基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在乳品微生物中的应用进展

微生物污染贯穿乳品工业的各个环节,对经济发展和人类健康构成威胁。对微生物的有效控制是乳品质量与安全重点关注的问题,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）在乳品安全监管工作中,具有快速、准确、稳定、灵敏以及成本低等特点,因而受到广泛的关注与应用。深入了解MALDI-TOF MS技术在乳品微生物中的应用途径与策略,可以有效提升乳品安全监管质量与效率。本综述旨在讨论 MALDI-TOF MS技术在乳品微生物中的实际应用,对MALDI-TOF MS技术在乳品微生物中的发展趋势和应用前景进行分析和探究,为应用MALDI-TOF MS技术深入研究乳品微生物相关问题提供了理论依据。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱在动物病原菌检测中的应用

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术,对厦门口岸进口的1000多份动物及其产品的样品进行致病菌的检测和鉴定,共检出20多种致病菌,并对这些菌株同时用传统生化鉴定方法进行确认。结果表明MALDI-TOF-MS对未知细菌进行鉴定,较传统方法更加快速、准确,而且可以进行高通量检测,可以广泛应用于口岸动物检疫以及微生物检验实验室的日常检验。此外,将国内分离鉴定的各种参考菌株建立的常见致病菌MALDI-TOF-MS数据库与布鲁克公司的MALDI Biotyper数据库进行病原菌鉴定的比较,结果表明,实验室自建的MALDI-TOF-MS数据库可以取得更加准确地结果。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在鸭源鸡杆菌快速鉴定中的应用

按照MALDI-TOF MS要求进行56株鸡杆菌分离株的样品制备,点靶并获取样品质谱图,运用Biotyper分析软件对所获取的质谱图鉴定分析;同时对这些菌株进行荧光定量PCR检测、gyrB基因的PCR扩增和序列分析,进行辅助分析鉴定。结果显示,56株鸡杆菌分离株经MALDI-TOF MS和gyrB基因序列分析均鉴定为鸭源鸡杆菌,阳性率为100.0%;荧光定量PCR鉴定出55株鸭源鸡杆菌,阳性率为98.2%(55/56)。结果表明,MALDI-TOF MS可用于鸭源鸡杆菌分离株的快速鉴定,操作简便,准确率高。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对羊源多杀性巴氏杆菌的快速鉴定

本试验通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对临床分离的1株羊源多杀性巴氏杆菌进行了快速鉴定,取得了与VITEK2 Compact传统生化方法和16S rRNA测序方法一致的结果。MALDI-TOF MS对分离菌株的鉴定分数为2.371,达到了种水平的鉴定。从分离到纯菌落到获得有效的鉴定结果,MALDI-TOF MS仅需要约30 min,而VITEK2需要约4 h, 16S rRNA测序方法需要至少2 d。因此,MALDI-TOF MS可以实现对临床分离的多杀性巴氏杆菌菌株的快速、准确鉴定,对进一步改善动物巴氏杆菌病的临床诊治具有重要意义。     

基质辅助激光解析电离——飞行时间质谱仪的研制及在临床微生物鉴定中的应用

目的探究基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪在临床微生物鉴定中的应用,为真菌微生物的鉴定提供临床技术支持。方法选取于2015年3月到2017年2月我院临床采集的真菌作为实验标本,利用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪对菌种进行鉴定,分析基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪对菌种鉴定的检查效果。结果300株真菌中有290株(96.67%)经鉴定后可以正确归类到种水平,6株(2%)未能给出鉴定成果,4株(1.33%)鉴定结果出现错误,且正确率与传统方法相比差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。结论基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪稳定性高,可重复性好,并且具有快速准确的优点,是临床鉴定微生物种类的一种快速可靠的高通量方法,可以为临床的微生物鉴定提供一定的技术支持。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法在婴幼儿食品蜡样芽胞杆菌检测中的应用

[目的]探讨3 种不同检测方法测定婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌污染情况。[方法]运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）法对婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌污染情况进行检测,并与国标法、VITEK 2 Compact和实时荧光PCR法进行检测结果比对。[结果]MALDI-TOF MS法与上述3 种方法的定性结果一致,且具有准确度高、耗时短、灵敏度高等特点,适用于样品的快速鉴定。[结论]通过研究发现,婴幼儿食品存在蜡样芽胞杆菌污染的风险,应加强对该类产品的监测和监管。     

2022年北京市宠物源细菌耐药性监测浅析

为了解北京市宠物源细菌的抗菌药物耐药情况,2022年,笔者对北京市四个城区的四家宠物医院的犬、猫共计50份样本的肛拭子进行了研究。试验对样品中的大肠杆菌和肠球菌首先进行了分离培养和质谱鉴定,然后采用微量肉汤稀释法分析分离菌株的耐药表型。结果共分离出大肠杆菌25株、肠球菌25株（屎肠球菌14株、粪肠球菌11株）。大肠杆菌耐药率最高的2种抗菌药为四环素和氨苄西林,多重耐药菌占44%;肠球菌耐药情况较严重,粪肠球菌耐药率最高的抗菌药物为磺胺异噁唑,屎肠球菌耐药率最高的抗菌药物为磺胺异噁唑、头孢西丁和红霉素,二者多重耐药菌占分离株总数的100%。综上,北京地区宠物源大肠杆菌、肠球菌的耐药情况较为严峻,且多重耐药现象突出,需要加强对宠物抗菌药使用的监督与管理。     

五种动物源肠球菌耐药性监测

为了解不同动物源肠球菌耐药性,试验选用10种常用抗生素,采用统一材料、方法(KB法)和判断标准[美国临床实验室标准化协会(CLSI)2007年版]对从5种不同动物源(人、狗、鸡、牛、猪)粪便中分离得到的肠球菌进行耐药性检测。结果表明:共分离得到肠球菌646株,包括人源肠球菌146株、狗源肠球菌138株、鸡源肠球菌128株、牛源肠球菌111株、猪源肠球菌123株;各动物源肠球菌对四环素和利福平耐受性偏高,对青霉素G、万古霉素和高浓度庆大霉素耐受性偏低,其中耐万古霉素肠球菌47株,平均耐药率为7%;各动物源肠球菌的耐药性表现为鸡源肠球菌最强,猪源肠球菌、狗源肠球菌、人源肠球菌次之,牛源肠球菌最低。说明滥用抗生素已造成人和畜禽动物肠球菌较为普遍的耐药,应引起临床及畜禽业高度重视。     

四川省动物源常见细菌耐药性现状

近年来由于兽用抗生素的大量使用,动物源尤其是食品动物中常见病原菌耐药性水平逐渐增高,并可在人、动物和环境中传播.尽管国内外已有动物源细菌耐药菌株的大量报道,但是聚焦局部地区仍缺少系统的总结.因此,论文针对四川地区动物源常见的大肠埃希氏菌、沙门氏菌和肠球菌的耐药性进行总结,介绍以上3种细菌的耐药水平、分布及重要耐药基因的...     

家蚕5龄第3天幼虫头部组织蛋白质双向电泳及质谱鉴定

家蚕幼虫头部有单眼、触角、口器、脑等取食和感觉的中心器官及坚硬的外壳。提取家蚕5龄第3天幼虫头部组织蛋白质进行双向电泳,经银染检测到654个蛋白点,这些蛋白的分子质量主要分布在15～97 kD之间,等电点(pI)在4～8之间;在pH 3～4和9～10的区域,也有较多的蛋白质被检测到,但该区域高丰度的蛋白质数量较少。对丰度较高的100个蛋白点进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,有52个蛋白质被鉴定,其中有21个酶类相关的蛋白,占被鉴定总蛋白质数的40.4%,其它蛋白质主要包括表皮蛋白、气味结合相关蛋白、肌肉相关蛋白等。研究结果可为家蚕幼虫头部组织的功能分析提供蛋白质水平的信息数据。     

Application of Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry in Identification of Stallion Semen Bacterial Contamination

Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) is one of the cutting-edge methods currently applied in medical bacteriologic diagnostics. The aim of the study was to prove the possibility of applying MALDI-TOF MS to identify bacterial contamination in the ejaculate of stud stallions, which may cause infections to reproductive organs of mares following artificial insemination with cooled semen. A partial aim was to determine changes in the total count of microorganisms in long-term storage of ejaculate after its treatment with gentamicin and also without antimicrobial medication. Aerobic cultivation on Columbia agar was used to examine 26 semen samples from 13 horses; 31 different species of bacteria were isolated, which were identified by MALDI-TOF MS. The most frequently detected species came from Aerococcaceae, Staphylococcaceae, and Micrococcaceae families. The results of our work confirm that MALDI-TOF MS is a quick alternative method for identifying bacterial species that may contaminate stallion semen.     

大肠埃希菌耐药机制研究进展

长期以来,人们对大肠埃希菌病的防治以药物控制为主要手段,但是随着抗菌药的长期大量使用,导致了大肠埃希菌耐药性的产生,给大肠埃希菌病的防治带来严重的障碍,通过对大肠埃希菌耐药性的现状、作用机理、主要特点、对人类的危害和防治策略等方面的研究,进一步提出对大肠埃希菌耐药性的展望,为消除大肠埃希菌的耐药性,更好地防治大肠埃希菌病提供科学依据。     

广西某地区猪源大肠杆菌耐药性及部分菌株耐药基因调查

试验旨在探究广西某地区猪源大肠杆菌的耐药性及部分菌株所含耐药基因情况,为预防及治疗动物性大肠杆菌类疾病提供参考。采用麦康凯琼脂培养基及伊红美蓝琼脂培养基初步鉴定、显微镜镜检、分子生物学16S rRNA鉴定、药物敏感性二倍肉汤微量稀释法等方法进行大肠杆菌的分离鉴定,并结合PCR相关技术对部分菌株的三十余种耐药基因进行检测。结果显示,从广西某地区采集的猪源病料中共分离得到65株猪源大肠杆菌,其均为多重耐药大肠杆菌且多集中于六重耐药与七重耐药。按所耐抗菌药物的种类分析发现其对β-内酰胺类、磺胺类、大环内酯类药物具有较高耐药性,耐药率分别98.46%、90.77%及84.62%,进一步分析发现其主要是对头孢噻呋钠、阿莫西林、磺胺间甲氧嘧啶、阿奇霉素等抗菌药物具有较高耐药性,对美罗培南、阿米卡星、黏杆菌素较为敏感。对部分菌株所含耐药基因进行整理发现,其多含有四环素类（tetA、tetM）、β-内酰胺类（CTX-m-u）及磺胺类（Sul2）耐药基因。综上所述发现广西地区猪源大肠杆菌耐药性情况较为严重,所含耐药基因也相对较多,因此在实际生产中需采用联合用药等相关措施进行疾病治疗以达到快速高效治疗疾病的目的。     

河南省部分地区猪群大肠杆菌分离菌的耐药性比较分析

为掌握河南省猪源大肠杆菌的耐药情况,于2013年至2018年对河南省郑州、开封、焦作、许昌四个地区部分规模化养猪场分离出的856株大肠杆菌,采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法,调查其对8类13种代表性抗菌药物的耐药性。结果表明,856株大肠杆菌对氧氟沙星、黏菌素、庆大霉素、头孢噻呋和阿莫西林/棒酸等5种药物的耐药率在35.0%以下,分别为32.2%、31.1%、25.5%、15.5%和30.0%;对恩诺沙星、四环素、多西环素、大观霉素、氟苯尼考、磺胺异恶唑、复方新诺明和氨苄西林等8种药物的耐药率范围为45.0%～95.0%,其中对四环素、多西环素和磺胺异恶唑等3种药物的耐药率高达90.0%以上;多重耐药集中于耐5、6和7类抗生素,耐3类及以上药物的菌株占90.0%。本研究结果表明河南省部分养殖场猪源大肠杆菌耐药形势严峻,应加强对其监测和控制。     

丹顶鹤源大肠杆菌耐药性的检测与分析

对扎龙自然保护区丹顶鹤源大肠杆菌进行分离培养,开展大肠杆菌耐药性调查。采用纸片扩散法测定各分离菌株对17种抗微生物药的敏感性。结果表明:丹顶鹤源大肠杆菌分离株对各抗微生物药的敏感性不同。受试菌株对氨苄西林、头孢噻吩的耐药率分别为57.5%、47.5%,对氟苯尼考、氨曲南、阿莫西林/棒酸均敏感。     

奶牛子宫内膜炎源性大肠埃希菌药敏试验与耐药基因检测

为探索奶牛子宫内膜炎源性大肠埃希菌耐药基因及其耐药性之间的关系。采用K-B纸片法对临床分离的54株奶牛子宫内膜炎源性大肠埃希菌进行12种抗菌药物敏感性测定,应用PCR进行这些抗菌药物相关耐药基因的检测。结果显示,54株大肠埃希菌对复方新诺明、恩诺沙星和四环素的耐药率较高,分别为67%、39%和35%。分离的54株大肠埃希菌中有41株至少含有所检测耐药基因中的1种,CyrA、CyrB、ParC和Tet耐药基因较为普遍,其耐药菌基因检出率依次为96%、83%、100%和95%,13株没有检测到相应的耐药基因。奶牛子宫内膜炎源性大肠埃希菌对常见抗菌药物耐药严重,耐药基因普遍存在于耐药菌株中,除氨基糖苷类耐药菌株,其他3种抗菌药物类型耐药表型与耐药基因检测结果有较高一致性。     

犊牛肺源致病性大肠杆菌分离鉴定、耐药性及耐药基因检测

本试验旨在确定新疆石河子地区某牛场因呼吸系统疾病导致犊牛死亡的细菌性病原,并对分离病原进行系统进化分类、耐药表型和耐药基因分析。采用细菌常规分离结合全自动生化分析系统对分离株进行分离鉴定,采用纸片法和PCR方法对分离株进行系统分群、药敏表型及耐药基因的分析。从患病犊牛肺脏、肝脏及淋巴结组织分离鉴定出6株致病性大肠杆菌,6株分离株均呈多重耐药现象,其中对青霉素、阿莫西林、头孢唑啉、头孢拉定、链霉素、庆大霉素、氟苯尼考、替考拉宁、克林霉素、美罗培南、四环素和妥布霉素的耐药率高达100%。氨基糖苷类耐药基因aacC2、β-内酰胺类耐药基因bla_CTX-M和bla_TEM、四环素类耐药基因tetA、喹诺酮类耐药基因gyrA、磺胺类耐药基因sul2携带率分别为66.67%、83.3%、66.7%、100%、100%和100%。结果表明,新疆石河子某牛场发生呼吸道感染死亡犊牛细菌性病原是大肠杆菌,且表现较强的多重耐药现象,分离株携带更为丰富的耐药基因。     

长治鸡群大肠杆菌耐药状况的研究

研究长治鸡群大肠杆菌耐药状况、交叉耐药状况、多重耐药状况及是否出现超级大肠杆菌,同时为临床用药提供参考,减少用药成本,控制大肠杆菌的危害,增加养殖户的收入.剖解病死鸡,采集可疑病料进行细菌分离培养鉴定,通过药敏试验确定其耐药情况.试验结果:长治鸡群大肠杆菌对氨苄青霉素耐药程度83%;对红霉素耐药程度67%;对复方新诺明耐药程度50%;先锋V耐药程度50%;对诺氟沙星耐药程度50%;对万古霉素耐药程度50%;对氯霉素耐药程度33%;对庆大霉素耐药程度33%;对阿米卡星耐药程度17%;对环丙沙星耐药程度17%;对利福平耐药程度17%;对复达欣耐药程度17%;对新生霉素耐药程度为0.结论:长治鸡群分离出的6株大肠杆菌中的5株为多重耐药性大肠杆菌,目前未出现超级大肠杆菌.对常用抗菌药物中的青霉素类、大环内酯类、头孢类、喹诺酮类耐药程度达到50%以上,分别为83%、67%、50%、50%;对新药万古霉素的耐药程度也达到了50%.     

Rapid Detection of SNPs in Buffalo MC4R Gene by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry

The study used matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) for rapid determination of single nucleotide polymorphisms (SNPs) in buffalo MC4R gene,which provided a foundation for constructing the marker-assisted selection(MAS)strategy.The cDNA sequence of buffalo MC4R gene was screened rapidly based on PCR amplification and sequencing method,and in which 13 SNPs were found.To further identify the reliability of screening system,8 SNPs were genotyped in 380 buffaloes using the MALDI-TOF-MS technology.The results revealed that 8 SNPs had an average of 98.0% in call rate,and in which three genotypes could be accurately distinguished.The average minor allele frequency (MAF),average heterozygosity and polymorphism information content (PIC) value of the 8 markers was 0.24,0.28 and 0.23,respectively.Our findings indicated that the rapid determination method of MALDI-TOF-MS with PCR and sequencing with highly accurate properties was a useful tool for identifying the SNPs of buffalo MC4R gene that laid the foundations for studying SNP genotype in buffalo genes associated production traits.