咯利普兰通过MAPK/ERK信号通路抑制中性粒细胞的黏附

【目的】研究磷酸二酯酶4(PDE4)特异性抑制剂咯利普兰抑制中性粒细胞黏附的有关分子机制,明确其抗炎的主要信号通路,为PDE4选择性中药抑制剂的药理研究提供参考。【方法】猪中性粒细胞的提取采用密度梯度离心法,中性粒细胞与猪内皮细胞的黏附采用虎红比色法,中性粒细胞黏附分LFA-1和Mac-1表达量的检测采用流式细胞技术,中性粒细胞p38MAPK、ERK等磷酸化活性检测采用western blot法。【结果】咯利普兰可显著抑制fMLP刺激的中性粒细胞和内皮细胞的黏附(P0.05),极显著抑制fMLP刺激的中性粒细胞LFA-1和Mac-1的表达(P0.01),阻断fMLP刺激的中性粒细胞ERK磷酸化活性(P0.01),而对p38MAPK磷酸化活性无显著影响。【结论】咯利普兰可抑制中性粒细胞和内皮细胞黏附,其机制与阻断中性粒细胞ERK磷酸化进而抑制LFA-1和Mac-1表达有关。     

咯利普兰对猪中性粒细胞表达Mac-1的作用及有关信号机制

【目的】阐明咯利普兰为代表的磷酸二酯酶4抑制剂的抗炎新机制。【方法】采用密度梯度离心法分离猪中性粒细胞,流式细胞术检测猪中性粒细胞表达巨噬细胞表面分子抗原-1(Macrophage surface molecular antigen-1,Mac-1);Real-time qPCR和Western blot技术检测猪中性粒细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、p65核转录因子(p65 NF-κB)mRNA表达和磷酸化活性。【结果】佛波酯(phorbol myristate acetate, PMA)可显著上调中性粒细胞表达Mac-1(P<0.01),咯利普兰对PMA上调的中性粒细胞表达Mac-1有一定抑制作用,其中,5μmol/L咯利普兰可极显著抑制中性粒细胞表达Mac-1(P<0.01);PMA可极显著上调中性粒细胞p38 MAPK、ERK和p65 NF-κB mRNA表达和磷酸化活性(P<0.01),5μmol/L咯利普兰对PMA升高的中性粒细胞p38 MAPK、p65 NF-κB mRNA表达有极显著抑制作用(P<0...     

LPS对猪中性粒细胞Mac-1表达的影响及相关信号机制

【目的】研究致炎因子LPS对猪中性粒细胞表达巨噬细胞表面分子抗原(Mac)-1的诱导作用及有关的信号机制,为LPS致炎机制及抗炎药物机理研究提供依据。【方法】采用密度梯度离心法分离猪中性粒细胞,以流式细胞术检测Mac-1表达,以实时荧光定量PCR检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、Janus激酶(JAK)、p65核转录因子(p65 NF-κB)mRNA相对表达量。【结果】1、10、100、1 000 ng/mL的LPS对猪中性粒细胞Mac-1表达表现出增加趋势,其中100、1 000 ng/mL的LPS明显促进Mac-1表达,差异极显著(P<0.01)。1、10、100、1 000 ng/mL的LPS可呈剂量依赖性促进猪中性粒细胞JAK mRNA表达(P<0.01);100 ng/mL LPS可显著促进p38 MAPK mRNA表达(P<0.05);10 ng/mL LPS可分别显著促进PI3K、p65 NF-κB mRNA表达(P<0.05)。【结论】LPS呈剂量依赖性诱导猪中性粒细胞Mac-1表达,其信号机制与...     

佛波酯对猪中性粒细胞巨噬细胞表面分子抗原-1的作用及有关信号机制研究

【目的】研究佛波酯诱导猪中性粒细胞黏附分子巨噬细胞表面分子抗原-1表达的作用及有关信号机制。【方法】采用密度梯度离心法分离纯化猪外周血中性粒细胞,以流式细胞术检测中性粒细胞巨噬细胞表面分子抗原-1表达,分别以实时荧光定量PCR、Western Blot法检测信号蛋白p38丝裂原活化蛋白激酶、胞外信号调控激酶的基因表达和磷酸化活性。【结果】20、30 nmol/L的佛波酯能极显著促进猪中性粒细胞巨噬细胞表面分子抗原-1的表达(P<0.01)。与对照相比,佛波酯在0.5、6 h可明显增加猪中性粒细胞p38丝裂原活化蛋白激酶的基因表达量(P<0.05,P<0.01);在0.5、3和6 h可极显著增加猪中性粒细胞胞外信号调控激酶的基因表达量(P<0.01)。与对照相比,佛波酯在1、5和30 min可极显著促进p38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化活性(P<0.01);在0.5、1、5和30 min可明显促进胞外信号调控激酶磷酸化活性(P<0.05,P<0.01)。【结论】佛波酯能诱导猪中性粒细胞黏附分子巨噬细胞表面分子抗原-1的表达,其机制至少与上调p38丝裂...     

肉仔鸡卫星细胞氧化应激时MAPK信号通路

 【目的】在地塞米松(DEX)诱导骨骼肌卫星细胞氧化应激的体外条件下,筛选丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号系统中起关键作用的信号通路。【方法】 将体外培养的肉仔鸡胸肌骨骼肌卫星细胞(SCs)分别进行处理：Ⅰ、对照组;Ⅱ、DEX;Ⅲ、p38 MAPK抑制剂;Ⅳ、DEX+p38 MAPK抑制剂;Ⅴ、JNK抑制剂;Ⅵ、DEX+JNK抑制剂;Ⅶ、ERK5抑制剂;Ⅷ、DEX+ERK5抑制剂;Ⅸ、ERK1/2抑制剂;Ⅹ、DEX+ERK 1/2抑制剂。除处理Ⅰ和处理Ⅱ外,其它处理首先用抑制剂预处理30 min,弃去培养基后,再按处理设置分别加入含DEX的培养基或者正常培养基继续处理24 h。处理结束后,分别测定细胞培养液中丙二醛(MDA)、活性氧自由基(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽硫转酶(GST)含量或活性;同时采用RT-PCR方法检测通路蛋白及SOD与GST基因表达量。【结果】 抑制剂单独处理组MDA和ROS的产生量显著低于DEX处理(P＜0.05);DEX+ERK5抑制剂处理与DEX+ERK 1/2抑制剂处理的MDA和ROS产生量显著高于ERK 5抑制剂处理和ERK1/2抑制剂处理(P＜0.05); DEX+p38 MAPK抑制剂处理与 DEX+JNK抑制剂处理组的MDA和ROS产生量与p38 MAPK处理和JNK处理的差异不显著(P＞0.05)。抑制剂单独处理组的SOD和GST活性比DEX处理高(P＜0.01);DEX+ERK5抑制剂处理与 DEX+ERK 1/2抑制剂处理的SOD和GST活性极显著低于ERK5抑制剂处理组和ERK1/2抑制剂处理组(P＜0.01),DEX+p38 MAPK抑制剂处理与DEX+JNK抑制剂处理的SOD和GST活性与p38 MAPK抑制剂处理和 JNK抑制剂处理的差异不显著(P＞0.05)。基因表达结果表明,DEX能够抑制GST和SOD基因的表达,抑制率达37%以上。与抑制ERK5和ERK1/2通路不同,抑制p38 MAPK和JNK通路后,DEX对GST和SOD基因的表达无明显抑制作用。【结论】 在DEX诱导的肉仔鸡胸肌骨骼肌SCs产生的氧化应激过程中,p38 MAPK和JNK通路起着关键作用。     

齐墩果酸抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应

通过CCK-8法检测齐墩果酸对巨噬细胞增殖的影响;采用Griess试剂检测细胞培养液中NO含量,通过Western Blot法分析iNOS蛋白表达和MAPK通路p38,ERK和JNK蛋白表达和磷酸化状态,研究齐墩果酸对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的影响,探讨齐墩果酸抗感染作用及机制。结果表明:齐墩果酸(100.0μmol·L~(-1))明显抑制巨噬细胞增殖(P0.05);12.5~100.0μmol·L~(-1)的齐墩果酸能够显著抑制脂多糖诱导巨噬细胞分泌NO(P0.01),并能显著抑制LPS诱导iNOS蛋白的表达;LPS作用后能够激活ERK通路,抑制p38和JNK通路磷酸化,齐墩果酸作用后,能显著抑制ERK磷酸化,促进JNK和p38蛋白的磷酸化。证明齐墩果酸能显著降低脂多糖诱导巨噬细胞分泌NO,通过抑制iNOS的表达和双向调控MAPK通路蛋白磷酸化达到抗感染作用。     

GnIH通过p38MAPK信号通路对猪卵巢颗粒细胞自噬与凋亡的影响

【目的】细胞自噬和凋亡存在着相互制约,p38MAPK信号通路作为细胞凋亡的主要调控通路之一,也对细胞自噬存在促进和抑制的双重作用。已有研究表明,促性腺激素抑制激素(gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH)对细胞自噬与凋亡均有影响,但作用机制尚不明确。故探究GnIH通过p38MAPK信号通路对猪卵巢颗粒细胞(pGCs)自噬与凋亡的影响及其机理,为解决母猪的产子率以及同期发情等问题提供参考。【方法】从猪卵巢中提取卵巢颗粒细胞,进行体外培养。1、探究GnIH对p38MAPK信号通路的最佳作用时间:按孵育GnIH时间梯度(0min、10 min、30 min、60 min、90 min)分组,用Western blot检测猪卵巢颗粒细胞p38与p-p38的蛋白表达量变化;2、验证GnIH对p38MAPK信号通路的影响:按(空白对照、GnIH、p38激活剂(U-46619)、U-46619+GnIH)分组,用Western blot检测p38与p-p38的蛋白表达量变化;3、探究不同浓度GnIH对自噬和凋亡的影响:按(空白对照、10-6 mol·L-1 GnIH、10-8 mol·L-1 GnIH、10-10 mol·L-1 GnIH、10-12 mol·L-1 GnIH)分组,用Western blot检测自噬与凋亡标志性蛋白的表达量变化;4、验证不同浓度GnIH通过p38信号通路对自噬和凋亡的影响:将细胞分成6组(空白对照、U-46619、U-46619+10-6 mol·L-1 GnIH、U-46619+10-8 mol·L-1 GnIH、U-46619+10-10 mol·L-1 GnIH、U-46619+10-12 mol·L-1 GnIH),用Western blot检测自噬与凋亡标志性蛋白的表达量变化。【结果】1. GnIH孵育10 min后,显著降低p38与p-p38的蛋白表达量(P0.05),提示,GnIH对p38MAPK信号通路的最佳作用时间为10 min;2. U-46619显著促进pGCs的p38磷酸化水平(P0.05),GnIH显著抑制pGCs的p38磷酸化水平(P0.05),提示,U-46619使p38MAPK信号通路活化,GnIH对p38MAPK信号通路的活化有抑制作用;3.当GnIH的浓度为10-6 mol·L-1时,pGCs的自噬和凋亡水平显著升高(P0.05),随着GnIH浓度的降低,pGCs的自噬水平逐渐升高(P0.05),pGCs的凋亡水平逐渐降低(P0.05),提示,高浓度GnIH可以促进自噬和凋亡,随着GnIH浓度的降低,自噬水平逐渐升高,而凋亡水平逐渐下降;4.加入U-46619后,GnIH使pGCs的自噬显著上调(P0.05),并且使pGCs的凋亡显著下调(P0.05),提示,不同浓度GnIH通过p38MAPK信号通路影响pGCs的自噬和凋亡。【结论】GnIH可能通过抑制p38MAPK信号通路的活化,上调pGCs的自噬,减少pGCs的凋亡。     

白芍制剂对中性粒细胞相关功能及磷酸二酯酶活性的影响

 【目的】以猪中性粒细胞为靶细胞,研究白芍制剂对其相关功能（呼吸爆发和弹性蛋白酶释放）及磷酸二酯酶活性的影响。【方法】中性粒细胞分离纯化后,以细胞色素C还原法检测中性粒细胞呼吸爆发,以弹性蛋白酶底物的减少反映弹性蛋白酶的释放量,以HPLC检测底物cAMP的变化反映磷酸二酯酶的活性等。【结果】白芍制剂呈剂量依赖性抑制中性粒细胞的呼吸爆发（P＜0.001）,3个不同浓度的抑制率分别为33.15%、45.96%和62.22%;对弹性蛋白酶的释放在低浓度时表现抑制作用（P＜0.05）,抑制率为23.22%,在高浓度时表现促进作用;对中性粒细胞磷酸二酯酶活性具有抑制作用,低、高浓度抑制率分别为13.24%和25.87%（P＜0.01）;HPLC指纹图谱分析表明白芍制剂主要存在5种成分。【结论】白芍制剂对猪中性粒细胞呼吸爆发具有明显的抑制作用,对弹性蛋白酶释放在低浓度有显著抑制作用,其作用机制可能与白芍制剂对磷酸二酯酶活性的抑制有关。     

p38MAPK信号通路选择性调节FSH对甾体生成 的诱导作用研究

利用乙烯雌酚(DES)处理23日龄SD大鼠,分离卵巢颗粒细胞(GC)进行无血清培养。结果表明,FSH(50ng/m1)处理GC,可迅速激活有丝分裂原蛋白激酶(p38MAPK),FSH处理5min便可观察到磷酸化的p38MAPK;FSH处理30min,磷酸化的p38MAPK水平达到最高;向培养液中加入H89(蛋白激酶A抑制剂,10μM),则显著抑制了FSH对p38MAPK的激活作用,提示这种激活作用依赖于蛋白激酶A(PKA)。用SB203580(p38MAPK抑制剂,20μM)抑制p38MAPK激活,则进一步提高了FSH对孕酮和甾体生成快速调节蛋白(StAR)的诱导作用,同时降低了FSH对雌激素生成的促进作用(p<0.01)。RT-PCR结果显示:抑制p38MAPK活性后,FSH对StARmRNA刺激作用明显增强,但对细胞色素P450芳香化酶(P450arom)mRNA的诱导作用却减弱了(p<0.05)。激光共聚焦和蛋白印迹结果显示:在GC中,StAR蛋白主要分布在线粒体中;与对照组相比,FSH显著提高了StAR的荧光强度和蛋白水平;抑制p38MAPK活性则增强了FSH对StAR蛋白表达的诱导作用。     

α-酮戊二酸对脂多糖刺激断奶仔猪肌肉能量代谢的影响

 【目的】研究α-酮戊二酸(AKG)对经脂多糖(LPS)多次刺激后断奶仔猪肌肉能量代谢的影响及其分子机制。【方法】采用2×2因子试验设计,LPS刺激(有、无)和AKG添加量(0、1%)为2个主效应,共4个处理组。选取24头(6.79±0.32)kg的断奶仔猪(杜洛克×长白×大白),随机分配到4个处理组,每个处理设6个重复(猪)。LPS刺激组仔猪在试验的第10、13和15 天腹腔注射100 μg?kg-1 BW LPS,无LPS刺激组注射等量的生理盐水。第16 天仔猪麻醉后进行屠宰,取腓肠肌样品,反相高效液相色谱法检测腓肠肌细胞内腺苷酸水平,Western blotting检测腓肠肌AMP激活蛋白激酶(AMPK)和乙酰CoA羧化酶(ACC)表达及其磷酸化。【结果】()日粮添加1%AKG和LPS刺激对仔猪腓肠肌AMP含量和AMP/ATP的影响存在交互作用(P＜0.05)。仔猪日粮中添加1% AKG能显著提高腓肠肌ADP水平(P＜0.05),缓解了LPS刺激引起的AMP水平和AMP/ATP升高、ADP和能荷(EC)降低(P＜0.05)。(2)LPS刺激和日粮中添加AKG对AMPK表达量和AMPK磷酸化水平(pAMPK/AMPK)均无影响。(3)日粮中添加1% AKG抑制了ACC的磷酸化;LPS刺激使ACC表达量升高(P＜0.05),并促进ACC磷酸化(P＜0.05)。【结论】LPS刺激增加肌肉能量损耗,日粮中添加1% AKG有利于肌肉维持正常的能量代谢;日粮添加AKG通过调控ACC的活性与表达影响肌肉能量代谢;AKG可能通过ACC信号影响肌肉能量代谢,进而改善LPS刺激下机体能量代谢状态。     

金雀异黄酮对冻融猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及获能相关基因表达的影响

【目的】探究金雀异黄酮对冻融猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及获能相关基因的影响,为丰富猪精子冷冻保存技术的理论基础及后续开展蛋白酪氨酸激酶抑制剂对冻融猪精子获能影响研究提供参考依据。【方法】采集猪精液后,设精液冷冻对照组(CK组)、100.0μmol/L金雀异黄酮冷冻处理组(G组)和鲜精组(F组),使用Western blotting、SDS-PAGE、免疫荧光、ELISA和实时荧光定量PCR等检测各组精子的蛋白酪氨酸磷酸化水平、精子不同部位蛋白酪氨酸磷酸化位点变化情况、蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶G(PKG)活性及黏附蛋白家族基因(AQN1、AQN3、AWN、PSP-Ⅰ和PSP-Ⅱ)和精子运动抑制因子(SPMI)基因mRNA的表达水平,分析金雀异黄酮对冻融猪精子的保护机制。【结果】与CK组相比,G组的32和69 kD蛋白酪氨酸磷酸化水平、顶体+顶体后区磷酸化位点、PKA活性显著降低(P0.05,下同);AWN基因相对表达量极显著升高(P0.01,下同),PSP-Ⅰ基因相对表达量显著降低,PSP-Ⅱ和SPMI基因相对表达量极显著降低。F组中未检测到32和69 kD蛋白酪氨酸磷酸化,而37和58 kD蛋白酪氨酸磷酸化水平和PKA活性显著降低;AQN1、AQN3和AWN基因相对表达量极显著升高,PSP-Ⅱ基因相对表达量显著降低,SPMI基因相对表达量极显著降低。【结论】金雀异黄酮既能降低冻融猪精子顶体+顶体后区蛋白酪氨酸磷酸化水平,且PKA活性降低可能与p32和p69蛋白表达量降低有关,又可有效提高冻融猪精子中AWN基因及有效降低PSP-Ⅰ、PSP-Ⅱ和SPMI基因的表达量,在一定程度上提高冻融猪精子质量。     

脂肪酸对小鼠前体脂肪细胞增殖分化及OLR1基因转录表达的作用

【目的】研究短链和长链饱和脂肪酸,对小鼠前体脂肪细胞增殖分化及脂代谢新因子氧化型低密度脂蛋白受体1(OLR1)转录表达的影响。【方法】分离培养小鼠前体脂肪细胞,用适宜浓度乙酸钠、硬脂酸钠和p38MAPK通路抑制剂处理,通过细胞计数检测处理24和48 h时相关基因mRNA的表达量。【结果】乙酸钠处理组小鼠脂肪细胞数量随处理时间延长显著下降(P<0.05),硬脂酸钠处理组对小鼠细胞数量无显著影响(P>0.05);乙酸钠和硬脂酸钠均显著上调PPARγ2、C/EBPα和OLR1 mRNA的表达(P<0.05);p38MAPK抑制剂能显著抑制PPARγ2和OLR1 mRNA的表达(P<0.05),但对C/EBPαmRNA表达无显著影响。【结论】乙酸钠可抑制前体脂肪细胞的增殖,但乙酸钠和硬脂酸钠均能促进前体脂肪细胞的分化;OLR1基因在前体脂肪细胞分化过程中通过p38MAPK通路发挥作用,且脂肪酸对前体脂肪细胞分化及OLR1转录表达的影响与p38MAPK通路密切相关。     

猪中性粒细胞磷酸二酯酶基因表达及活性研究

 【目的】通过对猪中性粒细胞磷酸二酯酶（PDE）基因表达、活性及特异性抑制剂实验检测，研究其存在的主要PDE亚型及在体外的活性，为探讨PDE在中性粒细胞的分布、活性变化及对cAMP、cGMP调节与中性粒细胞功能关系提供依据。【方法】采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测PDE基因在猪中性粒细胞的表达，以高效液相色谱（HPLC）检测环核苷酸在PDE反应前后的含量变化，计算PDE活性。【结果】在检测的18个PDE亚型中，PDE1B、2A、3A、3B、4A、4B、4C、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A、11A 共15个PDE mRNA在猪中性粒细胞表达，特异性抑制剂实验表明PDE4、PDE5分别为水解cAMP、cGMP的主要PDE亚型；cAMP/cGMP-PDE在10～40 μl范围内，与其活性存在良好的线性关系（r＝0.9929/0.9992）。【结论】猪中性粒细胞至少存在15个PDE亚型，其中PDE4、PDE5为主要存在的2个亚型，PDE样品量在一定范围内与其活性存在良好的线性关系，可作为筛选PDE型中性粒细胞功能调节剂的方法。     

饥饿诱导p53缺失猪成纤维细胞自噬促进凋亡

【目的】探究p53基因对饥饿诱导猪成纤维细胞(PFCs)形态、增殖、自噬及凋亡的影响,为进一步研究p53基因与肿瘤发生发展的分子机制提供理论依据。【方法】用EBSS、Baf A1和EBSS+Baf A1分别处理p53wt和p53-/-2株PFCs 2 h后,观察细胞形态变化并检测细胞的增殖、凋亡以及ATG9A和Bcl-2蛋白的表达情况。【结果】与对照组相比,EBSS和EBSS+Baf A1处理下p53wt与p53-/-的PFCs均发生皱缩和长出丝状伪足;在p53-/-PFCs中,其细胞的增殖率明显下降,ATG9A蛋白的表达水平显著或极显著上调(P0.05或P0.01),Bcl-2蛋白的表达水平无显著变化(P0.05);在p53wt PFCs中,Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05);EBSS处理下,p53-/-PFCs的凋亡比率显著升高(P0.05)。与p53wt PFCs相比,p53-/-PFCs的形态变化率极显著下降(P0.01),其细胞的增殖率显著升高(P0.05),ATG9A蛋白表达水平显著或极显著升高(P0.05或P0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著或极显著下降(P0.05或P0.01)。【结论】饥饿诱导p53缺失猪成纤维细胞自噬促进了凋亡的发生,这为进一步研究p53基因与自噬、凋亡及肿瘤发生的分子机制提供了重要的理论依据。     

苦参碱对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡及抗氧化能力的影响

【目的】探究苦参碱对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)增殖、凋亡及抗氧化能力的影响。【方法】利用含0(A组),25(B组),50(C组),75(D组)和100μg/mL(E组)苦参碱的培养基培养奶牛乳腺上皮细胞。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测BMECs活性,采用流式细胞仪(AnnexinV/PI双染法)检测苦参碱对BMECs凋亡的影响,并检测苦参碱对BMECs抗氧化酶活性及丙二醛(MDA)含量的影响,采用real-time PCR对BMECs中Caspase-3、p53、STAT1和SOCS3基因的相对表达量进行检测。【结果】用药5d时,低质量浓度(25和50μg/mL)苦参碱对BMECs增殖具有促进作用,高质量浓度(75和100μg/mL)苦参碱对细胞增殖具有抑制作用;B~E组BMECs的凋亡率均极显著高于A组(P0.01);B~E组BMECs培养上清液中NO和乳酸脱氢酶(LDH)水平明显高于A组。B~E组BMECs的过氧化氢酶(CAT)活性均比A组高,其中C组极显著高于A组(P0.01);B~E组的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性均极显著高于A组(P0.01),E组的超氧化物歧化酶(SOD)水平极显著高于A组(P0.01),各组MDA含量无显著性差异。与A组相比,苦参碱上调了B~E组BMECs中Caspase-3、p53、STAT1和SOCS3基因的相对表达量。【结论】低质量浓度苦参碱能够促进BMECs增殖,高质量浓度苦参碱则会抑制BMECs增殖;不同质量浓度苦参碱均可提高BMECs的抗氧化能力,其中50μg/mL苦参碱提高BMECs抗氧化能力的效果最明显。     

GnIH通过p38MAPK信号通路对猪卵巢颗粒细胞自噬与凋亡的影响

【目的】细胞自噬和凋亡存在着相互制约,p38MAPK信号通路作为细胞凋亡的主要调控通路之一,也对细胞自噬存在促进和抑制的双重作用。已有研究表明,促性腺激素抑制激素(gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH)对细胞自噬与凋亡均有影响,但作用机制尚不明确。故探究GnIH通过p38MAPK信号通路对猪卵巢颗粒细胞(pGCs)自噬与凋亡的影响及其机理,为解决母猪的产子率以及同期发情等问题提供参考。【方法】从猪卵巢中提取卵巢颗粒细胞,进行体外培养。1、探究GnIH对p38MAPK信号通路的最佳作用时间:按孵育GnIH时间梯度(0min、10 min、30 min、60 min、90 min)分组,用Western blot检测猪卵巢颗粒细胞p38与p-p38的蛋白表达量变化;2、验证GnIH对p38MAPK信号通路的影响:按(空白对照、GnIH、p38激活剂(U-46619)、U-46619+GnIH)分组,用Western blot检测p38与p-p38的蛋白表达量变化;3、探究不同浓度GnIH对自噬和凋亡的影响:按(空白对照、10-6 mol·L-1 GnIH...     

硒代蛋氨酸对肥育猪血浆和组织硒含量及抗氧化能力的影响

【目的】研究探讨硒代蛋氨酸对肥育猪血浆和组织硒含量及抗氧化能力的影响。【方法】选用64头体重约60kg的杜×长×大三元杂交肥育猪,随机分为4组,每组4个重复。饲粮硒添加水平分别为0(对照组)、0.15mg·kg-1(硒代蛋氨酸)、0.30mg·kg-1(硒代蛋氨酸)、0.30mg·kg-1(亚硒酸钠)。饲养至95kg左右结束试验。【结果】(1)添加硒组血浆、肝脏和背最长肌硒含量极显著高于对照组(P0.01),高水平硒代蛋氨酸硒组显著高于其它两个添加硒组(P0.05)。(2)饲粮添加硒代蛋氨酸提高了肥育猪血浆GSH-Px、CAT活性和T-AOC,降低了MDA含量(P0.05)。同时,硒代蛋氨酸组SOD活性和低水平硒代蛋氨酸组CAT活性显著高于亚硒酸钠组。硒代蛋氨酸或亚硒酸钠提高了肥育猪背最长肌宰后45minGSH-Px活性,降低羰基蛋白质含量(P0.05)。硒代蛋氨酸可降低宰后各时间点背最长肌MDA含量,宰后45min和72h也低于亚硒酸钠组(P0.05)。(3)硒处理组背最长肌GSH-Px基因相对表达量显著高于对照组(P0.05),低水平硒代蛋氨酸硒组SelW基因相对表达量显著高于对照组和高水平亚硒酸钠硒组(P0.05)。【结论】硒代蛋氨酸在血浆和组织中硒沉积率较高,抗氧化作用较强。     

猪Nramp 1基因多态性与免疫功能的相关性

【目的】探讨Nramp1基因第6内含子多态在大白猪和松辽黑猪（是由杜洛克、长白猪和民猪合成）中的分布及其与猪免疫抗病的关系。【方法】采用PCR-RFLP法对165头大白猪和109头松辽黑猪Nramp 1基因第6内含子多态性与免疫功能（中性粒细胞还原力和单核细胞细胞毒百分率）的相关性进行了研究。【结果】两个品种在该位点均存在多态性,品种间、合并基因型间免疫功能差异不大,但同一品种内不同基因型间差异显著;大白猪BB基因型个体的单核细胞细胞毒百分率显著高于AB基因型个体（P＜0.05）,BB基因型个体的中性粒细胞NBT还原力值极显著高于AB基因型个体（P＜0.01）,而在松辽黑猪中则是AB基因型个体的中性粒细胞NBT还原力值显著高于BB基因型个体（P＜0.05）;从断奶到出栏的死亡率分析显示大白猪BB基因型个体死亡率明显低于AB基因型个体,松辽黑猪则是AB基因型个体的死亡率明显低于BB基因型个体。【结论】品种内不同Nramp1基因型与免疫功能间存在着显著相关,Nramp1基因可作为抗病力性状的一个主要候选基因。     

免加铁源饲料添加剂饲粮对育肥猪的饲用效果

【目的】探讨免加铁源饲料添加剂饲粮在育肥猪中的应用效果。【方法】2012-09-28-11-12,选取健康、体质量约为69kg的杜×长×大育肥猪32头,将其分为对照组和试验组,每组16头猪,用加有铁源饲料添加剂的常规饲粮饲喂对照组,用免加铁源饲料添加剂的基础饲粮饲喂试验组,分析2组猪生产性能、饲料利用和血浆生化指标的变化。【结果】与对照组相比,试验组猪平均日增质量和对饲料转化率有提高的趋势;对粗蛋白、无氮浸出物、粗纤维的消化率显著提高(P0.05);血浆铁质量浓度显著减少(P0.05),但血红蛋白质量浓度却极显著提高(P0.01);血浆谷丙转氨酶活性显著(P0.05)提高;血浆总蛋白、甘油三酯和胆固醇含量显著增加(P0.05);其他血浆生化指标差异不显著。【结论】育肥猪基础饲粮无需加铁源饲料添加剂。