鸡胚接种NDV病毒后尿囊液量及血凝效价的研究

鸡胚接种ＮＤＶ病毒后尿囊液量及血凝效价的研究伍富尧，刘治西（莱阳农学院）王元彬，王洪本（临沂市畜牧局）试验Ｉ为了解不同来源的鸡胚接种ＮＤＶ后的尿囊液量及其血凝（ＨＡ）滴度的差异，进行本试验。１材料和方法１．１毒种新城疫毒种为ＬａＳｏｔａ弱毒株，由中监...     

鸽新城疫病毒在鸡胚中的生长规律

目前,国内用于ND免疫预防的主要措施是以鸡胚作为病毒繁殖的载体,收集尿囊液,经灭活制成不同佐剂的灭活疫苗。为了探索ND在鸡胚中的生长规律,笔者采用ND接种9日龄鸡胚,以HA检测不同时间的胚体、卵黄、尿囊膜、羊膜、尿囊液、羊水中ND的血凝效价,从而掌握ND在鸡胚内的生长规律。1材料与方法1.1材料1.1.1鸡蛋来源于非疫区的非免疫区的非免疫鸡场。1.1.2鸽新城疫种毒种毒为自行分离,经中国农业科学院哈尔滨兽医研究所鉴定确认为ND。1.1.3红细胞采自20周龄健康非免疫的伊沙蛋用公鸡,由本所提供。1.2方法1.2.1病毒的接种将种毒作1∶100稀释…     

种毒接种剂量与鸡胚尿囊液量的相关性研究

对成分３组而同机孵化的１８０个９日龄罗曼蛋鸡鸡胚分别尿囊腔接种ＮＤＶ Ｌａｓｏｔａ种毒液０．１ｍＬ／个,０．１５ｍＬ／个,和０．２０ｍＬ／个。结果：尿囊液的收集量与种毒接种量显著负相关,而血凝价受接种剂量的影响不显著。     

金银花提取液在鸡胚内抗新城疫病毒试验

为证明金银花抗新城疫病毒的作用效果,通过接种鸡胚方法,对病毒接种前、接种同时、接种后加药3种方式处理的鸡胚尿囊液血凝效价进行测定。结果显示,在3种不同的加药方式中,不同浓度的金银花提取液均能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价,其作用效果与提取液浓度呈正比例相关。结果表明,金银花提取液能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖;金银花提取液在鸡胚内抗新城疫病毒活性与其加药方式及浓度有关。     

鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒试验

为证明鱼腥草抗新城疫病毒的作用效果,通过接种鸡胚方法,对病毒接种前、接种同时、接种后加药三种方式处理的鸡胚尿囊液血凝效价进行测定。结果显示,在三种不同的加药方式中,不同浓度的鱼腥草提取液都能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价;鱼腥草提取液和新城疫病毒同时注入鸡胚时,鱼腥草原液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液于新城疫病毒接种后注入鸡胚时,2倍稀释液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液先于新城疫病毒注入鸡胚时,4倍和8倍稀释液抗病毒效果最好。结果表明,鱼腥草提取液能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖;鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒活性与其加药方式及浓度有关。     

新城疫病毒在鸡胚中增殖特性的研究

本研究将接种到9～10日龄鸡胚中的鸡新城疫病毒(NDV)La Sota或V4株弱毒培养24h,病毒滴度可增加106以上,培养108 h,病毒滴度则增加至10 10倍以上.NDV在有NDV母源抗体的普通鸡胚与无抗体的SPF鸡胚中的增殖无显著差异;盲传对于检验NDV没有意义.La Sota或V4株病毒悬液在理论上稀释至每胚接种量只有数个或1个病毒时,仍可引起鸡胚感染.低毒量条件下固定病毒的数量,随着接种胚数的增加,感染率随之下降,但感染数在一定范围内波动,没有减少趋势.以上结果证实数个甚至1个活的NDV粒子即可引起鸡胚感染,这对现地检测NDV具有重要意义.     

鸡胚接种新城疫病毒胚龄的选择试验

<正>目前国内生产的新城疫灭活疫苗基本上都是采用鸡胚接种病毒后进行增殖,收获尿囊液制备而成。受种毒和种蛋方面不同材料因素影响,疫苗生产行业没有一套统一的严格规定接种胚龄和收获胚龄的新城疫灭活疫苗生产流程,各生产企业也只能通过自行摸索,试验出一套适合于自身的生产方法。为了提高产品质量和降低生产成本,我们用ND-laSota株种毒进行了生产试验,现报告如下:     

种毒接种剂量与鸡胚尿囊液量的相关性研究

对分成3组而同机孵化的180个9日龄罗曼蛋鸡鸡胚分别尿囊腔接种NDVLasota种毒液0.1mL／个,0.15mL／个和0.20mL／个。结果：尿囊液的收集量与种毒接种量呈显著负相关,而血凝价受接种剂量的影响不显著。     

紫锥菊注射液鸡胚内抗新城疫病毒作用研究

为研究紫锥菊注射液的抗病毒作用,用鸡胚培养法和血凝试验(HA)测定了紫锥菊注射液及对照药液对感染新城疫病毒鸡胚的保护作用.结果显示,紫锥菊注射液对鸡胚无毒.试验Ⅰ组(紫锥菊注射液和新城疫病毒液混合接种组)对鸡胚保护率达75%,其尿囊液HA滴度为0.试验Ⅱ组(利巴韦林注射液和新城疫病毒液混合接种组)对鸡胚的保护率为37....     

不同病毒在SPF鸡胚与普通鸡胚繁殖性能的比较

利用HI和AGP方法检测普通种蛋中ND和IBD的卵黄抗体水平,利用HA和EID50检测方法比较多种病毒(如NDV、IBV、IBDV及AEV)在SPF鸡胚与普通鸡胚上繁殖性能的差异。研究结果表明:普通种蛋中ND及IBD的卵黄抗体水平普遍较高,在SPF鸡胚上新城疫LaSota病毒繁殖量是普通鸡胚的5～20倍,尿囊液血凝效价平均高2.0～2.5滴度。MA5毒株在SPF胚病毒液EID50为普通鸡胚的10倍以上熏且每次检测的结果比较接近。IBDV、AEV等病毒在普通鸡胚上几乎不能增殖。     

新城疫、禽流感病毒同胚接种的研究

根据新城疫病毒、禽流感病毒两种病毒均能在鸡胚中繁殖的特点,将两种病毒以最适稀释比例稀释后,分别接种于9—11日龄的鸡胚尿囊腔,同时进行两种病毒同胚培养,并利用血凝试验进行病毒效价的测定。结果表明,在同一鸡胚中两种病毒均能较好地增殖,病毒间干扰现象不明显。本试验在增强疫苗的免疫原性和进一步阐明病毒的增殖机理方面具有重要意义。     

中药复方在鸡胚水平上抗鸡新城疫病毒的作用研究

本试验以中药百花蛇舌草、金银花等清热解毒药为主药,辅以黄芪、甘草等补气药组成中药复方,以水萃取浓缩制备中药复方流浸膏。以鸡新城疫病毒（NDV）为模式病毒,在鸡胚水平上以鸡胚平均死亡时间（MDT）和鸡胚尿囊液血凝价作为检测指标。结果表明,中药复方流浸膏与NDV感作和不感作均对NDV有明显的抑制作用,延长鸡胚死亡时间,降低血凝价,为临床用药提供了试验依据。     

鸡新城疫病毒与传染性支气管炎病毒同胚培养的试验研究

将鸡新城疫病毒（NDV）和鸡传染性支气管炎病毒（IBV）按一定的稀释比例等量混合接种9~10日龄SPF鸡胚,让其在同一鸡胚中增殖（简称同胚培养）。试验结果表明,用5倍稀释的ND-Lasota病毒液与 5000倍稀释的IBH₁₂₀病毒液等体积混合后尿囊腔接种鸡胚,能在同一鸡胚中正常增殖,接种后96 h收毒,用红细胞凝集试验（HA）测得NDV、IBV两种病毒的血凝价分别为11 log2和12 log2,不低于各自病毒单独增殖的HA滴度,病毒的增殖基本趋于平衡。同时也证实了在合适的培养条件下,IBV对NDV的复制不会产生干扰。     

山东省肉仔鸡新城疫流行病学调查

采用鸡胚接种法从山东省的潍坊、烟台、青岛、淄博、滨州、东营、聊城、济宁、临沂、日照、德州等地分离到32株有血凝性的病毒，经HA、HI试验及血清中和接种鸡胚试验，27株被确定为新城疫病毒，其中25株来自于发病鸡群．2株来自从发病鸡场中捕捉的麻雀。参照国际上规定的新城疫病毒毒力判定标准及其方法，测定27株新城疫病毒的鸡胚最小致死量平均死亡时间(MDT)为37．6～56．8h；1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1．74～1．92；6周龄鸡静脉注射致病指数(IVPI)为2．11～2．70。测定结果表明：27株新城疫病毒为新城疫强毒。用27株分离的新城疫病毒接种14日龄新城疫非免疫鸡，其发病率为100％，病死率为70％～90％。调查统计发生鸡新城疫的肉仔鸡群的有关情况。调查结果表明：鸡新城疫在山东省的潍坊、烟台、青岛、淄博、滨州、东营、聊城、济宁、临沂、日照、德州等地存在不同程度的流行，且一年四季均可出现，其中冬天出现的频率最高(12／25)。多种日龄的鸡均可发生鸡新城疫，其主要的发病日龄为20～40日龄，10日龄以内的雏鸡亦可发病，死亡率有时超过70％。而且发病鸡的发病日龄越小，死亡率越高。     

3个不同基因型新城疫病毒间的抗原同源性比较

分别以鸡新城疫病毒（NDV）基因Ⅱ型弱毒疫苗株LaSota、基因Ⅶ型鸡源野毒株Y98F9和基因Ⅵ型鸽源野毒株PB9601为灭活疫苗，制备相应的抗血清。将3株病毒分别与相应的抗血清做交叉血凝抑制试验（HI）和在细胞培养上做交叉病毒中和试验（VI）．以此比较3个基因型病毒间的抗原同源性关系。在交叉HI中，LaSota株与基因Ⅶ型的Y98F9株间的同源性为90．0％，而基因Ⅵ型的鸽源PB9601株与Y98F9株间的抗原同源性仅为74．2％，与LaSota株间的抗原同源性更低至65．2％。在交叉VI中，也表现出非常类似的同源性关系，LaSota株与Y98F9株间的同源性为90．1％，而鸽源PB9601株与Y98F9株间的同源性也仅为75％，与LaSota的同源性进一步低至65．8％。     

不同日龄鸡胚接种不同浓度病毒对鸽新城疫病毒PB9601株鸡胚适应毒产毒量比较

利用不同浓度的鸽新城疫病毒（NDV）PB9601株在不同日龄的鸡胚上繁殖，观察鸡胚的死亡时间、尿囊液的收获量，并分别测定尿囊液中HA滴度和ELD50值，比较结果表明，以1：500稀释液0．1ml接种9日龄SPF鸡胚或1：100稀释液0．1ml接种10日龄胚产毒量最高。     

精氨酸霉形体和莱氏无（需）胆甾醇霉形体在鸡胚细胞内增殖的比较观察

将精氨酸霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａａｒｇｉｎｉｎｉ，简称ＭＡ）和莱氏无（需）胆甾醇霉形体（Ａｃｈｏｌｅｐｌａｓｍａｌａｉｄｅａｗｉｉ，简称ＡＬ），分别接种于鸡胚细胞，电镜下观察结果如下：（１）此２种霉形体在形态、细胞内分布、增殖形式和吞噬功能以及对培养细胞的选择性等方面是相同的；（２）此２种霉形体引起培养细胞的病理学过程不同。接种ＭＡ的鸡胚细胞，早期即出现髓膜样结构和脂质体等退行性变化，晚期在细胞质内才能见到空泡出现；而接种ＡＬ的鸡胚细胞，早期即可出现细胞质内的空泡化现象，晚期细胞质内才可见到髓膜样结构和脂质体。     

新城疫传染性支气管炎病毒单胚同胚接种试验的比较

通过对五个批次的无特定病原体(SPF)鸡胚进行鸡新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)同胚接种,收获72～120 h死胚及120 h活胚尿囊液,分别测定NDV和IBV的病毒含量,结果NDV病毒含量达到了108.3～108.7 EID50/0.1mL, IBV的病毒含量达到了106.3～106.5 EID50/0.1mL.两种病毒含量均达到<中华人民共和国兽用生物制品规程>(2000年版)中鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗病毒含量要求的标准.表明该方法即可降低成本,又简化了生产工艺.