单粒种子中清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白的亚基组成.SDS-PAGE表明,没有巯基乙醇(ME)时,谷蛋白以二硫键连接亚基呈高分子量形式存在.寻杂29和常规品种云-1比较,谷蛋白在溶解性,结构方面存在差异.寻杂29与其三系亲本,以及云-1比较,它们的种子盐溶蛋白在多肽组成和含量上存在明显差异.水稻种子盐溶蛋白的差异可考虑作为种子纯度判断的指标.