分娩前后奶牛血浆差异表达蛋白初步分析

本研究运用双向电泳方法分析奶牛产前及产后1周血浆蛋白的差异表达,为理解围产期免疫抑制以及分娩前后奶牛的生理状态提供参考。血浆样品经过热SDS法处理后,使用pH4～pH7的胶条,在硝酸银染色的7.5%～17.5%的梯度聚丙烯酰胺凝胶上,利用PDQuest6.0图像分析软件检测到239个蛋白质点。比较奶牛产前及产后1周血浆蛋白差异表达情况发现,表达量变化3倍以上的点有12个。MADIL-TOF/TOF质谱鉴定出2种蛋白:白蛋白和结合珠蛋白。结合珠蛋白在产后1周的奶牛血浆中的含量显著增加,反映了产后奶牛的生理变化。但是需要结合其他标记共同作为疾病诊断的标记。     

中药对围产期奶牛血浆IL-2、IL-6含量的影响

为探讨中药对围产期奶牛血浆IL-2、IL-6含量的影响,本试验选择90头年龄、胎次和预产期相近,经临床检查健康的围产期荷斯坦奶牛,随机分成A、B、C三组,每组30头。A组,于预产期15天饲喂时添加中药加味四君子散(400 g/头),每天1次,连用5 d,分娩后当天灌服益母生化散2剂(400 g/头);B组,产前不添加中药,分娩后当天灌服益母生化散2剂(400 g/头);C组为对照组,产前不添加中药,产后灌服常用水2次,每次400 mL/头。在预产期15 d、7 d,产后0 d(分娩当天灌服益母生化散前计为0 d)、7 d和15 d时,在各组随机抽取10头奶牛颈静脉采血,测定血浆IL-2、IL-6的含量。试验结果显示,A组奶牛血浆IL-2含量明显高于B组、C组(P0.05或P0.01);血浆IL-6含量A组在产前7 d时低于B组、C组,差异显著(P0.05),而产后0 d、7 d、15 d,A组高于B组、C组,差异显著(P0.05)。     

奶牛乳腺组织蛋白质样品的制备及2-DE图谱分析

本研究以奶牛乳腺组织为对象,采用了普通离心、超速离心、2-D clean-up kit和TCA/丙酮沉淀方法制备蛋白质样品,经二维凝胶电泳(2-DE)获得蛋白表达图谱。根据凝胶图谱上蛋白质斑点判断图谱的质量,并运用PDQuest7.4软件分析图谱。结果显示:普通离心法制备的蛋白样品的凝胶图谱蛋白质斑点较为清晰,但横向条纹较多;超速离心法纯化蛋白样品的图谱,蛋白斑点清晰且可检测到较多的斑点;TCA/丙酮沉淀和2-D clean-up kit方法纯化蛋白样品的凝胶图谱条纹减少,蛋白斑点清晰,但可检测到的斑点数量有所减少。研究表明,超速离心方法纯化的蛋白质样品适合建立奶牛乳腺组织的蛋白质表达图谱。     

四君子散与益母生化散对围产期奶牛血浆IL-2IFN-γ和TNF-α的影响

为探讨中药对围产期奶牛血浆IL-2,IFN-γ和TNF-α的影响,本试验选择年龄、胎次和预产期相近,经临床检查健康的围产期荷斯坦奶牛90头,随机分成Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组,每组30头.Ⅰ组,于预产期15 d时喂服中药加味四君子散(400 g/头),每天1次,连用5d,分娩后喂服益母生化散一剂(400 g/头);Ⅱ组,产前不添加中药,分娩后喂服益母生化散一剂(400 g/头);Ⅲ组为对照组,产前、产后均不喂服中药.在预产期15 d,7 d,产后0 d(分娩后喂服益母生化散前计为0 d)、产后7d和15d时,在各组随机抽取10头奶牛颈静脉采血,测定血浆IL-2,IFN-γ和TNF-α的含量.试验结果显示,Ⅰ组奶牛血浆IL-2含量、IFN-γ含量和TNF-α含量明显高于对照Ⅲ组(P<0.05).研究说明,中药能增强围产期奶牛的免疫水平,为中药防治奶牛围产期疾病提供一定的理论依据.     

蹄叶炎奶牛血浆蛋白质组学2-DE图谱的构建及分析

采集患病牛和健康牛血浆,用人白蛋白和IgG抗体去除其高丰度蛋白后,通过双向凝脉电泳(Two dimension-al gel electrophoresis,2-DE)技术和PDQuest分析软件比较2组间血浆蛋白组表达差异.结果显示,蹄叶炎奶牛血浆2-DE图谱中有39个蛋白斑点表达上调,23个蛋白斑点表达下调,共检测到62个差异蛋白点.结果表明,奶牛发生蹄叶炎时,其血浆蛋白组表达模式发生了改变,这种改变可能与蹄叶炎的发病机制密切相关.     

奶牛围产期血浆Ca、P、AKP和HYP的变化

为了解健康奶牛围产期钙代谢特点,本试验选取围产期健康奶牛20头,分别在产前7d、3d,分娩当天,产后3d、7d对试验奶牛血浆Ca、P、ALP、HYP浓度进行测定。按每个时间点血钙水平将试验奶牛分为血钙正常组(C)和低血钙组(L)。结果显示:奶牛在产前7d至产后7d低血钙发生率分别为45%、20%、80%、25%、15%。产前7d到产后7d,C组奶牛血浆Ca、ALP、HYP水平均显著高于L组(P0.05)。两组奶牛血浆P浓度围产期无显著差异(P0.05)。结论:奶牛围产期易发生低血钙,以分娩时发生率最高;围产期奶牛低血钙症的发生可能与骨钙动员能力低有关。     

绵羊精浆蛋白质组2-DE图谱的构建及初步分析

本研究比较了丙酮沉淀法制备蛋白质不同上样量对绵羊精浆蛋白质二维电泳图谱的影响。结果显示,精浆总蛋白经SDS-PAGE电泳,得到分子质量在14.4~116 ku的28条蛋白质条带。二维电泳图经PDQuest 8.0分析,上样量为0.8、1.0、1.2 mg时检测出的蛋白质点分别为207±10、281±13和374±16个,分子质量基本分布在20~80 ku、等电点为4~9的区域内,随着上样量的增加,分子质量在20~80 ku的蛋白质点明显增多,但每个分子质量区间的蛋白质点所占的比率较为恒定。研究结果表明,采丙酮沉淀制备精浆蛋白结合合适的上样量能够建立绵羊精浆全蛋白质图谱,为进一步研究绵羊精浆蛋白质组学奠定基础。     

围产期奶牛干物质摄入水平与产后生产性能及血浆酮体浓度的关系

将围产期奶牛30头随机分为3组,每组10头。其中Ⅱ组为对照组,Ⅰ组和Ⅲ组分别为试验组;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3组于产前28d开始分别饲喂NRC标准减少20%日粮(能量摄入80%组)、NRC标准日粮(能量摄入100%组)、NRC标准增加20%日粮(能量摄入120%组),产后各组奶牛均饲喂标准日粮,至产后56d结束,观察不同干物质摄入水平对奶牛血浆酮体浓度的影响。试验结果表明:奶牛产后干物质摄入量和产奶量均为Ⅰ组高于Ⅱ组、Ⅱ组又高于Ⅲ组,经统计分析组间差异极显著(P<0.01)或差异显著(P<0.05);此外,Ⅰ组体重消耗最小,Ⅲ组体重消耗最大,各组间差异极显著(P<0.01)。产后Ⅲ组血酮浓度显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05),而Ⅰ组和Ⅱ组之间差异不明显。可见,围产期奶牛不同干物质摄入量与产奶量、体重等生产性能及产后血酮浓度之间存在着密切的关系。     

阴离子盐对奶牛围产期血浆离子平衡的影响

采用20头荷斯坦经产奶牛按配对试验设计,研究在干奶后期(产前约3周)添加阴离子盐添加剂对奶牛产前1周、2周和产后1周、2周及分娩当日血浆离子浓度、胎衣不下发病率以及产乳热发病情况的影响。结果表明,饲喂阴离子盐日粮4d后可使尿液pH值显著降低(P<0.05),试验组与对照组比较产前一周和产后一周血浆钙离子浓度有上升的趋势,分别为(7.98vs7.26)和(7.81vs7.19),距分娩1周血浆镁离子浓度有降低趋势(1.96vs2.16),在分娩当日试验组血浆镁离了浓度低于对照组(1.90vs2.01),产前1周和分娩当日血浆钠离子浓度低于对照组,分别为(123.90vs126.43,P<0.05)和(124.28vs125.93,P<0.05)。在本试验条件下添加阴离子盐对血浆其他离子浓度没有显著影响(P>0.05),通过对胎衣不下发生情况的统计表明,饲喂阴离子盐能够减少胎衣不下的发生。     

围产期奶牛瘤胃发酵参数及细菌菌群的变化研究

本实验旨在研究围产期奶牛瘤胃微生物区系的反应。选择年龄、胎次、体况和预产期相近的干奶牛30头,产前21 d设为围产前期组,产后21 d设为围产后期组。选择14头奶牛分别在产前7 d和产后14 d采集瘤胃液,测定瘤胃发酵参数和微生物细菌菌群。结果表明：1)与围产前期相比,围产后期奶牛瘤胃液的pH和乙酸/丙酸降低(P<0.01),乙酸、丙酸、丁酸及总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度均提高(P<0.01);2)门水平上,围产后期奶牛瘤胃液拟杆菌门、变形菌门、蓝藻门和放线菌门相对丰度高于围产前期(P<0.01或P<0.05),厚壁菌门、纤维杆菌门、Kiritimatiellaeota和软壁菌门相对丰度低于围产前期(P<0.01或P<0.05);属水平上,围产后期奶牛瘤胃液普雷沃氏菌属＿7、毛螺旋菌科NK3A20群、琥珀酸弧菌科UCG-001和Shuttleworthia相对丰度高于围产前期(P<0.01),瘤胃球菌科＿NK4A214群属、克里斯滕森菌R-7群属、理研菌科RC9肠道群属、产乙酸糖发酵菌、普雷沃氏菌科UCG-003属和丁酸弧菌属＿2相对丰度均低...     

牦牛卵泡液差异蛋白质组双向电泳图谱的构建与质谱分析

从蛋白质水平了解牦牛季节性繁殖规律,利用双向电泳与质谱鉴定技术分析牦牛卵泡液与血浆蛋白质组分变化。以青海高原牦牛卵泡液与血浆为研究对象,采用双向电泳技术构建牦牛卵泡液与血浆蛋白质双向电泳图谱,银染后利用Image Master 2D Platinum软件分析并采用MALDI-TOF-MS进行质谱鉴定。用试剂盒ProteoExtract Albumin/IgG Removal Kit去除高丰度蛋白质后,利用2-DE技术获得了分辨率较高的卵泡液与血浆蛋白质电泳图谱,卵泡液与血浆蛋白质图谱对比分析共发现了24个差异表达蛋白质点,其中2个蛋白质点表达上调,22个蛋白质点表达下调。经质谱分析,最终成功鉴定出8个蛋白质点、5个未知蛋白质点。本研究成功构建了蛋白质图谱及分离鉴定的差异蛋白质,为从蛋白质水平揭示牦牛卵泡发育规律及了解卵母细胞发育的微环境提供了试验依据。     

利用电感耦合等离子体质谱检测牛奶中的微量元素

牛奶中微量元素的含量是乳制品安全和质量的重要组成部分。如牛奶中低含量的铬是人体必需的微量元素,超过一定含量后就会对人体的健康造成危害。作者建立了用电感耦合等离子体质谱（inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS）检测生鲜乳中Fe、K、Ca、Na、Mg、Ag、Al、As、Ba、Be、Cd、Co、Cr、Cu、Mn、Mo、Ni、Pb、Sb、Se、Tl、V、Zn、Th、U、Hg和Sn的新方法。采用微波消解法破坏牛奶中的有机物,利用ICP-MS法测定其含量,分析元素的同位素一般选择丰度最大的,除非存在相同质量原子簇和同量异位素的干扰。该方法验证采用国家标准物质脱脂奶粉GBW 08509和加标回收2种方法,试验证明在内标溶液中加入异丙醇能消除积碳的干扰,且对样品中砷和硒等元素测定的精确度和重现性也大为改善。     

细毛羊皮肤组织中毛囊蛋白质2-DE图谱的建立与初步分析

本研究以不同纤维直径的细毛羊皮肤组织中的毛囊作为试验材料,利用不同的提取方法、不同pH范围的IPG胶条以及不同的上样量,探索适用于细毛羊皮肤组织的双向电泳体系,建立细毛羊皮肤组织毛囊的2-DE凝胶图谱.凝胶图谱用ImageMaster 2D Platinum软件自动检测蛋白点比较不同纤维直径的细毛羊差异蛋白.结果显示,TCA/丙酮抽提法最适合细毛羊毛囊组织总蛋白质的提取.上样量为100 μL,选择18 cm、pH 4~7的线性IPG胶条,得到质量较好的双向凝胶电泳图谱,有35个蛋白差异点,为后续优质细毛羊的蛋白质组学研究工作奠定基础.     

基于高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法的牛乳中铬的价态分析

采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱仪测定牛乳中Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)的含量。采用PRP-X100阴离子交换柱,研究流动相浓度、流动相pH值和流速对Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)的分离度和保留时间的影响,最终选择流动相NH4NO3的浓度为0.10 mol/L、pH值为7、流速为1.0 mL/min。在优化得到的最佳实验条件下,以52Cr/53Cr自然丰度比为参考值排除了质谱和离子干扰,确定出Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)的保留时间分别为2.227 min和1.856 min;Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)线性方程的线性关系良好,且相关系数分别为0.9995和0.9997,方法检出限分别为0.015 μg/L和0.016 μg/L;样品中Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)的加标回收率在71.52%~90.27%之间。本研究确定的方法适用于牛乳中不同价态的Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)的同时测定。     

奶牛临床型乳房炎与健康乳腺组织蛋白表达图谱的初步分析

本研究以二维电泳技术构建了临床型乳房炎奶牛和健康奶牛的乳腺组织全蛋白表达谱,运用PDQuest7.4软件进行差异分析。结果显示:健康奶牛的乳腺组织蛋白表达图谱可检测到(480±27)个蛋白点,临床型乳房炎奶牛可检测到(453±31)个蛋白点,二者存在17个差异表达的蛋白斑点,6个蛋白斑点在临床型乳房炎奶牛组织中呈量度,4个呈质变。表明临床型乳房炎奶牛和健康奶牛的乳腺组织蛋白存在差异表达的蛋白斑点,本研究为发现新的乳房炎调控分子和潜在的医疗目标蛋白奠定了基础。     

电感耦合等离子体质谱仪测定乳粉中铅的检出限方法优化

对电感耦合等离子体质谱法检测铅的检出限进行研究,通过对实验过程中所用器皿、试剂等因素进行分?析,建立超声清洗处理方式,有效降低空白值,使电感耦合等离子体质谱仪法测定乳粉中铅的检出限由0.02 mg/kg降?低到0.005 mg/kg。当铅的添加水平为0.005～0.015 mg/kg时,样品的加标回收率为86.9%～119.0%,相对标准偏差为?3.1%～12.3%,满足方法学验证要求,说明了整体方案的可行性。降低检出限后的方法适用于乳粉中铅的检测。     

液相色谱‐串联质谱法测定乳与乳制品中激素残留

本文介绍了适用于乳与乳制品中11种激素残留的检测方法。根据乳与乳制品的不同性状,改进了现有的前处理方法,使方法更具体化,提高了检测的回收率。为乳与乳制品中11种激素残留检测提供了一种具有高灵敏度和准确度的方法。     

家蚕蚁蚕蛋白质组的质谱鉴定与数据库构建

为尝试构建基于质谱分析的家蚕蛋白质组数据库,采用一维电泳-液相色谱-质谱(1DE-LC-MS)技术对家蚕蚁蚕的蛋白质组进行了分析与鉴定。共检索到511个相匹配的候选蛋白质和92个多肽离子片段,鉴定获得了171个无冗余蛋白质组分,分别属于121种蛋白质或蛋白质亚基,其中有36种蛋白质或亚基尚未在家蚕及昆虫的基因与蛋白质数据库中报道;在171个被鉴定的蛋白质组分中,与细胞骨架和蛋白质代谢相关的组分多达64种。结果还表明,1DE-LC-MS技术也适用于从一维凝胶电泳的差异性条带及蛋白质混合样品中分离和鉴定特异蛋白质组分。