γ-干扰素ELISA检测方法在牛结核病流行病学调查中的应用

[目的 ]了解宁夏贺兰县奶牛结核病的流行情况,为制定宁夏地区牛结核病净化方案提供参考。[方法 ]2015年采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法,对宁夏贺兰县2个规模化奶牛场开展牛结核病流行病学调查,共检测奶牛2 230头。[结果 ]在2个规模化奶牛场累计检测出皮内变态反应阳性奶牛79头,皮内变态反应和γ-干扰素ELISA双阳性奶牛72头,双阳性率为3.23%(72/2 230)。[结论 ]γ-干扰素ELISA检测方法准确度较高;在对牛群进行结核病检测时,先以皮内变态反应方法筛测,再结合γ-干扰素ELISA检测结果确诊,更有利于牛结核病的检测与净化。     

四川省部分地区牛结核病感染情况调查

为了解四川不同地貌、不同海拔地区牛结核病的感染情况,本研究应用PPD皮内变态反应、体外检测IFN-γ法分别对四川省5个地区15个牛场的413头牛进行牛结核病检测。结果发现：两种方法中,PPD皮内变态反应有较高的检出率,其阳性检出率为3.87%,体外检测IFN-γ法的阳性检出率为2.91%,两者的阳性符合率为78.57%;大型规模养殖场的阳性检出率略高于小型养殖场;奶牛的阳性检出率与牦牛相近,略高于肉牛。     

牛结核病不同检测方法的比较研究

[目的]为达到迅速准确诊断牛结核病的目的,[方法]用2年时间对我国最常用的牛结核病检测方法进行了对比研究.[结果]试验结果表明,国标皮内变态反应试验(PPD)与皮内变态反应比较试验(SICTT)有较高符合率;国标皮内变态反应试验(PPD)阳性敏感性高于皮内变态反应比较试验(SICTT);皮内变态反应比较试验(SICTT...     

两种方法检测云南奶水牛结核病的应用研究

将PPD皮内变态反应法和抗γ-干扰素ELISA法相结合,对云南奶水牛进行牛结核病检测。应用PPD皮内变态反应法检测304头奶水牛,检出32头阳性、25头疑似反应牛,检出阳性和可疑比例高达18．75％,阳性和可疑牛只的分布并无地域和场的趋向性。对PPD皮内变态反应法检出的阳性和疑似反应牛经采集抗凝全血样品54份,应用抗γ-干扰素ELISA法复检,未检检出阳性牛只。结合对受抗γ-干扰素ELISA法检测牛的临床观察,初步认为PPD皮内变态反应法检出阳性和可疑牛系非特异性反应所致。     

国家二类新兽药牛结核病IFN-γ夹心ELISA检测试剂盒

牛结核病IFN-γ夹心ELISA检测试剂盒的原理是基于细胞免疫建立的牛结核病检测方法。结核病阴性牛淋巴细胞经牛型提纯结核菌素(PPDB)刺激后不产生IFN-γ,结核病阳性牛淋巴细胞经PPDB刺激后,产生大量IFN-γ。通过建立经PPDB刺激后的待检牛全血中IFN-γ的ELISA方法,从而实现对牛结核病的准确、快速和高通量检测。     

两种方法检测奶牛结核病的比较分析

采用常规皮内变态反应(TST方法)对唐山、秦皇岛、沧州和石家庄四个市共计2 204头奶牛进行牛结核病检测,采用IFN-γ试验方法对PPD检测结果为阳性、可疑的牛以及部分阴性牛进行复检。将IFN-γ试验与TST检测结果相比较,其敏感性为78.26%,特异性为89.09%,符合率为84.33%。研究表明单独使用PPD皮内变态反应方法在牛结核病的诊断方面存在特异性差的缺点,用IFN-γ试验对TST试验阳性和可疑牛进行复检可以提高特异性,避免造成假阳性牛的误杀;该方法在临床上适合推广应用。     

应用皮内变态反应和γ-干扰素体外释放试验检测奶牛结核病的比较研究

本研究首先应用皮内变态反应对10200头奶牛进行结核病检测,然后应用γ-干扰素体外释放试验对前者检测出的阳性牛和可疑牛再次进行结核病检测,比较两者的阳性符合率。结果显示,应用皮内变态反应共检测出结核病阳性牛96头、可疑牛4头;γ-干扰素体外释放试验检测皮内变态反应呈阳性的96头奶牛,结果为阳性牛94头、阴性牛2头,而检测皮内变态反应为可疑的4头奶牛,结果全为阳性。结果表明,两种方法的阳性符合率为97．92％（94／96）,虽然皮内变态反应存在一定的假阳性,且费时、费力,但考虑到γ-干扰素试剂盒比较昂贵,建议用皮内变态反应作为初筛试验,γ-干扰素试验用于初筛阳性样品的复核,以提高结核病检测的准确性。     

欧盟皮内变态反应比较试验法结合ELISA检测牛结核病的研究

现在应用较多的牛结核病检疫方法有变态反应、ELISA等方法。检疫牛结核病目前OIE唯一指定方法是皮内变态反应,该方法也是最古老的方法之一,经过多次改进,仍然为各国所用。该方法的不足是非特异性反应过高,且只能检测细胞免疫状态。牛结核     

猕猴结核IFN-γ体外释放检测法的建立与初步应用

旨在建立猕猴结核IFN-γ体外释放检测法,用于猴结核病的特异性诊断。从猕猴外周血白细胞克隆了猕猴IFN-γ(Macaca mulattaIFN-γ,Mm IFN-γ)基因,在大肠杆菌中表达,获得重组MmIFN-γ。利用杂交瘤细胞技术获得12株高效价的单克隆抗体。用所获得的单克隆抗体及兔抗IFN-γ多克隆抗体建立了检测猴IFN-γ的夹心ELISA,检测灵敏度达到62.5ng/L。用所建立的IFN-γ检测法与进口商品化试剂盒符合率为93.84%,具有很好的一致性(κ=0.779 3)。以眼睑皮内变态反应法(皮试法)为标准方法,先用皮试法检测146只猕猴,再用进口商品化的IFN-γ检测试剂盒(MABTECHTM)检测猕猴外周血淋巴细胞在牛和禽结核菌素刺激下释放的IFN-γ量,利用ROC曲线确定猕猴结核IFN-γ检测法的临界值为114.5ng/L,对皮试法的灵敏性为68.18%,特异性为91.94%。同时,本试验检测的猕猴的结核阳性率为17.12%,提示结核病对猕猴群的健康存在重大威胁。本试验建立了猕猴结核IFN-γ体外释放检测法,为猕猴结核病检测提供了新型技术手段。     

检疫牛结核病的欧共体皮内注射比较试验方法

结核病是由结核分枝杆菌引起畜和禽类的一种慢性传染病。目前，世界动物卫生组织对牛结核病检疫的指定方法是皮内变态反应。尽管世界上不少国家采用皮内变态反应的检疫方法消灭了牛结核病，但是却付出了极其高昂的经济代价。一方面皮内变态反应方法的敏感性高，非特异性反应较多；另一方面阳性牛检出后淘汰要负责赔偿损失，这种激励政策加速了牛结核病的控制和净化。最近，欧共体也采取了对南欧一些国家贸易中检出的结核阳性牛予以50％的经济赔偿，从而加速了控制结核病的速度。     

皮试法与ELISA法在奶牛结核病检测中的对比试验

通过单纯颈部皮内变态反应(SICT)、比较变态反应(SICCT)检测方法、γ-干扰素ELISA和ELISA 4种方法,同时检测上海2个奶牛场的222头奶牛。结果发现:阳性检出率以颈部皮内变态反应为最高(67.6%)、ELISA(44.1%)和γ-干扰素ELISA居中(31.1%),比较变态反应最低(13.1%);单纯的颈部皮内变态反应与2种ELISA的符合率较差,而比较变态反应与2种ELISA具有较好的符合率;在变态反应阴性牛中,仍然检出了部分ELISA阳性牛。由此认为,先以变态反应检疫牛群,再随之实施抗体检测,会更有利于结核病牛场的净化与防制。     

牛结核病γ-干扰素体外释放检测随时间变化规律

检疫-扑杀是牛结核病防控与净化的重要措施,而准确诊断是有效实施结核病“检疫-扑杀”控制策略的基础和前提。近年来,许多牧场在结核检疫净化中采用牛结核皮试辅以牛结核γ-干扰素体外释放检测作为判定标准。随着两种方法结合使用的增加,皮试是否影响γ-干扰素体外释放检测日益引起关注。本研究在两个牛场分别对48头牛和55头牛进行了连续6周的γ-干扰素体外释放检测跟踪,明确了奶牛结核病γ-干扰素体外检测检出率和验证率随时间变化的规律,皮试后6周内γ-干扰素体外试验检出率呈“V”字形变化;验证率逐步上升,在皮试后7～42d维持在100%。     

两种奶牛结核病检测方法的比较

本研究中采用常规皮内变态反应(TST)对广西南宁、柳州共计2 818头黑白花奶牛进行牛结核病检测,采用抗原特异性IFN-γ试验方法对PPD检测结果为阳性、可疑的牛以及部分阴性牛进行复检。将抗原特异性IFN-γ试验与TST检测结果相比,其敏感性为53.33%,特异性为70.49%,符合率为67.11%。本研究证实单独使用PPD皮内变态反应方法在牛结核病的诊断方面存在非特异性强等缺点,易造成假阳性牛的误杀;用抗原特异性IFN-γ试验对TST试验阳性和可疑牛进行复检可以提高特异性,该方法在临床上有重要应用价值。     

牛γ-干扰素单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

建立牛结核病的γ-干扰素(BovIFN-γ)免疫学检测方法。本研究利用rBovIFN-γ抗原免疫Balb/c小鼠,经5次免疫后,通过淋巴细胞杂交瘤技术及间接ELISA筛选制备抗BovIFN-γ的单克隆抗体,在McAb及多克隆抗体的基础上建立双抗体夹心ELISA,并进一步优化ELISA反应条件。结果表明,获得一株能稳定分泌抗BovIFN-γ McAb的杂交瘤细胞株A12E9,分泌单克隆抗体腹水效价为1∶107,属于IgG1亚类,具有良好的特异性;所建立的双抗体夹心ELISA方法,BovIFN-γ最低检测限为40 ng/mL,与其他蛋白不发生交叉反应,表现出良好的特异性。该方法为建立牛结核病的γ-干扰素诊断方法奠定了基础。     

牛结核病两种检测方法的比较

1迟发性变态反应1.1原理目前测定牛结核病的标准方法是迟发性变态反应(delayed typehypersensitivity,DTH)试验,即结核菌素(即PPD,为提纯的结核菌蛋白衍生物,其中包括蛋白、脂肪类、糖类以及核苷酸等多种抗原成分)试验,也是国际贸易的指定方法。结核菌在刺激机体发生免疫应答的时候,迟发性变态反应也随之产生,二者均由T细胞介导产生,但诱导产生免疫和变态反应的物质不同,所以检测机体对结核菌是否发生变态反应,即可判断是否具有免疫力,进而就可得知机体是否感染过结核菌。对牛皮内注射结核菌素,并在3天后测量注射部位肿胀程度。美国就是…     

不同剂量牛型和禽型提纯结核菌素对奶牛结核病皮内变态反应的影响

柳州市是奶牛结核病老疫区，多年来，通过检疫、淘汰、净化，使柳州市奶牛结核病阳性率从1998年的11．6％下降到2003年的0．98％，取得了显著成绩。但是，由于判断标准的变化以及考虑到其他因素的影响，我们开始对不同剂量的牛型和禽型提纯结核菌素进行了临床研究。以求探明牛型和禽型提纯结核菌素不同剂量对判断结果的影响。现将研究结果报告如下。     

两种牛结核病检测方法对经济效益影响的比较

从试剂成本、人工成本、奶牛产奶量等方面,对采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法检测奶牛场牛结核病对经济效益的影响进行对比。结果表明:在测试期(11 d)内,采用牛结核病γ-干扰素ELISA方法较运用皮内变态反应方法,每头奶牛产生的经济效益高374.0元(按广西当前鲜奶收购价计算)。对奶牛场进行牛结核病检测时,选择γ-干扰素ELISA方法更利于保障经济效益的最大化。     

应用ELISA检测牛结核血清抗体最佳条件的研究

用Ｔｒｉｔｏｎ ｘ ３０５ＰＢＳ、马高免血清、白陶土和丙酮分别处理３４０份结核菌素皮试阳性反应的奶牛血清，采用不封板、鸡高免血清封板和马高免血清封板三种方法，进行ＥＬＩＳＡ。结果表明，用白陶土处理样品血清、不封板和用鸡高免血清封板效果较好。     

浅谈牛结核病的诊断与防制

牛结核病是由牛型结核分枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性传染病.因此,做好牛结核病的诊断与防制工作十分重要.本文在综述了牛结核病的病原、流行病学、临床症状、病理变化和实验室诊断方法的基础上,提出了牛结核病的防治措施,期望为现代化、集约化和规模化的养牛业发展提供理论参考.     

牛结核γ干扰素ELISA检测方法的建立及应用

为建立快速、敏感的牛结核分枝杆菌检测方法,本研究利用两株牛γ干扰素(IFN-γ)的单克隆抗体(MAb)建立检测牛IFN-γ的抗原捕获夹心ELISA方法。通过优化反应条件,确定抗体包被浓度为5μg/mL;全血刺激上清最佳稀释倍数为1∶2,作用时间为1 h;最佳酶标抗体作用时间为1 h;底物作用时间为15 min。该方法对重组牛IFN-γ的最小检测量可达25 pg/mL,对重组和天然牛的IFN-γ均具有特异性,与IFN-α、IFN-β或白细胞介素4为阴性反应;与山羊和绵羊的IFN-γ呈阳性反应,而与猪、鸡、鹿、犬和人的IFN-γ呈阴性反应。通过对177头牛进行检测,该方法与皮内变态反应的符合率为78.9%,与进口试剂盒的符合率为89.8%,表明该方法具有良好的应用价值。本研究为牛结核早期及其潜伏期感染的监测及流行病学调查提供了快速敏感的检测方法。