新疆雪莲遗传转化中Basta筛选压的确定

[目的]研究新疆雪莲(Saussurea involucrate Kar.et Kir.)遗传转化中除草剂Basta的筛选压。[方法]用新疆雪莲愈伤组织或再生苗转接于含不同浓度Basta培养基上,观察其存活状况。[结果]浓度为2～12 mg/L的Basta对雪莲愈伤组织或再生苗的生长有不同程度的抑制作用。[结论]Basta可以作为新疆雪莲遗传转化体的一种有效筛选剂,筛选压设为4～5 mg/L比较合适。     

缩节胺在马铃薯脱毒试管苗保存中的作用

本试验以马铃薯试管苗为材料,用组织培养的方法研究了缩节胺在马铃薯脱毒试管苗保存中的作用,为缩节胺在植物组织培养中的应用提供基础材料。实验结果表明,缩节胺能增加马铃薯脱毒试管苗的节数,缩短节间距,使试管苗健壮,其适宜使用浓度为5.0～10.0mg/L。较低浓度的缩节胺(2.5～5.0 mg/L)对不定芽的分化和增殖有促进作用。在培养基中添加适宜浓度(10.0 mg/L)的缩节胺可诱导马铃薯试管薯的形成。     

水稻遗传转化选择系统优化初探

本文报道了通过调节潮霉素和头孢霉素的使用浓度,在抗虫转基因水稻研究中提高筛选率和绿苗再生率。筛选时潮霉素使用浓度为20－30mg/L,头孢霉素为300－400mg/L;分化时潮霉素使用15－25mg/L,头孢霉素为250mg/L,可得到较高的抗性愈伤组织筛选率和绿苗分化率,不同水稻材料有差异。分化时绿苗假阳性率在10%左右可得到较大量的阳性植株和减小工作量。     

植物生长延缓剂B9对马铃薯试管苗生长的影响

为提高马铃薯种质试管苗保存质量,研究了植物生长延缓剂B9在不同浓度范围(10～60 mg/L)对费乌瑞它试管苗株高、叶数、可用节数和成活率的影响.结果表明:B9对马铃薯试管苗的生长有抑制作用;B9浓度40 mg/L可明显延长试管苗的保存时间,使培养234 d的试管苗成活率仍能达到90％,且不影响试管苗继代.结论:用40 mg/L的B9保存马铃薯种质试管苗,可减少试管苗转接次数,降低污染比例,节约人力、物力.     

B9对马铃薯试管苗培养的效应研究初报

利用MS培养基添加不同浓度的植物生长调节剂B9,通过研究B9对马铃薯试管苗的根、茎、叶的生长及后期移栽生长情况的影响,发现B9对马铃薯试管苗矮化壮苗有直接作用,以80～100mg/L的使用浓度为最佳.     

潮霉素和PPT对水稻愈伤组织筛选效果的比较

分别以潮霉素磷酸转移酶基因(hpt基因)和除草剂抗性基因(bar基因)作为筛选标记基因的载体和农杆菌组合转化水稻光温敏核不育系粳稻品种农垦58S和籼稻品种培矮64S，以两个筛选标记基因的相应筛选剂潮霉素(Hyg)和PPT(Basta)对水稻愈伤组织进行筛选研究，初步确定了不同筛选剂对不同水稻愈伤组织的筛选浓度，并比较了两个筛选标记基因的筛选效果．结果表明，不同水稻品种对筛选剂的浓度要求不一样，粳稻品种以Hyg 50mg／L，PPT30mg／L较为适合；籼稻品种以Hyg 50mg／L，PPT 10mg／L，较为适合．PPT(Basta)对粳稻品种农垦58S筛选有效，而对籼稻品种培矮64S来说则易产生假阳性．Hyg作为水稻愈伤组织的筛选剂比PPT(Basta)好．     

不同抗生素及除草剂Basta对大葱愈伤组织分化的影响

为了建立优良的大葱遗传转化体系,以卡那霉素(Kana)、潮霉素(Hyg)以及除草剂Basta(Bar基因)作为抗性选择剂,研究其对大葱愈伤组织分化的影响。结果表明:大葱愈伤组织分化对Kana不敏感,Kana不适宜作为大葱遗传转化中抗性选择标记,Hyg适宜的选择浓度为50 mg/L,除草剂Basta适宜的选择浓度为0. 10 mg/L。     

马铃薯试管苗壮苗培养基的筛选

为了培育马铃薯健壮试管苗,提高其移栽成活率,该文用BY-14和ZH 2个马铃薯品种(系)的脱毒试管苗为材料,以MS培养基添加0.2 mg/L 6-BA和1.0 mg/L NAA为基本培养基,研究了不同蔗糖含量对马铃薯试管苗生长的影响。结果表明:0.2 mg/L 6-BA和1.0mg/L NAA的浓度配比能使苗矮化、叶片浓绿,尤其能促进根粗壮和根数增多,有一定的壮苗作用。在有生长素存在的条件下,调整蔗糖的用量为20～40 g/L(用量差异与品种不同有关),其壮苗效果则更好,主要表现在促进根系发育和增加了茎叶干物质的含量,促进试管苗组织老化,进而提高其移栽抗逆性。     

植物生长延缓剂B9对马铃薯种质资源离体保存的影响

以MS为基本培养基,以马铃薯(Solarium tuberosum L.)品种鄂马铃薯5号脱毒试管苗为试验材料,研究不同浓度B9对马铃薯试管苗离体保存的影响。结果表明,B9对马铃薯试管苗的生长有不同程度的抑制作用,延长了试管苗的保存时间,其中浓度为60 mg/L的B9的保存效果最为理想,可以使试管苗保存10个月以上,且生长健壮,成活率达76%,不影响试管苗继代。     

台湾培育出能生产具有高强度蛋壳鸭蛋的菜鸭

利用MS培养基添加不同浓度的植物生长调节剂B9，通过研究B9对马铃薯试管苗的根、茎、叶的生长及后期移栽生长情况的影响，发现B9对马铃薯试管苗矮化壮苗有直接作用，以80～100mg／L的使用浓度为最佳。     

番茄子叶、茎段及菊花愈伤组织对潮霉素敏感性的研究

分别以番茄东农704、东农708、东农709三品种的子叶、茎段及菊花30、33、34的愈伤组织为材料,用不同浓度的潮霉素进行敏感性试验.结果表明,随着潮霉素浓度的升高,番茄子叶、茎段的出愈率下降,菊花愈伤组织的褐化率增加.在以潮霉素作为抗性选择标记时,选择压力番茄以15 mg/L为宜,菊花3品种潮霉素的选择压力以15～20 mg/L为好.     

葡萄叶盘法基因转化中抗生素种类和浓度的筛选

本研究以优良无核葡萄品种莫利莎葡萄试管苗为试材,研究了卡那霉素（Kan）、潮霉素（Hyg）对葡萄继代苗生长和离体叶片再生的影响,以确定叶盘法基因转化的选择压和转化体的筛选浓度;同时研究了不同浓度的头孢霉素（Cef）和羧苄青霉素（Carb）对葡萄离体叶片再生的影响,以确定侵菌共培养后合适的抑菌抗生素种类和浓度。试验结果表明葡萄继代苗对Hyg的敏感性强于Kan,葡萄遗传转化更适合使用潮霉素磷酸转移酶基因作为选择标记。Hyg 3.0mg/L即达到继代苗致死浓度,可作为转化后抗性苗的筛选浓度,Hyg 0.8mg/L完全抑制叶片不定芽的分化,可作为叶盘法转化时抗性芽的选择压。葡萄叶盘法基因转化中抑制农杆菌生长的抗生素可选用Cef 300mg/L或Carb 400mg/L,但对不定芽的分化有抑制作用。     

植物生长调节物质对杏梅花粉萌发及花粉管生长的影响

采用花粉离体培养法研究了5种植物生长调节物质对金光杏梅花粉萌发和花粉管生长的影响。结果表明,较低浓度的赤霉素、6-BA、2,4-D能促进杏梅花粉萌发和花粉管生长,但超过一定浓度时起抑制作用,最适宜花粉萌发和花粉管生长的浓度范围是赤霉素25～100mg/L、6-BA12.5～25mg/L、2,4-D0.5～5mg/L。NAA和多效唑对杏梅花粉萌发和花粉管生长有抑制作用,抑制程度随其浓度的提高而增强,但多效唑在0～50mg/L浓度范围内对花粉管生长有促进作用。     

苹果叶盘法基因转化中抗生素种类和浓度的筛选

以苹果品种嘠拉试管苗为试材,研究了卡那霉素(Km)、潮霉素(Hm)对继代苗生长和离体叶片再生的影响,以确定叶盘法基因转化的选择压和转化体的筛选浓度;同时研究了不同浓度的头孢霉素(Cef)和羧苄青霉素(Carb)对苹果离体叶片再生的影响及对农杆菌EHA105和LBA4404的抑菌效果;以确定侵菌共培养后合适的抑菌抗生素种类和浓度。结果表明:Km10mg/L、Hm4.0mg/L完全抑制了叶片不定芽的分化,可作为苹果叶盘法转化时抗性芽的选择压;Km50mg/L、Hm5.0mg/L达到继代苗的半致死浓度,可作为转化后抗性苗的筛选浓度;由于抗性芽再生的选择压与抗性苗筛选浓度相差较小,Hm相对于Km更适合作为苹果基因转化的选择标记;培养基中附加Cef300mg/L能完全抑制农杆菌生长,对叶片不定芽的再生影响不大;而附加Carb则需400mg/L以上才能抑制农杆菌生长,同时严重抑制了叶片再生。因此,宜选用Cef作为苹果基因转化的抑菌抗生素。     

拟南芥悬浮细胞及其愈伤组织对潮霉素的反应

研究了潮霉索对拟南芥悬浮细胞及其愈伤组织的作用效果和特性．结果表明：潮霉素对拟南芥悬浮细胞生长、愈伤组织诱导及其生长均有极明显的抑制作用。但作用效果和特性均有所不同；拟南芥悬浮细胞继代培养阶段、愈伤组织诱导阶段和愈伤组织增殖阶段的临界致死质量浓度分别为25、2．5、1．5mg／L，液体与固体培养条件下差异极大；潮毒素需要一定处理时间才能充分表现其抑制细胞生长或杀死细胞的效果，一般液体培养条件下3d以后、固体培养条件下5d以后效果趋于稳定，但不同的处理质量浓度有较大差异．还就液体与固体培养条件下作用效果差异的原因进行了讨论，并提出了对潮毒素抗性标记筛选的建议．     

基因枪法介导的魔芋遗传转化研究

利用基因枪轰击法建立了魔芋的遗传转化体系。试验结果表明,氦气压力／轰击距离以7．58 GPa／9cm最适。在轰击前4 h和轰击后16 h用附加有0．4 mol／L甘露醇的MS培养基进行高渗处理、轰击后恢复培养6～7 d,有利于减少逆境伤害,增加转化成功的几率。早期选用1 mg／L Basta作为选择压,而后期的筛选使用2 mg／L较高浓度的Basta可以获得真正的转化子。对获得的91株抗性植株进行了PCR检测,结果显示21株呈阳性,表明PAT基因和AGPS1反义基因均已整合进魔芋基因组。     

紫叶酢浆草鳞茎离体培养及快速繁殖研究

 采用紫叶酢浆草（Oxalis violalea）鳞茎作外植体源,进行离体培养及快速繁殖研究。结果表明:MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L诱导丛生芽发生,效果较好;丛生芽增殖用MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L每20 d转接1次增殖3～4倍。1/2 MS+NAA 2.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L有利于壮苗和生根。从生根诱导到试管苗出瓶需20 d,生根率100%. 从丛芽增殖至生根出苗,整个培养周期只需40 d. 较已有报道的用叶片、叶柄组织培养的提前15～10 d,且繁殖速度极快,试管苗生长健壮,炼苗成活率达95%.     

潮霉素对紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响

潮霉素是当今基因工程中的一种转化选择剂。通过对苜蓿叶片诱导阶段、分化阶段施加不同浓度的潮霉素,确定潮霉素对紫花苜蓿叶片愈伤组织形成及其分化的影响。研究表明,潮霉素对紫花苜蓿叶片愈伤组织诱导与分化有显著的抑制作用。当潮霉素浓度达到15mg/L时苜蓿叶片完全无法诱导愈伤;愈伤和分化阶段都添加10mg/L潮霉素时,虽然可以诱导出愈伤组织但无法分化。因此建议在遗传转化时诱导愈伤阶段及分化阶段都添加10mg/L潮霉素。     

基因枪法获得GNA转基因小麦植株的研究

 以小麦品种京 411作为基因枪转化的靶材料 ,取其未成熟胚诱导愈伤组织 ,经过 10 d左右培养后 ,用含有雪花莲凝集素 (Galanthus nivalis agglutinin ,GNA)和 bar基因的质粒 p BI12 1- 2轰击 80 0个胚性愈伤组织 ,在含有4mg/ L Basta溶液的培养基上进行筛选 ,分化及生根培养 ,获得 6 7棵再生植株。田间涂抹 Basta溶液 (5 0、75 m g/ L)检测和接麦蚜实验 ,提取转基因植株基因组 DNA,用扩增 GNA基因的引物经 PCR扩增 Southern杂交 ,结果表明利用基因枪转化已从 T2 代获得了 8株含有编码 bar/ GNA基因的转基因植株。