猪胎盘中生物活性肽的制备及含量测定

为测定猪胎盘中胎盘肽含量及其分子质量的大小,试验采用Tricine-SDS-PAGE电泳法和考马斯亮蓝G-250法,分别对6付刚娩出的新鲜猪胎盘的胎盘肽分子质量和含量进行测定,以各重复组测定结果的平均数代表每付胎盘中胎盘肽的含量和相对分子质量。结果表明,6组猪胎盘中胎盘肽分子质量分别为14.219ku、13.801ku、12.012ku、12.357ku、11.326ku及10.197ku,其平均水平为12.31ku±1.51ku;胎盘肽的含量分别为0.67mg/g±0.07mg/g、0.82mg/g±0.03mg/g、0.81mg/g±0.02mg/g、0.70mg/g±0.11mg/g、0.79mg/g±0.03mg/g及0.84mg/g±0.04mg/g,其平均含量为0.77mg/g±0.03mg/g。     

羊和猪胎盘肽的制备及其生物活性的初步研究

利用超滤法从羊和猪胎盘中提取出了胎盘肽,采用改良的加脲Tricine-SDS-PAGE电泳法测定羊胎盘肽的分子量为4,386Da;利用紫外光扫描得其最大吸收峰分别为225.4 nm和209.6 nm;并通过建立体外抑制兔淋巴细胞模型,利用MTT比色法测定所提取胎盘肽的免疫调节作用,结果显示:羊和猪胎盘肽均可使顺铂抑制的兔外周血T淋巴细胞的转化率显著提高,其中羊胎盘肽以1:102、1:103和1:104三组效果最为明显(P<0.01);而猪胎盘肽以1:102、1:103两组效果最为明显(P<0.01)。     

羊和猪胎盘肽的制备及其生物活性的初步研究

利用超滤法从羊和猪胎盘中提取出了胎盘肽,采用改良的加脲Tricine—SDSPAGE电泳法测定羊胎盘肽的分子量为4,386Da;利用紫外光扫描得其最大吸收峰分别为225．4nm和209．6nm;并通过建立体外抑制兔淋巴细胞模型,利用MTT比色法测定所提取胎盘肽的免疫调节作用,结果显示：羊和猪胎盘肽均可使顺铂抑制的兔外周血T淋巴细胞的转化率显著提高。其中羊胎盘肽以1：10^2、1：10^3和1：10^4三组效果最为明显（P〈0．01）;而猪胎盘肽以1：10^2、1：10^3两组效果最为明显（P〈0．01）。     

鹿血抗氧化肽不同分子量肽段抗氧化活性的研究

采用超滤法分离鹿血抗氧化肽提取液,得到了4种不同分子质量的鹿血抗氧化肽。通过不同肽段清除DPPH自由基、亚铁还原能力和氨基酸含量的测定,得出分子质量3 ku肽段抗氧化性最强,其具有抗氧化能力的氨基酸含量最高。     

奶牛乳中早孕因子分子性质的研究

采用玫瑰花环抑制实验测定早孕因子(EPF)活性,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其肽图,聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测其等电点。结果表明:从孕牛乳中分离出EPF活性样物质,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳见2条蛋白带,其相对分子质量为21.0 ku、67.0 ku,等电点为6.8。     

牦牛胎盘肽对衰老小鼠部分组织中SOD活性和MDA含量的影响

胎盘民间称衣胞或胎衣,中医称紫河车,其味甘咸,性温,具有补气、养血、益精之功效,是一种常用的滋补强壮药。胎盘肽是一类分离提取的小分子多肽及核酸的混合物质,分子质量为3 800-5 000 u,含有17种氨基酸和一定量的多肽、核糖、脱氧核糖及核酸[1]。从现代科学的研究结果看,胎盘肽具有免疫调节、延缓衰老、辅助治疗肿瘤、增强缺氧耐受力等作用[2-4]。本试验以牦牛胎盘为原料,提取胎盘肽,     

孕牛乳中早孕因子的分离纯化

采用硫酸铵分级盐析、DEAE-52纤维素离子交换层析、G-100葡聚糖凝胶层析、ConA-Sepharose 6B LL亲和层析的方法分离纯化健康怀孕奶牛(妊娠4个月)乳中的早孕因子,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其肽图。结果表明:从孕牛乳中分离出EPF活性样物质,其蛋白含量为0.290 mg/mL,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳见2条蛋白带,其相对分子质量为21.0 ku、67.0 ku。说明这条分离纯化早孕因子的技术路线是可行的。     

亚洲璃眼蜱唾液腺一新基因(GP29)的原核表达及产物鉴定

将吸血诱导的亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因GP29的开放性阅读框插入pGEX-4T-1,转化BL21,表达出一相对质量为53 ku的蛋白,其大小与预计结果一致。蛋白质的肽质量图谱和“1381.7511”肽段序列两方面的结果证明,SDS-PAGE胶板上相对质量为53 ku的蛋白就是由目的基因表达的GST融合蛋白。该蛋白与SwissPROT库中的任何蛋白均有较大差别,可能是一个新功能分子。     

用SDS—PAGE分析鸡毒霉形体广西分离株的结构蛋白

应用SDS－PAGE对鸡毒霉形体（Mycoplasma gallisepticum,MG)4个标准株和5个广西分离株的结构蛋白进行了比较分析。结果，在凝胶电泳图谱中10－100ku蛋白分子质量之间，F株缺少87ku蛋白带，Y3株在最靠近87ku蛋白带的上方和下方各缺少1条蛋白带，H2株和Y2株缺少64ku蛋白带，CH株缺少29ku蛋白带，97、75、43ku处的蛋白带为4个MG标准株和5个MG分离株所共有。表明9个MG供试菌株的结构蛋白都存在一定的差异，广西MG分离株的结构蛋白呈现多样性。     

亚洲璃眼蜱唾液腺-新基因（GP29）的原核表达及产物鉴定

将吸血诱导的亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因GP29的开放性阅读框插入pGEX-4T-1，转化BL21，表达出一相对质量为53ku的蛋白，其大小与预计结果一致。蛋白质的肽质量图谱和“1381．7511”肽段序列两方面的结果证明，SDS-PAGE胶板上相对质量为53ku的蛋白就是由目的基因表达的GST融合蛋白。该蛋白与Swiss PROT库中的任何蛋白均有较大差别，可能是一个新功能分子。     

多黏类芽孢杆菌抗菌肽的分离纯化及特性研究

试验旨在分离纯化多黏类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）BLCC1-0402代谢产物中的抗菌肽,为抗菌肽制备及其制品检测提供参考。采用离心、不同分子质量卷式膜超滤浓缩、Superdex peptide 10/300GL凝胶过滤层析对多黏类芽孢杆菌发酵上清液进行逐级分离纯化,对不同时段的收集液做抑菌试验,以大肠杆菌O78标准菌株为指示菌,采用打孔法进行抑菌活性检测,比较评价分步层析效果,以Tricine-SDS-PAGE进行分子质量检测。结果显示,通过5和3 ku卷式膜超滤获得的3~5 ku组分蛋白质样品抗菌活性较强;对于3~5 ku组分经凝胶过滤层析分离纯化,纯化后的抗菌肽A3抑菌活性最强,经Tricine-SDS-PAGE小分子多肽电泳检测,已达到电泳纯,分子质量为4 ku;抑菌活性检测结果显示,该抗菌肽A3对大肠杆菌O78标准菌株具有较强的抑菌作用。同时,抗菌肽A3表现出较好的耐热性,90~100 ℃处理15 min,抑菌活性可保持在96%左右;具有较好的酸碱稳定性,在pH 2.0~9.0下,抑菌活性保持在90%以上;经胃蛋白酶作用后抗菌肽A3抑菌活性降低20%,胰蛋白酶作用后抗菌肽A3抑菌活性降低18%,蛋白酶K对抗菌肽A3的抑菌活性几乎无影响。本研究结果表明,分离得到的抗菌肽A3是一种对大肠杆菌O78具有抑菌活性的新型抗菌肽,具有一定的开发潜力,可为下一步抗菌肽的结构分析、理化特性分析等深入研究提供一定参考依据。     

绵羊生殖道抗菌肽cDNA克隆及真核表达载体构建

绵羊生殖道抗菌肽（ORTAP40）是从中国美利奴绵羊生殖道分离的一种新型的阳离子抗菌肽,在绵羊发育早期的防御中起到了主要的作用。在本研究中,根据ORTAP40 N端氨基酸序列设计引物,利用3′RACE技术克隆了绵羊生殖道抗菌肽3′末端全长cDNA序列,并被GenBank收录,登录号为FJ514476,经过cDNA序列分析显示,ORTAP40是一个4.8 ku的小肽,与先期分离纯化的分子质量一致。作者随后参照巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）密码子偏好性,设计并人工合成了ORTAP40成熟肽目的基因片段,所合成的ORTAP40基因全长120 bp,通过基因重组的方法将目的基因克隆到pPIC3.5K和pPICZαA表达载体上,成功构建了重组酵母胞内表达载体pPIC3.5K-ORTAP40和外泌表达载体pPICZαA-ORTAP40,为抗菌肽的开发和应用奠定了基础。     

乌鳢体表粘液抗菌肽CSM14的分离纯化及部分生物学活性研究

为建立分离纯化乌鳢体表粘液抗菌肽的方法并研究其抗菌活性,本研究通过嗜水气单胞菌对乌鳢进行刺激,采用甲醇提取、SephadexG-50凝胶层析和反向高效液相色谱从其体表粘液中提取抗菌肽,经质谱分析测定分子量;并对抗菌肽的抑菌谱、最小抑菌浓度(MIC)、热稳定性、溶血活性进行了初步研究。结果表明:分离纯化的乌鳢体表粘液抗菌肽分子量约为3024.15ku,并具有广谱的抗菌活性,热稳定性好,没有溶血活性。     

猪卵泡抑素基因成熟肽序列的克隆及其在大肠杆菌中的表达

根据猪卵泡抑素(follistatin,FS)基因编码区序列(GenBank登录号:M36512.1)设计并合成1对引物,经PCR扩增获得了FS基因成熟肽序列,将其克隆入pMD18-T载体并转化E.coli DH5α感受态细胞,进行PCR、双酶切及测序验证。然后将其克隆到表达载体pRSET-A的BamHⅠ和HindⅢ酶切位点之间,构建重组质粒pR-FS并转化E.coli BL21(DE3) 感受态细胞,再经PCR、双酶切和测序验证。转化重组质粒pR-FS的重组菌经IPTG诱导后的表达产物进行SDS-PAGE分析,分子质量与预期相符,为26.1 ku左右,经0.2 mmol/L IPTG诱导3 h之后表达量达到最高,约占总菌体蛋白的30%。表达产物可经Ni-NTA凝胶纯化。以上结果表明正确完成了猪FS基因成熟肽序列的克隆及其在大肠杆菌中的表达及纯化。     

大白猪胎盘效率遗传规律的初步研究

本文分析了 77头纯种大白母猪的 469头初生仔猪的胎盘效率、胎盘面积、胎盘长度、胎盘重及初生重等性状资料 ,估计了各性状间的简单相关系数 ,应用非求导约束最大似然法 (MTDFREML)估计大白猪胎盘效率、胎盘面积、胎盘长度、胎盘重及初生重的遗传力 ,估计结果分别为0 46 ,0 2 5 ,0 1 1 ,0 1 4和 0 2 9     

鸭血球短肽的优化制备及其特性研究

本试验旨在筛选水解效率高且脱色效果好的商业蛋白酶,建立血球短肽的优化工艺,比较其在酶解前后营养特性的变化,研究其功能特性与体外抗氧化能力,以研发功能性血球短肽产品,为家禽血液资源高值化的转化利用与深度挖掘提供理论依据与技术借鉴。比较酶种类、酶浓度、温度、p H、水解时间等因素对蛋白酶水解度(DH)、脱色程度、水解物产量的影响,采用正交试验设计优化血球短肽的最佳工艺,对血球短肽进行营养价值、功能特性及抗氧化性能评价。确定酸性蛋白酶为最佳水解酶,其水解鸭血球蛋白制备短肽的最优工艺参数为:酶用量6 000 U/g,温度50℃,p H 3.5,水解时间7.0 h。在此条件下,水解度为(25.10±0.65)%,水解物产量为(60.09±1.77)%。通过高效液相色谱分析水解产物分子质量分布。结果表明,酶解对血球蛋白有明显的降解作用,酶解产物主要以3 ku以下的短肽为主,其中1 ku以下占大部分(62.82%)。血球短肽粉呈乳白色,氨基酸种类齐全,必需氨基酸含量丰富(53.31%),鸭血球蛋白酶解后的溶解性大大提高(60%),且具有良好的乳化稳定性。血球短肽清除自由基能力较强,随血球蛋白浓度的提升,清除1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH·)与超氧阴离子能力随之愈强,还原力也逐渐增加。由此可见,酸性蛋白酶可有效水解鸭血球蛋白获得氨基酸含量丰富、溶解性好且具有抗氧化活性的乳白色血球短肽,可以作为功能性原料应用于食品与饲料中。     

牦牛Toll样受体5基因的克隆及序列分析

根据GenBank中已公布牛Toll样受体5（toll-like receptors 5,TLR5）基因序列,设计全长引物,并对所得序列进行生物信息学分析和预测。基因序列分析结果表明,克隆得到牦牛TLR5基因全长2582 bp,开放阅读框2577 bp,编码氨基酸858个,N端含有21个氨基酸组成的信号肽,分子质量为97.981 ku,理论等电点为4.85;蛋白预测结果表明,TLR5编码蛋白整体表现为亲水性;同源性分析结果表明,牦牛与野牦牛、黄牛、绵羊、山羊等物种具有较高的同源性,在系统发育树中距离最近,说明TLR5基因序列具有较高的保守性。牦牛TLR5基因序列的成功克隆为今后深入研究牦牛及高原动物抗病及免疫机制提供非常重要的理论基础。     

猪细胞周期蛋白依赖性激酶2多克隆抗体的制备与鉴定

为研究猪细胞周期蛋白依赖性激酶2(pCDK2)的生物学功能,本试验构建重组原核表达载体pET28a-pCdk2,转化大肠杆菌BL21 (DE3)受体菌,用IPTG诱导重组蛋白(rpCDK2)表达并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定,蛋白经纯化及与弗氏佐剂乳化后免疫家兔制备多克隆抗体。分别用Western blotting和免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体的免疫活性。结果显示,成功表达了rpCDK2蛋白,该蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,可溶性rpCDK2蛋白分子质量约为38 ku,包涵体rpCDK2蛋白在38~43 ku间有3种不同分子质量形式;IPMA检测结果显示,所制备的pCDK2蛋白多克隆抗体与猪肾细胞(PK-15)和猪睾丸细胞(ST)免疫染色呈特异性反应,且Western blotting分析显示,多克隆抗体与这两种细胞的总蛋白反应出现4条特异性条带(分子质量在34~50 ku之间),可能跟pCDK2的多种磷酸化形式有关。本试验利用原核表达系统成功制备了rpCDK2蛋白,并制备了免疫活性和特异性良好的pCDK2蛋白多克隆抗体,为该蛋白生物学功能及相关疾病研究提供了基础材料。