Mtx1和Cry4Ba毒蛋白基因工程研究进展

球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericuss,Bs)Mtx1和苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis israelens,Bti)Cry4Ba是主要的杀蚊毒蛋白。通过对Mtx1毒蛋白杀蚊的作用机理,Cry4Ba毒蛋白的结构与作用机理的介绍,综述Mtx1毒蛋白和Cry4Ba毒蛋白基因工程研究进展,并对Mtx1毒蛋白和Cry4Ba毒蛋白的未来研究进行了思考。     

苏云金芽孢杆菌LY30菌株对棉铃虫毒性的研究

[目的]研究苏云金芽孢杆菌LY30菌株对棉铃虫的毒性作用。[方法]初步比较LY30和HD-1菌株的形态特征、生理生化特性,并采用生物测定的方法,比较它们对棉铃虫初孵、二龄、三龄幼虫的毒效差异。[结果]LY30属于H3a3b3c血清型、kurstaki亚种,主要由135、65kD2种蛋白成分组成,在菌株生长形态、发酵培养特征、生理生化特性方面与生产菌株HD-1差别不大。LY30菌株发酵液对棉铃虫初孵、二龄、三龄幼虫的LC50分别为0.32、0.62、2.58μl/ml。[结论]LY30菌株对棉铃虫三龄以下的幼虫具有高毒力。     

虹鳟致病性杀鲑气单胞菌的分离鉴定及其毒力因子的检测

为研究虹鳟Oncorhynchus mykiss致病性杀鲑气单胞菌Aeromonas salmonicida的致病机理,利用微生物学及分子生物学方法,从患皮肤溃疡病的虹鳟病灶处分离纯化获得1株优势菌株RBWF-1,通过人工感染试验证实其具有较强的致病性。结果表明:菌株RBWF-1对虹鳟的半致死浓度(LD50)为5.5×10~6CFU/m L;通过对菌株RBWF-1 16S r DNA基因序列扩增、测序及Blast对比,发现其与杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种Asalmonicida subsp.masoucida菌株NBRC 13748及无色亚种A.salmonicida subsp.achromogens菌株NCIMB 1110的16S rDNA基因序列同源性最高,一致性均为99.6%;构建系统发育树显示,菌株RBWF-1与杀鲑气单胞菌杀鲑亚种A.salmonicida subsp.salmonicida、杀日本鲑亚种、无色亚种和史氏亚种A.salmonicida subsp.smithia聚为一支;为进一步明确菌株的分类地位,利用Biolog微生物鉴定系统结合传统生理生化试验对菌株RBWF-1各项理化指标进行检测,经对比,与杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种吻合度最高,因而判断该分离株为杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种;同时,对分离菌株的气溶素、溶血素、封闭带毒素、DNA酶、丝氨酸蛋白酶、磷脂酶、S层蛋白7个毒力相关基因进行了PCR检测,检测结果均呈阳性;酶活性检测结果显示,菌株RBWF-1胞外产物具有蛋白酶、淀粉酶、脂酶、DNA酶和溶血活性。本研究结果可为中国虹鳟养殖过程中杀鲑气单胞菌的感染特征、分类鉴定和疫苗研制提供必要的数据和参考。     

一株高毒苏云金杆菌的晶体蛋白组成及RAPD分析

筛选得到一株对摇蚊幼虫高毒的苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌株(命名为SZ6),利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和RAPD技术分析了其晶体蛋白和总DNA组成,结果表明:在晶体蛋白提纯中,固体培养基培养的菌株晶体蛋白比液体摇瓶培养的更易用双液相法提纯;晶体蛋白亚基在分子量上和标准菌株的晶体蛋白没有显著差异,都含有4条多肽(分子量分别为135、128、72和27KD),但RAPD分析结果显示,该毒株在DNA组成上,于多个位点处存在与标准菌株不同的结构。     

东北地区土壤中4株Bt菌株的研究

对从东北地区土壤中分离出的4株编号分别为HB-4、HB-11、HB-37和HB-69的苏云金芽孢杆菌菌株进行了形态特征、发酵特性、生化反应、鞭毛血清型鉴定及毒力测定的研究。结果表明,4株菌株的血清型分别为:H3abc、H14、H5ab和H3abc。4株菌株对小菜蛾均有较高毒力,HB-37对玉米螟有较高毒力,HB-4对玉米螟有低毒,HB-11对尖音库蚊有低毒。     

对甜菜夜蛾高毒力苏云金杆菌的分离及生物测定

从山野和田间土壤样品中分离得到苏云金杆菌62株.经镜检发现,这些菌株的伴孢晶体多数呈菱形(79.0%).初步的生物测定结果表明,62株菌株中对小菜蛾、斜纹夜蛾和甜菜夜蛾的致死率超过90%以上的菌株分别有44株、8株和6株.其中CAB109、CAB110、CAB116和CAB162这4株菌株对上述3种害虫都表现出高活性.将其稀释成1.0×107cfu/mL后进一步生物测定的结果,CAB109菌株对甜菜夜蛾的毒性最高,死亡率达100%,比已经商品化的NT0423农药高15%.血清型鉴定发现,CAB109菌株的血清型为H7,属aizawai亚种,而其余3种血清型全部为H3abc,属kurstaki亚种.对害虫的毒性和血清型都表明,CAB109菌株是防治甜菜夜蛾非常有潜力的优良菌株.     

苏云金杆菌防治贮烟害虫应用研究

对从烟叶中分离到的对贮烟害虫高毒效的苏云金杆菌Bt33、Bt53、BtHB进行了系统的研究。结果表明:(1)经生理生化特性对比鉴定,菌株Bt33属科尔默亚种,血清型是H21;菌株Bt53属幕虫亚种,血清型是H2;菌株BtHB属加拿大亚种,血清型是H5a5c。(2)室内生物毒力测定,9d后Bt33、Bt53发酵原粉稀释300倍对烟草粉螟二龄幼虫防治效果均超过80%,BtHB发酵原粉稀释600倍防治效果超过80%。(3)菌剂Bt33、Bt53、BtHB在烟叶仓库中的实际防治效果,两个试验点烟叶均匀喷雾菌剂处理对烟草粉螟的防治效果好于烟包表面喷雾菌剂的处理;其中,烟叶均匀喷雾Bt53菌剂处理的防治效果最好。(4)施用苏云金杆菌菌剂防治贮烟害虫后对烟叶的化学成分无影响;卷制的单体烟香气质、香气量、烟气浓度、杂气与对照比,评吸分均有提高;刺激性、劲头、余味与对照比差异不显著。     

苏云金杆菌灭蚊剂IPS·78的生物测定

苏云金杆菌以色列变种(Bacillus thu-ringiensis Var.isralensis H_(14))对蚊幼虫有高毒性。为实现毒力测定的标准化,国内外都进行了许多研究。在生物测定中,大致可分为两类:一是L.J.Goldberg等以半致死剂量(LD_(50))求出的每只幼虫所需活细胞数(细胞/幼虫)为依据的生物测定程序;另一类是我们和H.de Barjac采用过的以标准品为依据,求出半致死浓度折算效价的生物测定程序。然而,活细胞数与毒力     

开菲尔粒中产球菌样细菌素乳酸菌的分离与鉴定

利用MRS选择培养基筛选开菲尔粒中具有抑菌作用的乳酸菌。采用牛津杯琼脂扩散法,结合对理化抗性特征的鉴定、抗菌谱测定、菌落形态与特征和生理生化实验鉴定,结合伯杰氏手册对分离到的菌株进行鉴定。生理生化反应为乳酸菌,菌落形态与特征为球菌,对多数的革兰氏阴性菌有抑制作用,该菌株为乳酸乳球菌二乙酰乳酸亚种。鉴定分离为产球菌样细菌...     

麻姑山林场球孢白僵菌遗传多样性的SSR标记分析

利用SSR(简单序列重复,simple sequence repeat)分子标记对来自安徽省麻姑山马尾松林的102株球孢白僵菌进行遗传多样性和基因分型研究。依据时间分类亚种群的Nei基因多样性(H)为0.198 7,Shannon信息指数(I)为0.278 9,亚种群间的基因分化系数(Gst)为0.174 5,基因流(Nm)为1.215 0;不同寄主亚种群的H为0.194 5,I为0.287 1,亚种群间的Gst为0.166 4,Nm为1.300 0。研究表明,麻姑山马尾松林球孢白僵菌有一定的遗传多样性,亚种群间遗传变异较小,有18个菌株属于同一基因型,亚种群内表现出较高水平的遗传分化。9对微卫星引物将102株白僵菌分成31个微卫星基因型。在这31种微卫星基因型中,有5种为相对优势基因型。31种基因型株系在不同月份中存在一定的动态变化,并通过侵染不同寄主昆虫,完成在森林生态系中的延续。并且,这些相对优势基因型并不是在各个月份均匀分布,在大部分月份中,存在1～2种优势度高的基因型。研究揭示,SSR分子标记在研究白僵菌的群体遗传结构和基因分型展现出快速和菌株的特异性特征。     

猪源高产蛋白酶芽胞杆菌的分离与鉴定

利用酪蛋白培养基从猪粪便样品中分离产蛋白酶的芽胞杆菌,采用福林酚法测定其酶活力,对筛选到的高酶活菌株进行形态学、生理生化和分子鉴定。结果表明,从86株分离茵中筛选了一株酶活较大的菌株B．A464,革兰氏阳性菌,呈粗杆状,能形成卵圆形芽孢,16SrDNA序列长度是1463bp,与蜡样芽孢杆菌的同源性高达99％,鉴定为蜡样芽孢杆菌,所产蛋白酶活力为2．19×10^3U·mL^-1。     

甘露聚糖酶产生菌F1-5的鉴定

[目的]鉴定1株高产甘露聚糖酶菌株。[方法]以高产甘露聚糖酶的菌株为对象,采用形态观察、生理生化试验及16S rDNA系统发育分析手段对其进行鉴定。[结果]该菌株在牛肉膏蛋白培养基上培养24h后,菌落表面粗糙,不透明白色,革兰氏阳性,杆状,能形成芽孢,表明其属于芽孢杆菌属。对F1-5进行生理生化特征鉴定,结果表明,其为枯草芽孢杆菌或蜡样芽孢杆菌。PCR扩增获取该菌的16S rDNA基因。经BLAST同源序列比对,结果显示,菌株F1-516SrDNA与枯草芽孢杆菌的16S rDNA具有99％的同源性,表明F1-5为枯草芽孢杆菌。[结论]该研究为甘露聚糖酶工业化开发应用奠定了基础。     

Identification and Characterization of Lysobacterenzymogenes as a Biological Control Agent Against Some Fungal Pathogens

Strain OH11, a Gram-negative, nonspore forming, rod-shaped bacterium with powerful antagonistic activity, was isolated from rhizosphere of green pepper in Jiangsu Academy of Agricultural Sciences of China and characterized to determine its taxonomic position. 16S rRNA gene sequence analysis revealed that strain OH11 belongs to the Gammaproteobacteria and had the highest degree of sequence similarity to Lysobacter enzymogenes strain C3 （AY074793） （99%）, Lysobacter enzymogenes strain N4-7 （U89965） （99%）, Lysobacter antibioticus strain （AB019582） （97%）, and Lysobacter gummosus strain （AB16136） （97%）. Chemotaxonomic data revealed that strain OHI 1 possesses a quinine system with Q-8 as the predominant compound and C15：0 iso, C17：1 iso ω9c as the predominant iso-branched fatty acids, all of which corroborated the assignment of strain OH11 to the genus Lysobacter. Results of DNA-DNA hybridization and physiological and biochemical tests clearly showed that strain OH11 was classified as Lysobacter enzymogenes. Strain OH11 could produce protease, chitinase, and β-1,3-glucanase. It showed strong in vitro antifungal activity against Rhizoctonia solani, Sclerotinia scletotiorum, and several other phytopathogenic fungi. This is the first report of identification and characterization of Lysobacter enzymogenes as a biological control agent of plant diseases in China.     

一株源于红树林土壤芽孢杆菌的鉴定 及其蛋白酶学性质研究

从湛江红树林土壤中分离出一株产蛋白酶的芽孢杆菌,通过细菌形态观察、生理生化试验及16S rRNA 基因序列进行分类鉴定,并研究了温度、pH 值、金属离子、EDTA 和吐温80 等因素对该菌株发酵产蛋白酶的酶学性 质的影响。结果表明,该菌株为解淀粉芽孢杆菌,命名为解淀粉芽孢杆菌y-6（Bacillus amyloliquefaciens strain y-6）; 该菌株产生蛋白酶的最适温度为55益,最适pH 为7.0~7.5,40益时,酶活性稳定,保温3 h仍有95%以上的相对酶活 力,pH 为5.5~11 时,酶活性稳定,相对酶活力均在90%以上;Ca2+、Zn2+和吐温80 对蛋白酶有一定的激活作用,Mn2+、 Fe3+、Cu2+及EDTA 对酶有一定的抑制作用,其中EDTA 对酶的抑制作用最强。     

多杀性巴氏杆菌的分离和PCR鉴定

从甘肃省某县一猪场病死猪剖解肺部分离,经过涂片镜检观察,为革兰氏染色为阴性的球杆菌,经过生化试验鉴定初步定为多杀性巴氏杆菌.设计1 对引物进行PCR扩增、克隆之后,送往大连宝生物公司测序,测序结果运用BLAST软件比对,与多杀性巴氏杆菌同源性为100%.对分离株进行药敏试验,其对青霉素、链霉素、四环素等抗生素和磺胺类药物敏感.     

1株烟草赤星病拮抗芽孢杆菌的鉴定与活性研究

【目的】筛选对烟草赤星病具有拮抗作用的芽孢杆菌并进行鉴定,同时研究其抗菌作用。【方法】从陕西、云南、湖北和河南4省烟区采集烟草根际土壤和烟叶,从中分离筛选烟草赤星病拮抗芽孢杆菌,并对拮抗性最强的1株芽孢杆菌进行形态学、生理生化特性、16S rDNA序列鉴定及粗提物抑菌作用测定。【结果】从烟草表面及根际土壤分离得到的芽孢杆菌中有10株对烟草赤星病有拮抗效果,将其中效果最好的1株芽孢杆菌定名为M-07C2F,其抑菌条带宽度达14.2 mm;通过16S rDNA测序并结合其形态和生理生化特征,鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。通过显微观察发现,M-07C2F菌株使烟草赤星病病原真菌的菌丝生长出现畸形,菌丝体内部细胞原生质体分布不均匀,部分菌丝内原生质有流出形成空壳的现象。在离体条件下采用生长速率法,测得其对烟草赤星病菌丝生长有抑制作用,EC₅₀为12.82 mg/L;在活体条件下采用田间小区试验,测得当M-07C2F菌株粗提物质量浓度为80 mg/L时,其对烟草赤星病的防治效果达到86.0%。【结论】菌株M-07C2F对烟草赤星病菌的抑菌作用明显,该菌株通过抑制烟草赤星病菌菌丝生长、减少孢子萌发来抑制病菌对植株的侵染,且菌株粗提物质量浓度越高,抑菌能力越强。     

一株来源于人体的双歧杆菌的分离与鉴定

文章从人体粪便中分离出一株革兰氏阳性专性厌氧的杆菌B001,根据16S rDNA序列分析结果,其与两歧双歧杆菌亚种S83624的同源性高达99.9%,结合糖发酵试验以及菌体形态学特征,将菌株B001鉴定为两歧双歧杆菌。     

三株芽孢杆菌抑菌活性分析及对肉鸡舍空气微生物的影响

【目的】分析2株解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）和1株苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）的基本特性以及对大肠埃希氏菌（Escherichia.coli,CVCC1570）的抑制活性;分析3株芽孢杆菌复合制剂对肉鸡舍空气大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用,为改善畜舍环境提供基础数据。【方法】对3株芽孢杆菌进行形态学观察、镜检和生长曲线测定,以大肠埃希氏菌（CVCC1570）为指示菌株,采用琼脂扩散法对单一菌株的抑菌特性进行测定,筛选出适宜的抑菌浓度;利用三因子三水平的正交试验设计,筛选出最佳抑菌效果的复合芽孢杆菌组合;鸡舍喷洒试验采用单因子设计,分为3个处理组,每个处理设3个重复,分别为空白对照组,化学消毒剂阳性对照组（苯扎氯铵）,喷洒复合芽孢杆菌菌剂处理组。在肉鸡不同日龄检测鸡舍内大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的变化规律。【结果】3株芽孢杆菌为革兰氏阳性需氧菌。芽孢杆菌SKN01和芽孢杆菌SKN02生长曲线相近,在培养2h开始进入对数生长期。芽孢杆菌SKN03生长较缓慢,进入对数生长期的时间相对较长。单一菌株对大肠埃希氏菌有效抑菌浓度均为108CFU•mL-1。经正交试验测定,3株芽孢杆菌复合菌液最佳抑菌组合为4×108 CFU•mL-1、4×108 CFU•mL-1、6×108 CFU•mL-1。最佳组合复合芽孢杆菌喷洒鸡舍,能够有效抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长,在肉鸡生长后期复合制剂的抑菌效果明显。【结论】3株芽孢杆菌能够有效抑制大肠埃希氏菌,同时复合菌液能够有效减少鸡舍有害微生物的数量,起到改善鸡舍环境的作用。     

一株产乙醇嗜热厌氧油藏微生物Thermoanaerobacter sp DF3的性质研究

[目的]了解油藏微生物Thermoanoerobacter sp DF3的生理生化特性,优化木糖产乙醇培养方案。[方法]利用厌氧分离技术从大港油田油层采出液中分离到一株产乙醇厌氧杆菌DF3。采用生理生化鉴定与16SrDNA序列的系统发育学分析其系统发育地位。用气相色谱分析其代谢产物。[结果]菌株DF3是一株严格厌氧的嗜热细菌,呈直杆状,G^-,菌体大小为O．42μm×（1．60～5．20）μm,单生、成对或成串生长,产顶端芽孢;生长温度为45～78℃（最适65℃）,能利用葡萄糖、木糖、果糖、核糖、甘露糖、阿拉伯糖、蔗糖、半乳糖、乳糖、纤维二糖、松三糖、棉子糖、淀粉等作为底物;其16SrRNA与zpseudoethanolicus相似性为99．7％。发酵葡萄糖与木糖的主要产物为乙醇,培养方案优化后其代谢木糖产乙醇终浓度为2．og／L。[结论]通过试验证明菌株DF3是目前已知菌株中产乙醇活性较强的茵株之一,在65℃时代谢木糖能产生2．Og／L的乙醇。目前代谢木糖高产乙醇的茵株均由国外分离获得,菌株DF3的分离获得为我国研究木质纤维素产乙醇提供了优良的出发菌株。     

鸡肠道枯草芽孢杆菌的分离鉴定及生物特性研究

为研究和开发动物新型微生态制剂,最大程度的提高经济效益,改变抗生素滥用、药物残留等现状,从健康鸡肠道中分离出1株芽孢杆菌,并命名为W,且对其进行形态观察、生化试验鉴定和16S rRNA序列分析及同源性比较。结果表明,本菌株与Bacillus subtilis strain CICC 10023(GU980947.1)的同源性达99.5%,最终确定该菌株为枯草芽孢杆菌,对该菌株进行药敏试验和安全性试验。结果表明,该菌对青霉素、杆菌肽耐药,对小鼠无致病性。