四氢嘧啶对凝乳酶热稳定性的影响

为研究四氢嘧啶对凝乳酶热稳定性的影响,向凝乳酶溶液中加入0.175~5.600 mmol/L的四氢嘧啶,测定不同浓度四氢嘧啶对凝乳酶活力的影响;之后测定了含0.50~2.00 mmol/L四氢嘧啶的凝乳酶溶液在69℃保温不同时间后的凝乳酶活力,将热保温后的酶溶液在4℃复性36 h,并再次测定酶活力的变化。结果显示,不同浓度四氢嘧啶对凝乳酶活力影响不大,各组酶活力均降低8.2%左右;加入四氢嘧啶会显著降低凝乳酶的热稳定性,但会发生明显的复性作用,提示四氢嘧啶可能具有维持部分失活态凝乳酶稳定性的作用。     

四氢嘧啶对热变性凝乳酶复性作用的研究

[目的]加深对部分失活的凝乳酶复性作用的了解,为热稳定性研究中部分失活态凝乳酶的制备提供参考。[方法]研究了四氢嘧啶存在的条件下,复性时间、热处理时间和热处理温度等因素对凝乳酶复性作用的影响。[结果]随着复性时间的延长,凝乳酶的活力逐渐上升。凝乳酶的复性主要发生在前24 h,36 h后凝乳酶活力基本保持稳定,复性后凝乳酶相对酶活力最高可提升21.8百分点,能够测到凝乳酶活力(相对酶活力损失93.3%)的热处理时间,从6 min延长到12 min。在酶活力损失相近时,含四氢嘧啶的凝乳酶在较高温度下(68~70℃)保温较短时间(1~5 min),复性所致的相对酶活力提升显著高于在较低温度下(61~65℃)长时间保温(30~180 min)。[结论]酶的热失活处理的温度和时间对酶分子结构的影响效应并不相同,较长时间的热失活处理比短时高温对酶结构的破坏更彻底。     

三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究（英文）

[目的]探讨系统地检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的方法。[方法]通过三甲氧苄氨嘧啶与马来酸酐反应,得到三甲氧苄氨嘧啶半抗原,再通过免疫动物得到抗三甲氧苄氨嘧啶的单克隆抗体,并将其应用于能够检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的ELISA试剂盒。[结果]该试剂盒对水质中三甲氧苄氨嘧啶的检测限为2.34μg/kg,IC50(50%抑制浓度)为4.8μg/L,回收率为60.5%~79.7%,试剂盒的标准曲线范围为0~80μg/L,批内、批间的相对标准偏差均小于10%。三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体与二甲氧苄氨嘧啶的交叉反应率小于1%。4℃下能够保存12个月,稳定性较好。[结论]研究结果为监管三甲氧苄氨嘧啶的滥用提供参考依据。     

三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究

[目的]探讨系统地检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的方法。[方法]通过三甲氧苄氨嘧啶与马来酸酐反应,得到三甲氧苄氨嘧啶半抗原,再通过免疫动物得到抗三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体,并将其应用于能够检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的ELISA试剂盒。[结果]试验表明,该试剂盒对水质中三甲氧苄氨嘧啶的检测限为2.34μg/kg,IC50(50%抑制浓度)为4.8μg/L,回收率为60.5%~79.7%,试剂盒的标准曲线范围为0~80μg/L,批内、批间的相对标准偏差均小于10%,三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体与二甲氧苄氨嘧啶的交叉反应率小于1%,4℃下能够保存12个月,稳定性较好。[结论]研究可为监管三甲氧苄氨嘧啶的滥用提供参考。     

化学添加剂对新型重组中性植酸酶稳定性的影响

[目的]为进一步拓展新型重组中性植酸酶的工业应用。[方法]研究海藻糖、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖等糖类及不同的金属离子对其稳定性的影响。[结果]该突变植酸酶的稳定性强烈依赖Ca2+的存在。当CaCl2浓度为0.10 mol/L,90°C加热10 min时,剩余活性约为原来的67.7%。同时,添加糖类对酶稳定性也起到较好的保护作用。当80、85、90°C受热10 min时,海藻糖呈现出最好的保护性能,加入0.8 mol/L左右,可使剩余酶活分别是原来的84.3%、65.5%和48.3%,为未添加时的2.61、4.34和15.00倍。此外,在80℃加热条件下,麦芽糖也表现出较好的保护作用,剩余活性是未添加时的2.51倍。但是,在更高温度下尤其是90℃时,植酸酶的活性几乎完全丧失。[结论]该研究结果可为植酸酶在水产饲料加工中的进一步应用提供参考。     

三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究

[目的]探讨系统地检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的方法.[方法]通过三甲氧苄氨嘧啶与马来酸酐反应,得到三甲氧苄氨嘧啶半抗原,再通过免疫动物得到抗三甲氧苄氨嘧啶的单克隆抗体,并将其应用于能够检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的ELISA试剂盒.[结果]该试剂盒对水质中三甲氧苄氨嘧啶的检测限为2.34 μg/kg,IC50(50％抑制浓度)为4.8 μg/L,回收率为60.5％～79.7％,试剂盒的标准曲线范围为0～80 μg/L,批内、批间的相对标准偏差均小于10％.三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体与二甲氧苄氨嘧啶的交叉反应率小于1％.4℃下能够保存12个月,稳定性较好.[结论]研究结果为监管三甲氧苄氨嘧啶的滥用提供参考依据.     

螺旋藻蛋白酶解剂的筛选与优化

[目的]筛选并优化螺旋藻蛋白酶解剂.[方法]采用酶解法初步研究了中性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶4种蛋白酶对螺旋藻蛋白质的水解效果,同时研究了底物浓度和酶的添加量对水解率的影响.[结果]结果表明,蛋白酶按酶解螺旋藻蛋白质的水解率,可由高到低依次排列为:碱性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶.通过对酶解条件进行优化,发现碱性蛋白酶的作用效果受pH影响最大,最高水解率为60.5％(底物浓度20 g/L、E/S=4％、pH =8.9、55℃、酶解5 h).同时得出,碱性蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶的最佳底物浓度均为20 9/L,最佳酶添加量均为4％,而风味蛋白酶的最佳底物浓度为20 g/L,最佳酶添加量为2％.[结论]研究可为后续功能性多肽的提取利用提供参考依据.     

重组大肠杆菌全细胞催化合成四氢嘧啶

四氢嘧啶是天冬氨酸的环状氨基酸衍生物,广泛应用于化妆品、食品、药品等领域。通过比较了5个不同来源的四氢嘧啶合成基因簇ectABC,发现从专性嗜碱芽孢杆菌(Bacillus pseudofirmus OF4)来源的基因簇整合到大肠杆菌BW25113中后,得到的重组菌pYB1s-BPectABC/BW25113产四氢嘧啶能力最好。利用单因素试验初步优化了pYB1s-BPectABC/BW25113全细胞催化条件:以100 mmol·L^-1天冬氨酸钠和100 mmol·L^-1甘油为底物,在100mmol·L^-1 KCl的转化液(pH=7.0)中,30℃下反应24h,最终四氢嘧啶的产量可达3.10g·L^-1,转化产率达到0.129g·L^-1·h^-1。本研究初步得到了四氢嘧啶合成重组菌pYB1sBPectABC/BW25113,为后续四氢嘧啶的研究奠定了基础。     

鱿鱼酶法脱皮技术的优化及比较

以秘鲁鱿鱼耳为研究对象,研究木瓜蛋白酶和中性蛋白酶在不同添加量、反应温度和反应时间的脱皮效果。结果表明,木瓜蛋白酶在酶添加量为0.22%～0.27%,反应时间为10～20 min,反应温度为50～55 ℃,中性蛋白酶在酶添加量为0.20%左右,反应时间为10～15 min,反应温度为50 ℃左右时,具有较好脱皮效果。正交试验对木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的脱皮效果进行优化,并考察酶处理对鱿鱼胶原蛋白含量的影响。结果表明,木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的最优脱皮工艺分别是木瓜蛋白酶浓度为0.23%,处理时间为12 min,处理温度为52.5 ℃;中性蛋白酶浓度0.18%,处理时间10 min,处理温度47 ℃。中性蛋白酶较木瓜蛋白酶具有较强的脱皮效果。     

嘧啶醇对马铃薯种质试管苗保存遗传稳定性的影响

以3个不同基因型马铃薯品系Solanum chacosense(cha)、CE76和E3为试验材料,于基础培养基添加3种浓度(10、15、20μmol/L)的嘧啶醇,探讨不同浓度嘧啶醇对试管苗生长的影响;同时对添加嘧啶醇的培养基中生长的试管苗进行恢复培养后,选用RAPD和ISSR两种分子标记进行遗传稳定性分析,为嘧啶醇...     

高效毛细管电泳法测定吲哚乙酸氧化酶的活力

[目的]为霍山石斛的进一步研究和开发提供依据。[方法]采用高效毛细管电泳技术,以pH值为9.0的80mmol/L硼砂缓冲溶液和15mmol/L葡萄糖溶液所组成的缓冲体系为流动相,研究吲哚乙酸氧化酶活性的最佳测定条件。[结果]当反应80min后,酶活力下降。当底物浓度较低时,酶活力随底物浓度的增加而增加,当底物浓度大于20mg/L时,酶活力不再增加,保持在5.7g(/mg·h)左右。当pH值在6.0左右时,酶活性最高。温度对酶活性有很大的影响。当反应温度为5℃时,酶活力较低,然后酶活力随温度的升高而逐渐升高,30℃后明显下降。当温度为20～30℃时,吲哚乙酸氧化酶活力最高。[结论]当温度为25℃、pH值为6.0、底物浓度为20mg/L时,吲哚乙酸氧化酶的活力最高。     

纳豆芽孢杆菌配伍发酵产中性蛋白酶的性质研究

为研究纳豆芽孢杆菌SH和B1配伍发酵产物中中性蛋白酶的性质,通过Folin-酚法测定中性蛋白酶的最适作用温度、最适作用pH值、pH稳定性、热稳定性和金属离子、表面活性剂、抑制剂、模拟胃肠道环境对酶活力的影响,绘制相对酶活力变化图。结果表明:该酶的最适作用温度为70℃,最适作用pH为11.0,其次是pH为7.0,40℃时热稳定性较好,在pH6～7时比较稳定,属中性蛋白酶。金属离子、抑制剂和模拟胃环境对酶有抑制作用,而10g/LTween-80和模拟肠道环境对酶有激活作用。     

水杨酸对小麦幼苗抗寒性的影响

[目的]探讨水杨酸(SA)对小麦幼苗抗寒性的影响及其机理。[方法]以小麦品种郑麦9023为试材,用0.1 mmol/LSA作叶面喷施处理,清水作对照,当小麦幼苗第1片叶展开时,将各组各1/2幼苗分别置于常温(20℃)和低温(4℃)下培养,5 d后对小麦幼苗进行耐寒生理指标测定。[结果]0.1 mmol/LSA显著提高了低温胁迫下小麦幼苗细胞内SOD酶的活性。与低温对照处理的小麦幼苗相比,低温胁迫下0.1 mmol/L SA处理的小麦幼苗的SOD酶活力提高了10.95%,脯氨酸含量增加了42.80%;MDA含量减少了5.00%,膜透性降低了6.00%。[结论]SA显著提高小麦幼苗细胞内SOD酶的活性,增加脯氨酸含量,降低MDA含量,减少了低温对细胞的伤害,增强了小麦幼苗的抗寒性。     

荷叶离褶伞液体发酵及生物酶法提取菌丝体多糖的研究

首次利用10 L发酵罐研究了荷叶离褶伞菌丝生长、胞内和胞外多糖产量,以及6种酶对发酵菌丝体多糖的提取效果。结果表明,在25℃、120 r/min,空气流量为200 L/h的条件下发酵,8 d时胞内多糖含量（63.1 mg/g干菌丝体）和胞外多糖产量（3.54 g/L）达最高,9 d时菌丝体产量（17.86 g/L）及胞内多糖产量（1.11 g/L）达最高,与摇瓶发酵相比,其产量均显著提高。参试的6种酶中,溶壁酶酶解处理菌丝体获得的多糖产量最高,而中性蛋白酶是最经济适宜的酶类,与不加酶的水提法相比,多糖提取率分别提高了459.29%和376.11%,中性蛋白酶酶解制备菌丝体多糖的适宜条件为:在1%酶用量下,30℃酶解2 h后,95℃提取2次,每次2 h。     

普鲁兰短梗霉N2-3菌株碱性蛋白酶的纯化及性质研究

[目的]对普鲁兰短梗霉N2-3菌株的碱性蛋白酶进行纯化,并对其性质进行研究。[方法]利用层析柱Sephadex G-75与阴离子交换柱DEAE Sepharose Fast Flow纯化菌株N2-3的胞外碱性蛋白酶,并对纯化的酶进行SDS-PAGE凝胶电泳检测,同时对纯化蛋白酶的最适反应温度、温度稳定性、最适反应pH、pH稳定性进行测定,研究金属离子及各种化合物对蛋白酶活性的影响。[结果]试验中N2-3菌株的碱性蛋白酶纯化倍数和回收率分别为2.34和25.9%;SDS-PAGE凝胶电泳显示该酶的分子量约为33 kDa;该酶的最适反应温度和pH分别为52℃和9.0;Mn2+、Mg2+、Na+离子浓度在5 mmol/L时对纯化蛋白酶的酶活有激活作用,Zn2+、Ca2+、K+、Li+对酶活的影响不大,而当存在Fe2+、Fe3+、Cu2+、Co2+、Ag+、Hg2+离子时,蛋白酶活明显降低;苯甲基硫酰氟(PMSF)强烈抑制了该蛋白酶的活性,而乙二胺四乙酸(EDTA)与碘乙酸微弱抑制了该蛋白酶的活性。[结论]为普鲁兰短梗霉N2-3菌株碱性蛋白酶的工业化生产提供了一定的理论基础。     

长白山林蛙肉酶解条件的研究

[目的]优化林蛙肉酶解工艺。[方法]以长白山雄性林蛙肉为原料,选用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶对其进行水解。通过单因素试验和正交试验筛选最佳酶解条件。[结果]酶解效果最好的是中性蛋白酶,其最适酶解条件为pH值6、加酶量7%、底物浓度55%,水解时间110min、温度50℃。在此工艺条件下,水解度达55.02%。[结论]该酶解工艺用酶少、分解快,适合长白山林蛙肉的酶解 更多还原     

酶法制取丝素降胆固醇肽的工艺研究

[目的]利用废蚕丝制取具有降胆固醇的活性肽。[方法]考察不同水解度的丝素活性肽对胆固醇在胆汁胶束溶液中溶解度的抑制率,并以此作为碱性蛋白酶水解蚕丝蛋白的评价指标,采用单因素试验对碱性蛋白酶的水解工艺进行了探讨。[结果]其最佳工艺条件：产物浓度为20g/L,酶用最为0.4g/L,反应温度为40℃,pH为9.5。[结论]碱性蛋白酶水解丝素蛋白的水解度为16.5%时,产物具有最佳活性。     

菌株Ⅰ13产碱性蛋白酶的酶学性质研究（摘要）

[目的]研究菌株I13产碱性蛋白酶的酶学性质。[方法]从一株碱性蛋白酶生产菌株I13中得到了碱性蛋白酶粗酶液,并研究了温度和pH值对该酶液酶活力的影响。[结果]所产碱性蛋白酶的最适反应温度为40℃,但在30～60℃范围内活力水平均较高,且在20～30℃范围内也保持了最大活力的40%以上;最适反应pH值为10.5,在8.0～11.0pH值范围内保持了最大活性的90%以上,有较宽的pH值谱。[结论]该碱性蛋白酶具有开发成为洗衣粉添加剂的巨大潜力。     

菌株I13产碱性蛋白酶的酶学性质研究

[目的]研究菌株I13产碱性蛋白酶的酶学性质。[方法]从一株碱性蛋白酶生产菌株I13中得到了碱性蛋白酶粗酶液,并研究了温度和pH对该酶液酶活力的影响。[结果]所产碱性蛋白酶的最适反应温度为40℃,在20~30℃范围内仍保持了最大活力的40%以上;最适反应pH为10.5,在pH 8.0~11.0范围内保持了最大活性的90%以上,有较宽的pH谱。[结论]该碱性蛋白酶具有开发成为洗衣粉添加剂的巨大潜力。