应用间接竞争ELISA检测山羊痘抗体方法的建立

[目的]为山羊痘疫苗接种山羊后产生的抗体效价检测和山羊痘的诊断奠定基础。[方法]采用Vero-E6传代细胞分离山羊痘病毒抗原,建立检测山羊痘抗体的间接竞争ELISA方法。[结果]检测山羊痘抗体的间接竞争ELISA的最佳工作条件：最佳抗原包被浓度为1μg/ml,兔抗高免血清最佳稀释度为1∶16 000,待检血清的工作浓度为1∶400,阳性血清的临界值为45.19%,阴性血清的临界值为38.89%。用该试验建立的ELISA方法检测3 000份接种山羊痘疫苗的山羊血清,阳性检出率为83.33%,琼脂扩散试验检出率为77.33%,竞争抑制ELISA方法较琼脂扩散试验方法敏感。[结论]该方法具有特异性高、快速、敏感等特点,适合检测山羊痘抗体。     

贵州山羊痘的病原学研究与血清学检测

2002年10月以来，贵州省8个养羊场相继发生一种以皮肤、呼吸道和消化道黏膜出现痘疹的传染病。通过电镜观察在痘疹材料中发现大量典型的痘病毒粒子；感染鸡胚后绒毛尿囊膜增厚、充血和出现痘斑；接种BHK21单层细胞引起明显的细胞病变效应，而且这种现象能够被山羊痘参考血清所抑制。血清学检测结果表明，患病羊痘疹材料中山羊痘抗原的阳性率为66．7％；血清样本中山羊痘抗体的阳性率为47．4％。根据对本次疫病的病原学研究和血清学检测，可以确诊贵州省山羊痘暴发流行。     

山羊痘免疫效果检测

应用山羊痘正向间接血凝诊断试剂对贵州省和广西柳州市共604头份山羊血清进行了抗体检测。同时对3种山羊痘疫苗进行了免疫效果比较,测定了山羊痘疫苗的免疫抗体消长规律、免疫保护期,对皮内、皮下、肌肉接种疫苗的免疫效果进行了比较。结果表明:山羊痘弱毒疫苗免疫后7~8 d可检测出抗体,皮内、皮下注射接种方式的免疫效果优于肌肉注射。制定了对山羊痘病的免疫程序,使用B组疫苗,采用皮内注射方式对山羊进行免疫,产生抗体的时间较快,水平较高,维持时间可达196 d以上。     

山羊痘病毒增殖与沉淀抗原制备

取山羊痘分离野生强毒H—GZ株通过Vero—E6细胞传代增殖，经硫酸铵盐析与Sephadex G-200层析制备了山羊痘病毒沉淀抗原。该抗原在琼脂扩散反应和对流免疫电泳的试验中能够与山羊痘参考阳性血清、山羊痘免疫阳性血清出现沉淀线，所形成的沉淀反应能够被山羊痘参考阳性血清特异性地抑制，与其它常见的动物病血清不发生交叉反应。本次制备的山羊痘病毒沉淀抗原和山羊痘免疫阳性血清，可以用于兽医临床诊断、免疫效果监测和流行病学调查。     

羊痘病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

用纯化的山羊痘病毒分别免疫家兔和豚鼠,制备高效价的抗血清.经方阵滴定测定捕获抗体、检测抗体、酶结合物和标准抗原的稀释倍数.通过对阴性样品的检测,确定阴阳性的判定标准,初步建立羊痘病毒间接夹心ELISA 诊断方法.用建立的ELISA 方法对31份已知背景样品进行检测,总符合率为93.5%.经特异性试验、批内重复试验和对比试验,说明建立的夹心ELISA 诊断方法具有良好的特异性、重复性和敏感性.对田间样品的检测表明,该ELISA 诊断方法可应用于对羊痘的鉴别诊断.     

贵州省黔西南州山羊痘的血清学调查

为调查黔西南州山羊痘的隐性感染率和使用疫苗后血清抗体水平,采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）对黔西南州规模化养羊场和农村散养户共762头份羊血清样本进行了GPV抗体水平检测.结果,未免疫羊群GPV的血清抗体阳性率为14.15％;而在免疫羊群GPV的血清抗体阳性率为79.96％;这表明GPV的免疫效果比较理想,但未免疫羊群存在GPV感染,应引起重视.     

山羊痘弱毒疫苗（AV41株）接种途径和剂量对牛抗体反应的影响

为评估山羊痘弱毒疫苗（AV41株）经皮下和皮内接种牛体后的抗体产生规律,优化牛体免疫程序,选取25头健康成年肉牛分为5组,每组5头,标准单头份剂量为含量1.0×103.5TCID50 AV41株,分别以5倍和10倍羊用剂量进行皮下和皮内免疫,于接种后0、15、30、45和60 d,利用病毒中和试验（VNT）和ELISA试剂盒检测血清抗体水平。结果显示：鼻咽拭子和血液PCR结果均为阴性,未出现排毒;VNT与ELISA抗体检测结果相似,免疫后第30天,皮下接种5倍剂量组中有60%牛抗体转阳,中和抗体滴度最高达1∶640。同时,皮内和皮下10倍剂量组各有40%牛抗体转阳,皮内5倍剂量组有20%牛抗体转阳。VNT中和指数与ELISA的S/P值呈现显著正相关。上述结果表明,类似于国际上相关疫苗的接种途径和剂量,皮下注射5倍羊头份剂量山羊痘弱毒疫苗是安全和有效的,可作为临床预防牛结节皮肤病的免疫接种方案。     

羊伪结核抗体间接ELISA检测方法的建立

【目的】建立羊伪结核棒状杆菌抗体的间接ELISA检测方法。【方法】分别用不同浓度的伪结核棒状杆菌菌体抗原和培养上清可溶性抗原包被酶标板,用脱脂奶粉封闭酶标板,设置封闭时间分别为1.0,1.5和2h,再用不同稀释度的血清(1∶100,1∶200,1∶400和1∶800)与之反应,以此优化间接ELISA反应条件,确定阳性结果判定的临界值。对间接ELISA方法的特异性和重复性进行考察,并在此基础上对采集的临床样本进行检测。【结果】选用伪结核棒状杆菌菌体为包被抗原,最佳包被抗原菌体密度为OD600=0.08,血清的最佳稀释度为1∶400,封闭时间为2h,阳性血清的临界值为0.329。该抗体检测方法可特异性地检测出伪结核阳性血清,羊口疮阳性血清、羊痘阳性血清、乳房炎阳性血清均呈阴性反应;组内,组间变异系数10%。该方法对临床样本的检测结果与实际患病状况一致。【结论】成功建立了伪结核抗体间接ELISA检测方法,该方法特异性强、重复性好,可用于临床诊断和批量血清学检测。     

应用反向间接血凝试验检测山羊痘病毒抗原

以兔抗山羊痘病毒IgG致敏绵羊红细胞，采用反向间接血凝试验(RPHA)检测山羊痘病毒抗原。该诊断试剂与山羊痘病毒抗原发生特异性的凝集反应；在PBS中不自凝；与其它动物病病毒抗原无交叉反应。对贵州省8个疫区现场采集山羊痘待检抗原检测结果表明，该方法阳性检出率为87．5％(7／8)。与琼脂扩散试验(AGP)阳性检出率为50％(4／8)相比较，RPHA敏感性比AGP高；同时对山羊痘野生强毒H—GZ株F1～F5代细胞培养物进行检测，F1代就可检出RPHA效价，而AGP则不能检测。该诊断试剂可用于兽医临床上山羊痘的快速诊断及作为病毒分离培养的检测指标。     

应用正向间接血凝试验检测山羊痘抗体

采用硫酸铵盐析、Sephadex G-200柱层析的方法纯化山羊痘病毒,以病毒抗原致敏绵羊红细胞建立了山羊痘正向间接血凝试验,并进行了最佳试验条件的摸索.结果表明,试验所制备的诊断液能与山羊痘参考阳性血清发生特异性凝集,其凝集现象能被山羊痘阳性抗原特异性抑制,与其它常见的动物病阳性血清无交叉反应.用本方法及琼脂扩散试验对山羊痘血清进行检测,IHA阳性检出率为89.1%（41/46）;而AGP阳性检出率为34.8%（16/46）.表明正向间接血凝试验比琼脂扩散试验敏感性高.本次试验制备的正向间接血凝试验诊断液可用于兽医临床上进行快速诊断.     

泰州地区宠物弓形虫感染流行现状调查与防治

为调查泰州地区宠物犬猫弓形虫感染流行现状,随机采集泰州地区不同来源犬与猫的血液样本,采用弓形虫抗体ELISA试剂盒与弓形虫抗体胶体金试纸条2种方法对该地区犬猫弓形虫感染情况进行流行病学调查,并开展治疗试验。结果表明,该地区597份宠物血清样本经ELISA试剂盒与胶体金试纸条2种方法检测出的弓形虫抗体阳性率分别为12.06%(犬8.05%,猫19.34%)、11.60%(犬7.79%,猫18.40%);且农村散养犬和猪与流浪犬和猫的血清弓形虫抗体阳性率最高;成年犬和猫的弓形虫抗体阳性率明显高于幼年犬和猫;春季采集的犬和猫血清样本弓形虫抗体阳性率最高;阳性样本宠物主人血清弓形虫抗体阳性率为8.57%;对于具有临床症状的感染犬猫通过综合治疗措施,治愈率达81.82%。同时数据显示,ELISA试剂盒检测敏感性高于胶体金试纸条,但两者差异不显著。     

怎样防治山羊痘

山羊痘俗称“山羊天花”，是由山羊痘病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病．临床症状以皮肤和黏膜形成痘疹为主要特征。本病常在冬末春初流行。     

羊痘病的诊断与防控

羊痘是由山羊痘病毒引起的急性、热性、接触性传染病。根据本病的流行特点、临床症状和发生发展规律及对人类的危害,提出诊断的方法和防控措施。     

贵州规模养殖场黑山羊主要疫病的血清学调查

了解贵州规模黑山羊养殖场疫病的防控情况,为建立无重大疫病黑山羊养殖场提供参考,采用凝集试验、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验方法对随机采集的83份黑山羊血清样品进行羊布鲁氏杆菌、羊传染性胸膜肺炎、口蹄疫、山羊痘血清学调查。结果表明,83份黑山羊血清样品的布鲁氏杆菌病平板凝集试验的阳性率为13.25%,试管凝集试验的阳性率为10.84%;羊传染性胸膜肺炎MMC血清的抗体阳性率为6.94%,MO血清抗体阳性率为8.33%;O型口蹄疫血清抗体阳性率为15.28%,亚洲Ι型口蹄疫血清抗体阳性率为11.11%,A型口蹄疫血清抗体阳性率为0,口蹄疫隐性感染阳性率为0;山羊痘抗体阳性率为61.11%。结论:调查的黑山羊群存在不同程度的布氏杆菌和传染性胸膜肺炎病原感染,口蹄疫和山羊痘的免疫情况不太理想,需要加强相关免疫,及时淘汰布氏杆菌感染羊只或隔离治疗传染性胸膜肺炎病原感染羊只。     

猪鼻支原体间接血凝及EUSA检测方法的初步建立

本试验旨在建立猪鼻支原体间接血凝及ELISA检测方法,为猪鼻支原体的血清学诊断、流行病学调查及防控提供技术基础。利用Mhv全茵及P37蛋白为抗原．通过间接血凝及ELISA方法检测抗体,初步建立猪鼻支原体血清学检测方法。结果表明：利用Mhv全茵抗原建立的间接血凝法检测猪鼻支原体阳性血清具有较高的抗体效价。但与猪肺炎支原体阳性血清存在严重的交叉反应：这些结果提示Mhv全茵间接血凝及全茼包被ELISA方法检测Mhp血清与Mhp存在严重交叉反应,而P37包被ELISA不存在交叉反应。     

猪鼻支原体间接血凝及EUSA检测方法的初步建立

本试验旨在建立猪鼻支原体间接血凝及ELISA检测方法,为猪鼻支原体的血清学诊断、流行病学调查及防控提供技术基础。利用Mhv全茵及P37蛋白为抗原．通过间接血凝及ELISA方法检测抗体,初步建立猪鼻支原体血清学检测方法。结果表明：利用Mhv全茵抗原建立的间接血凝法检测猪鼻支原体阳性血清具有较高的抗体效价。但与猪肺炎支原体阳性血清存在严重的交叉反应：这些结果提示Mhv全茵间接血凝及全茼包被ELISA方法检测Mhp血清与Mhp存在严重交叉反应,而P37包被ELISA不存在交叉反应。     

基于番鸭细小病毒VP3蛋白的间接ELISA方法建立

本试验采用经原核表达并纯化的番鸭细小病毒VP3蛋白作为包被抗原，辛酸-硫酸铵沉淀法提取纯化制备的兔抗番鸭IgG酶标抗体作为二抗，经一系列试验，确定了间接ELISA检测番鸭细小病毒抗体的最佳抗原浓度为5 μg·mL^-1，血清的最佳稀释度为1∶100，血清样品稀释液为含10% FBS和10%脱脂奶粉的PBST，兔抗番鸭酶标抗体最适稀释度为1∶2 500。将建立的方法进行了特异性、敏感性、重复性与中和试验的符合性等试验。试验结果表明，阳性血清样品作1 600倍稀释还能检测到抗体；与其他常见鸭传染病的阳性血清无交叉反应；批内、批间重复性试验的变异系数小于8.7%；100份番鸭血清样品用ELISA方法与中和试验的总符合率达90%以上。说明本试验建立的检测方法敏感性高、特异性强、重复性与稳定性好，可用于番鸭细小病毒流行病学调查及鸭群免疫番鸭细小病毒疫苗后抗体监测。     

波尔山羊肝片吸虫和支原体混合感染的诊治

2013年12月20日我们诊治了一例波尔山羊下颌水肿、消瘦和呼吸困难而致羊死亡的病例,经流行病学调查,临床症状、病理变化和实验室检测确诊其病原为羊肝片吸虫和绵羊肺炎支原体混合感染。现报道如下：1发病经过该养殖户有2年多养羊的历史,常年免疫山羊痘疫苗和口蹄疫疫苗,没有发生过疫情,至2013年初波尔山羊存栏已达270只。     

口蹄疫抗体免疫层析试纸的临床应用及性能评价

为评价前期研制的猪口蹄疫O型抗体检测试纸的临床应用效果,检测了162头份口蹄疫病毒(FMDV)多肽疫苗免疫猪血清和87头份灭活疫苗免疫猪血清,并与UBI FMDV抗体检测ELISA和美国BioXL FMDV抗体检测ELISA做平行对比试验。结果显示,试纸与2种ELISA方法的符合率分别为95.06%和96.55%。说明该试纸可以用于猪FMDV O型抗体的临床检测,为评价口蹄疫疫苗免疫效果提供了快速、简便的方法。     

两种检测猪伪狂犬病gB抗体方法比较

为评价化学发光免疫分析法在临床检测猪伪狂犬病gB抗体中的适用性,将其与IDEXX公司ELISA抗体检测方法进行比对试验.对110份猪血清进行猪伪狂犬病gB抗体化学发光免疫分析法与ELISA法的检测.结果显示,以ELISA法为标准,化学发光免疫分析法检测猪伪狂犬病gB抗体的灵敏度、特异性、符合率分别为98.31%、100%、99.10%,Kappa=0.96,说明化学发光免疫分析法与ELISA法的符合率较高,且其操作步骤更简便,更省时,可以用于临床猪血清样品的猪伪狂犬病gB抗体的检测.