热应激对小鼠早期囊胚发育能力和线粒体结构的影响

对小鼠早期囊胚分别进行39℃和41℃2h的体外热应激处理,观察热应激后小鼠早期囊胚后续发育能力和线粒体结构的变化。结果41℃2h热应激显著降低了小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚和孵化囊胚的百分率;39℃热应激组与正常培养组相比差异不显著(P0.05)。热应激组扩张囊胚平均总细胞数均显著少于37℃正常培养组,孵化囊胚平均总细胞数与37℃正常培养组差异不显著(P0.05)。39℃热应激组小鼠早期囊胚线粒体发生轻微肿胀,经37℃再培养2h后线粒体肿胀减轻;41℃热应激组胚胎线粒体高度肿胀,经37℃再培养2h后线粒体肿胀未减轻。上述结果说明,热应激后小鼠早期囊胚线粒体的损伤程度和修复能力决定了小鼠早期囊胚的后续发育能力。     

热应激对小鼠早期囊胚细胞骨架的影响

为了探索热应激降低小鼠早期囊胚后续发育能力的作用机理,试验采用形态学分析的方法,将试验动物昆明种小鼠分为39℃热应激组、41℃热应激组和对照组(37℃),从亚细胞水平观察体外热应激处理后小鼠早期囊胚细胞骨架的变化。结果表明:对照组和39℃热应激组小鼠早期囊胚紧密连接,桥粒未发生明显变化;而41℃热应激组小鼠早期囊胚桥粒连接结构不完整,两侧附着微丝减少,可见到明显的缝隙,卵周隙明显增大,微绒毛减少、弯曲,且细胞器的修复能力变差。说明细胞骨架的破坏是热应激降低小鼠早期囊胚后续发育能力的作用机理之一。     

热应激对小鼠囊胚HSP72表达的影响

将体外培养的小鼠囊胚分别施以40℃和38℃热休克处理1 h,2 h和3 h,然后在37℃条件下分别恢复3 h,2 h和1 h后,利用Western blot技术检测小鼠囊胚HSP72的表达,以明确热应激对小鼠囊胚HSP72表达的影响.结果显示,38℃和4O℃热应激组均有HSP72的表达,38℃组2 h达到最高水平,与对照组相比差异显著(P<0.05),然后表达量随热应激时间延长而降低;40℃组3 h达到最高水平,与对照组相比差异不显著(P>0.05).结果表明,轻度、短时间热应激既可使小鼠囊胚HSP72表达.     

体外热应激小鼠早期囊胚发育能力的研究

为了研究体外热应激对小鼠早期囊胚发育能力的影响,试验在39℃和41℃条件下对小鼠早期囊胚培养2 h,然后恢复37℃培养,以观察其发育到扩张囊胚和孵化囊胚的比例和细胞总数。结果表明:37℃正常培养组和39℃、41℃热休克处理组早期囊胚发育到扩张囊胚率分别为(81.7±6.5)%、(80.8±6.4)%、(63.3±3.6)%,各组扩张囊胚细胞总数分别为(57.11±1.70)个、(49.89±1.30)个、(42.22±2.00)个;孵化囊胚率分别为(77.2±5.0)%、(79.7±5.6)%、(49.4±9.3)%,孵化囊胚细胞总数分别为(73.09±0.60)个、(71.27±0.50)个、(71.89±1.80)个。41℃热条件下热休克2 h显著降低了小鼠早期囊胚的扩张囊胚率和孵化囊胚率(P0.05),39℃热休克处理组与正常培养组相比差异不显著(P0.05)。39℃、41℃热休克处理组扩张囊胚细胞总数与正常培养组相比显著减少(P0.05),孵化囊胚细胞总数与正常培养组相比差异不显著(P0.05)。41℃热休克2 h抑制了小鼠早期囊胚发育,而39℃热休克2 h对其发育力没有影响。     

热应激对小鼠囊胚中HSP72表达及对孵出率影响的研究

将体外培养的小鼠囊胚分别施以40℃和38℃热休克处理1h、2h和3h,然后在37℃条件下分别恢复3h、2h和1h后,利用Westernblot技术检测小鼠囊胚HSP72的表达,同时观察囊胚的热敏性,以明确热应激对小鼠囊胚中HSP72表达及对孵出率影响。结果显示,38℃及40℃热应激组均有HSP72的表达,38℃组2h达到最高水平,与对照组相比差异显著(P<0.05),然后表达量随热应激时间延长而降低;40℃组3h达到最高水平,与对照组相比差异不显著(P>0.05)。38℃及40℃热应激组囊胚孵出率均随着热应激时间的延长而降低。结果表明,轻度、短时间热应激既可使小鼠囊胚HSP72表达;热应激能够降低小鼠囊胚的孵出率。     

热应激对小鼠胚胎细胞HSP70表达和超微结构的影响

本研究旨在确定体外培养的小鼠胚胎细胞合成HSP70的时期,研究热应激对该阶段胚胎细胞超微结构的影响.将合子和体外发育至2-细胞、4-细胞、8～16-细胞及囊胚阶段的胚胎分别进行37、39和41℃的热应激处理,用免疫荧光细胞化学法检测胚胎细胞中HSP70的诱导表达;将体外培养至早期囊胚的小鼠胚胎分别施以39℃2h和41℃2h处理,分别在热应激后0和2h时收集胚胎,制作超薄切片,用电子显微镜观察胚胎细胞的超微结构变化.在各细胞期胚胎中,37℃组胚胎HSP70表达阴性(一);39℃组胚胎,从8～16-细胞开始呈现弱表达(+),囊胚呈阳性表达(++);41℃组的胚胎从4-细胞开始呈现弱阳性表达(+),8～16-细胞胚胎和囊胚呈阳性表达(++).39和41℃热应激处理的小鼠早期囊胚超微结构和对照组均发生明显的变化,但经37℃恢复培养2h后,39℃组胚胎的各细胞器超微结构恢复正常,而41℃组胚胎未能恢复.结果表明,小鼠胚胎从4-细胞期有HSP70的诱导合成,在囊胚期诱导合成最多;热应激使胚胎亚细胞结构出现退行性变化,轻度退行性变化是可逆的.     

二氢吡啶对热应激小鼠的影响

将小鼠随机分为常规饲料喂养组和掺有不同量二氢吡啶组,测量各组小鼠的胸腺指数、脾指数及各种血液指标。结果表明,服用二氢吡啶组的小鼠体重明显比不服用组大,饲喂200mg／kg时效果最明显;热应激后小鼠脾指数、胸腺指数有所下降．服用二氢吡啶后的热应激小鼠胸腺指数、脾指数高于对照组;热应激使小鼠的一些生理生化指标异常,二氢吡啶在一定程度上可缓解这些异常。     

HSP72在热应激小鼠囊胚中的表达及其作用

将体外培养的小鼠囊胚分别施以38℃温和热应激和40℃强烈热应激处理1、2和3 h,然后在37℃正常培养条件下分别恢复3、2和1 h,用体视显微镜观察囊胚孵出率以及经38℃和40℃诱导热应激后囊胚的孵出率,用Western-blot技术检测小鼠囊胚HSP72的表达。结果,38℃热应激处理2 h时,HSP72表达量达到最高水平,与对照组差异显著;40℃热应激处理3 h时,HSP72表达量达到最高水平,与对照组差异不显著;38℃热诱导2 h囊胚孵出率最高,与40℃强烈热应激处理2 h组差异显著。结果表明,热诱导组囊胚孵出率与38℃热应激组囊胚HSP72的表达量呈正相关。     

热应激对小鼠睾丸组织的影响

目的:观察不同温度不同时间水浴处理对小鼠睾丸组织形态结构的影响。方法:以成年雄性小鼠为实验动物,水浴处理热应激模型,水浴处理后第7d处死采样。结果表明:与对照组相比,40℃热处理组中,0.5h水浴处理小鼠睾丸系数不显著(P0.05),睾丸损伤不明显;1h水浴处理小鼠睾丸系数变化明显(0.01P0.05),睾丸损伤严重;1.5h水浴处理小鼠睾丸系数差异极显著(P0.01),睾丸损伤严重。41℃热处理组中,与对照组相比较,每组小鼠睾丸系数差异极显著(P0.01),睾丸损伤非常严重。结论:热应激的温度越高,时间越长,对小鼠睾丸的损伤情况越严重。     

运输应激对小鼠肺脏显微和超微结构及热休克蛋白表达的影响

为阐明运输应激对小鼠肺脏的病理损伤及热休克蛋白表达的影响,本实验运用HE染色、醋酸铀-枸橼酸铅染色、免疫组织化学染色和图像分析等方法,分析运输应激小鼠显微结构、超微结构以及HSP27、HSP70和HSP90表达的变化情况。结果表明:运输应激小鼠肺泡腔塌陷或发生融合,肺泡腔中可见脱落的细胞及胞质内容物,肺泡隔增厚,毛细血管明显扩张,炎性细胞浸润,肺泡Ⅰ型和Ⅱ型上皮细胞均发生明显的超微病理损伤,部分细支气管上皮脱落;与对照组相比,运输应激小鼠肺脏HSP27蛋白表达未见明显变化,HSP70蛋白表达量是对照组的10倍(P0.01),HSP90蛋白表达量下降。综上可知,运输应激对小鼠肺脏组织结构造成较大损伤,细胞病变较明显,HSP70和HSP90蛋白与肺脏应激损伤的发生发展存在一定的关联。     

热应激对小鼠相关神经行为学影响

本研究旨在观察34℃条件下不同时长的热刺激对小鼠神经行为学影响及在此条件下小鼠血液生理指标的具体变化。选择40只8周龄小鼠,平均分为4组,每组10只。分组后将小鼠分别置于34℃环境下进行时长0、2、4、6 h的热刺激。刺激结束后立刻对小鼠进行旷场和高架十字迷宫试验,观察并记录小鼠5 min内运动情况,并采取小鼠血液样本对其血液生理指标进行检测。结果显示：与对照组相比,小鼠热刺激2 h组探索行为显著增加,而热刺激4 h组及热刺激6 h组小鼠焦虑样行为显著增加,探索行为减少;小鼠热刺激2 h组肾上腺素（EPI）、皮质醇（CORT）水平都呈时间依赖性增加,并且具有显著性;热刺激2、4、6 h组去甲肾上腺素（NE）水平均极显著增加,并在热刺激4 h时达到峰值,6 h时略有回落趋势;小鼠热刺激4 h组促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）水平极显著增加,6 h时略有回落趋势。综上表明,34℃热刺激2 h时对小鼠自发运动和探索行为有促进作用,小鼠自发运动和探索行为随着刺激时长的增加,被显著抑制,焦虑样行为显著增加,表现出时间依赖性,并提示小鼠热刺激后情绪和行为异常可能由中枢神经系统进行调控。     

热应激对小鼠睾丸组织细胞的影响研究

选择40只健康雄性昆明小鼠,随机将其分为A、B、C、D四组,A组腹腔注射生理盐水,B组注射物为黄芩苷,C组注射生理盐水加热应激处理,D组注射黄芩苷加热应激处理。观察四组小鼠睾丸相关组织或细胞变化情况,生精细胞凋亡指数(AI),以及Bcl-2相关X蛋白基因(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2/Bax蛋白表达。结果显示,A、B、D三组中精母细胞、精子细胞、精子、睾丸支持细胞和间质细胞形态正常,排列紧密,结构完整;而C组小鼠睾丸PS排列疏松,GC核浓缩,呈月牙状,细胞膜皱缩,睾丸间质中出现空泡化。根据TUNEL检测细胞凋亡结果显示,A、B两组AI对比,P0.05;C、D两组AI明显高于A、B两组,而D组AI少于C组,P0.05。C组Bcl-2和Bcl-2/Bax与A组比较,P0.05;Bax与A组对比,P0.05;B、C两组Bax比较,P0.05;B组Bcl-2和Bcl-2/Bax与C组比较,P0.05;D组与A组对比,P0.05。由此结论,热应激可造成小鼠睾丸组织细胞的凋亡,添加黄芩苷后对于热应激造成的凋亡损伤略有缓解。     

甜菜碱对小鼠生长及热应激的影响

选择45只昆明小白鼠,随机分为3组,每组3个重复,每重复5只小鼠。对照组1为正常日粮组,对照组2在对照组1的日粮中减去蛋氨酸,试验组在对照组2的日粮基础上添加甜菜碱。生长试验结束后,在烈日下暴晒4h,造成热应激。结果表明:试验组在试验开始1周的体质量高于对照组1和对照组2,与对照组2差异显著;2周,试验组体质量显著高于2个对照组;3周,试验组体质量仍高于2个对照组,但无显著差异。试验组肝中粗脂肪显著低于2个对照组,同时蛋白高于对照组。血液生化指标结果显示,试验组血糖显著低于2个对照组,总蛋白显著高于对照组,尿素氮和白蛋白无差异。脏器指数除了心脏指数显著高于2个对照组外,其他均无差异。     

硒对镉中毒小鼠肝细胞线粒体超微结构影响的体视学研究

用电镜定性观察和体视学量定相结合的方法研究镉中毒小鼠肝细胞线粒体超微结构的变化及硒的保护作用。电镜定性观察发现,镉中毒小鼠肝细胞线粒体极度肿胀,嵴消失乃至空泡化。硒镉联合处理小鼠有也类似的变化,但程度较轻,体视学计量发现Ｃｄ处理小直细胞线粒体平均体积、体密度、平均外径面密度、平均截面积和平均截面周长显著高于硒镉联合处理１小鼠和正常小鼠,面数密度、比表面和数密度显著低于硒镉联合处理小鼠和对照小鼠;硒     

热应激对小鼠附睾内精子的形态学影响

用不同温度（42℃、37℃和33℃）,每天在固定时间对小鼠实施1h的热应激处理。在热应激持续到8d、13d、21d、35d时,颈椎脱臼处死小鼠,取附睾尾制备精子悬液并测定其密度,用改良巴氏染色法检测精子顶体完整率和畸形率。结果：42℃组热应激处理的小鼠附睾内精子密度和顶体完整率,随着热应激持续时间的延长而不断降低,畸形率则不断升高,且与对照组间有显著（P〈0．05）差异;37℃和33℃组热应激处理的小鼠附睾内精子密度、顶体完整率和畸形率,随着热应激持续时间的延长都不断的增加,但都显著（P〈0．05）低于或接近（P〉0．05）对照组的水平。     

热应激对小鼠心肌的影响及其机制研究

为探讨热应激时间对小鼠心肌损伤的影响及其具体作用机制,本试验通过不同的高温(41℃)时间(0、1、2、3 h)处理小鼠,通过酶联免疫、放射免疫、组织学方法以及Western Blot,检测小鼠血清生化指标、心肌组织病理变化以及内质网应激蛋白的表达。结果表明:随着热应激时间的延长,血液中的CK、CK-MB、LDH和COR都呈上升趋势,热应激组显著高于常温对照组,且应激组间差异显著(P<0.05);光镜和电镜发现热应激小鼠心肌纤维、肌细胞等都不同程度地受损,心肌细胞凋亡、线粒体空泡化、内质网肿胀等程度加剧。Western Blot结果表明,内质网应激蛋白BiP和CHOP随着热应激时间延长表达量逐渐升高。综上,内质网应激可能参与了热应激导致的小鼠心肌损伤。     

急性热应激对小鼠肺组织中热应激蛋白和细胞因子基因表达的影响

为研究小鼠在急性热应激条件下肺组织中几种热应激蛋白(heat shock proteins,HSPs)及一些细胞因子基因表达水平的变化情况,通过实时荧光定量PCR的方法检测小鼠急性热应激前后肺组织中HSP27、HSP60、HSP70、HSP90、HSP110及白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、β干扰素(IFN-β)及γ干扰素(IFN-γ)的mRNA水平变化情况。结果显示,所有检测的热应激蛋白和细胞因子在热应激后0 h至2h过程中均极显著升高(P0.01),到4 h时恢复到正常水平。此试验结果为揭示急性热应激提高机体的抗病能力提供有价值的资料。     

早期热应激对肉仔鸡后期生长发育的影响

旨在研究早期热应激对肉仔鸡后期生长发育及骨骼肌中相关信号通路基因表达的影响.本研究选取健康、体重相近的刚出壳AA肉仔鸡192只(公母各半),随机分成2组(每组4个重复,每个重复24只鸡),饲喂至3日龄时,分别给予36℃热应激处理24 h(热应激组)和正常温度(33℃)饲喂(对照组).42日龄时每个处理选取8只鸡采取血浆...     

热应激对小鼠附植前早期胚胎HSP70的诱导表达

选择超数排卵后怀孕昆明小鼠75只,以注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)后的胚胎发育阶段为标准,分别在合子、2细胞、4细胞、8~16细胞和囊胚期对孕鼠进行了37℃、39℃、41℃和43℃热应激4 h。热应激后取胚,用免疫荧光细胞化学法检验胚胎热休克蛋白70(HSP70)的诱导表达。结果表明,HSP70在4细胞以上胚胎内呈阳性表达,相对高温时其表达量增加,囊胚时最显著。可见,附植前早期胚胎HSP70的热诱导表达与细胞期和温度密切相关。