天师栗叶片DNA提取方法的建立

提取高质量的基因组DNA是开展分子生物学研究的重要前提之一。天师栗由于叶片含有较多的多糖、多酚类物质,常常导致DNA 的提取质量不高,严重影响了后续的分子生物学操作。本研究以树龄分别为600年、50年和4年的天师栗植株的成熟叶片为材料,建立了适合于天师栗叶片DNA 的提取方法(M1),并将其与3种常见植物DNA提取方法(M2～M4)进行了比较。结果表明:M1提取DNA的浓度范围介于207.19~488.98 ng·μL -1之间,平均值为308.42 ng·μL -1;纯度A260/A280比值介于1.90~1.98,平均值为1.93;A260/A230比值介于1.72~1.95,平均值为1.86;DNA电泳条带清晰,亮度适中,点样孔干净无污染;ISSR-PCR能扩增出条带清晰、稳定性好、多态性高的PCR产物。M1提取出的DNA在浓度、纯度、DNA条带、ISSR-PCR扩增产物方面均明显优于其它3种方法(M2～M4),适合用于天师栗叶片DNA 的提取。     

金柑叶片和果实总DNA提取方法比较

为了研究不同提取方法对金柑总DNA提取质量的影响,以融安金柑等3个金柑品种的叶片和果实为材料,采用SDS提取法、CTAB提取法、试剂盒法提取金柑总DNA,并对所提取DNA的总浓度、A_(260/280)、A_(260/230)、凝胶电泳结果、SCo T扩增产物进行比较分析。结果表明:CTAB提取法和试剂盒提取法能较好地去除金柑叶片和果实中的蛋白质、RNA、多酚、多糖、单宁、色素等大分子物质以及盐类等小分子杂质。提取的总DNA浓度最高达178 ng/μL,A_(260/280)在1.82~1.94之间,A_(260/230)在1.89~2.04之间。SDS提取法、CTAB提取法和试剂盒提取法所提取的金柑叶片和果实总DNA的扩增效果图谱清晰,多态性高。3种提取方法中,CTAB提取法所提取总DNA浓度较高,纯度最好,可用于后续相关研究。     

芒果总DNA提取方法比较分析

为了研究不同提取方法对芒果总DNA提取质量的影响,以‘紫花芒’等11个芒果品种的叶片为材料,采用SDS法、CTAB法、改良CTAB法提取芒果叶片总DNA,并对提取的总DNA浓度、OD260/280、OD260/230、琼脂糖电泳结果、ISSR扩增产物进行了比较分析。结果表明,改良CTAB法能较好地去除芒果叶片中的多酚、多糖、单宁和色素等杂质。提取的总DNA浓度高达387 ng/μL,OD260/280在1.81~1.87之间,OD260/230在2.01~2.09之间。SDS法、CTAB法提取总DNA的ISSR扩增产物条带少,改良CTAB法提取的总DNA的扩增效果图谱清晰,多态性高。3种提取方法的结果比较而言,以改良CTAB法提取总DNA的效果最好,可用于后续实验的研究。     

红锥总DNA提取技术研究

利用CTAB方法提取红锥叶片的DNA.结果表明,红锥DNA的A260/A280值在1.8以上,得到DNA完全能满足ISSR分析.     

3种方法提取菠萝蜜叶片和种子总RNA的比较

为了筛选最适的菠萝蜜总RNA提取方法,采用Trizol提取法、Tris-硼酸提取法和试剂盒提取法提取菠萝蜜叶片和种子总RNA,通过紫外分光光度计检测、琼脂糖凝胶电泳、RT-PCR检测以及Agilent2100检测,对提取结果进行比较分析。结果表明:采用这3种方法均能从菠萝蜜叶片和种子中提取到总RNA,Tris-硼酸提取法较其他2种方法所提取的总RNA产率高,但杂质较多;采用Tris-硼酸提取法能提取完整性较好的总RNA,28S、18S和5S清晰可见,但提取质量较试剂盒提取法差;试剂盒提取法省时省力,有明显的28S和18S条带,A260/A280分布在1.92~1.98,A260/A230分布在2.04~2.09,叶片总RNA产率42.3ng/μL,种子总RNA产率15.6ng/μL。RT-PCR检测结果表明在约200bp处存在清晰整洁的电泳条带,Agilent2100检测结果显示杂峰极少,28S峰积分面积约是18S峰积分面积的2倍。经综合评定认为,试剂盒提取法是适合菠萝蜜叶片和种子总RNA提取的方法。     

高质量丝栗栲基因组DNA的提取方法

为了促进丝栗栲分子生物学的研究,采用尿素法、柠檬酸钠法、改良CTAB法和SDS法4种方法提取丝栗栲叶片基因组DNA,并对提取效果进行了比较和分析。结果表明,改良CTAB法较适合丝栗栲基因组DNA提取,其提取的DNA产率高,凝胶检测条带整齐清晰,杂质少、无明显降解,OD260/OD280比值在1.8左右;而尿素法难以提取基因组DNA,SDS法提取的DNA得率较低,柠檬酸钠法有蛋白质、多糖等杂质污染均不太适用丝栗栲基因组DNA提取。采用改良CTAB法提取得到丝栗栲幼叶、老叶、嫩芽和幼茎基因组DNA,产率分别为177.3、167.1、242.0和156.7μg/g。酶切分析也证明,改良CTAB法提取的不同组织DNA适用于进行后续分子生物学研究。     

芒果属植物叶绿体DNA提取方法的研究

为了探究不同提取方法对芒果属植物叶绿体DNA提取质量的影响,以芒果和扁桃的成熟叶片为材料,比较植物叶绿体DNAout试剂盒法和高盐-低p H法分离叶绿体及提取叶绿体DNA效果。结果表明:叶绿体DNAout试剂盒法能够较好地去除蛋白质、酚类、多糖等代谢物质,OD260/OD230大于2.000,OD260/OD280在1.800~1.900之间。高盐-低p H法提取叶绿体DNA产率高达75.8 ng/μL,远大于叶绿体DNAout试剂盒法提取叶绿体DNA最高产率42.8 ng/μL,2种方法所得模板电泳图和SSR标记图谱谱带完整性皆好。显微镜下观察叶绿体,2种方法都可以得到杂质少、背景清晰的叶绿体显微成像效果,但高盐-低p H法提取的叶绿体细胞器密度更高。2种方法获得的叶绿体DNA均可满足后续研究工作的需要。     

一种适合AFLP分析的油茶DNA提取方法

以油茶的成熟叶片为材料提取DNA,40个样品用改良的提取纯化方法成功提取出适用于AFLP分析的高质量DNA,OD260/OD280在1.7-2.0之间,可以用于AFLP反应。该方法打破了仅能用幼嫩叶片作为提取材料的限制,具有更广泛的适用性和重要的实用性。     

华南五针松成熟针叶基因组DNA的提取方法

在传统CTAB方法的基础上进行改良,建立了适用于华南五针松成熟针叶DNA提取的CTAB法,该方法具有稳定、操作简单、可靠等特点。使用该方法对不同地理分布的华南五针松成熟针叶进行基因组DNA的提取,经紫外分光光度计检测其A260/A280在1.60～1.78之间,OD260/OD230比值介于2.0～2.3之间,无降解现象,RNA去除干净。经ISSR-PCR分析,条带清晰,完全能够达到分子标记的操作要求。     

大叶栎总DNA两种提取方法的比较

对大叶栎的总DNA两种提取方法进行对比试验,从外观、浓度、A260/A280、A260/A230、电泳检查和ISSR扩增对所提取到的DNA进行对比,结果显示用改良CTAB法提取的DNA在各方面都达到ISSR扩增的要求,是大叶栎总DNA提取的较好方法。     

乌桕基因组DNA提取方法研究

以改良CTAB法和SDS法提取乌桕基因组DNA,对提取条件进行了正交试验,优化出乌桕基因组DNA提取的适宜条件,采用紫外分光光度检测、琼脂糖凝胶电泳分析及限制性内切酶进行了检测。结果表明:改良CTAB法的A1B2C2D2组合提取的基因组DNA纯度高,无拖尾现象,OD260/280值在1.8～2.0,OD260/230在2.0。     

从白刺老干中提取高纯度DNA的方法

采用CTAB法、SDS法和匀浆CTAB法对白刺越冬老干进行基因组DNA提取,通过琼脂糖凝胶电泳及分光光度计对DNA纯度进行检测,结果表明,用常规的CTAB法和SDS法提取DNA纯度低,匀浆CTAB法得到高纯度的DNA,其OD260/OD280值为1.873～1.923。     

小佛肚竹和螺节竹总RNA的提取

首次提出了一种适用于小佛肚竹(Bambusa ventricosa)和螺节竹(Pleioblastus gramineus)等竹类植物总RNA提取方法.用该方法提取叶片和笋尖的总RNA具有正常的光谱吸收,OD260/OD280比值为1.96～2.0,OD260/OD230比值为2.96～4.11;琼脂糖电泳后,28 SRNA的亮度基本为18 SRNA的亮度的2倍;这说明提取的RNA很完整,未降解,质量高.同时该方法操作简便、无DNA污染,且产率高;提取的RNA可用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA文库的构建等.     

菠萝叶片总RNA提取方法的比较

为了探究不同提取方法对菠萝叶片组织总RNA提取质量的影响,以‘台农16号’菠萝品种的叶片为材料,采用改良Tirs-硼酸法、改良SDS法、试剂盒法提取菠萝叶片组织总RNA,并对提取的总RNA浓度、OD260/OD230、OD260/OD280、琼脂糖电泳结果进行了比较分析。结果表明:改良Tris-硼酸法和试剂盒法能较好地去除菠萝叶片组织的多糖、皂苷元、蛋白质以及纤维等次生代谢物质,OD260/OD230大于2.000,OD260/OD280在1.900~2.100之间。改良SDS法提取总RNA产率最高,达到290.9μg/m L。试剂盒法提取总RNA产率为30.1μg/m L,远小于其它2种提取方法所得总RNA产率。改良Tris-硼酸法所得电泳图谱条带完整度最好。比较分析3种提取总RNA方法的结果,以改良Tris-硼酸法提取总RNA的效果较理想,可满足后续研究工作的需要。     

金柑果肉组织总RNA提取方法比较

为给高通量测序等对RNA质量要求较高的后续试验提供基础,以‘桂金柑一号’等5个金柑品种的果实为材料,采用异硫酸胍提取法、CTAB提取法、SDS提取法、试剂盒提取法提取金柑果实总RNA,并对所提取的总RNA浓度、A260/A280、A260/A230、凝胶电泳结果、RT-PCR扩增产物等指标进行比较分析。结果表明:CTAB提取法、SDS提取法和试剂盒提取法能较好地去除金柑果实中的蛋白质、金柑甙、柠檬萜、DNA、多酚、多糖、单宁、色素等大分子物质以及盐类等小分子杂质。采用异硫酸胍提取法所提取的总RNA浓度最高,达到95.9μg/g,其A260/A280在1.69～1.73之间,A260/A230 2.14;其它RNA提取方法所提取的总RNA浓度最高达到76.9μg/g,其A260/A280分布在1.88～1.97之间,A260/A230分布在2.00～2.09之间,符合高质量RNA的要求范围。除了异硫酸胍提取法所提取的RNA琼脂糖电泳结果未见清晰的5S条带,其余方法所提取的RNA经琼脂糖电泳均可以观察到清晰的28S、18S、5S条带。但采用异硫酸胍提取法、CTAB提取法、SDS提取法和试剂盒提取法所提取的金柑果实总RNA进行反转录均可以得到清晰的扩增产物。在4种提取方法中,采用CTAB提取法所提取金柑果实总RNA浓度较高,纯度也较理想,琼脂糖电泳和RT-PCR效果好,是进行后续相关研究的较佳选择。     

两种方法提取凯特杏DNA的研究

采用CTAB法和SDS法，分别从杏的幼叶、嫩芽中提取DNA，通过计算产率，测定OD260和OD280的比值认为，CTAB比SDS法提取的DNA数量和纯度都高，而且两种方法都表明幼嫩材料中提取的DNA数量比成熟叶片高出2倍之多，纯度也较高。     

一种从榛子叶芽提取DNA的方法

以榛子叶芽为试材,用略有改进的CTAB法提取基因组RDNA。提取的DNA纯度和完整性都较好,电泳条带清晰,DNA无降解,OD260／OD280。值介于1．8-1．9,分子量接近23Kb,与叶片提取的DNA相比,RAPD扩增条带一致。该方法可以直接用于榛子RAPD分析中的DNA提取。     

樟树总DNA提取技术的研究

比较了常规的CTAB法与改进的CTAB法对樟树总DNA提取的结果。在常规的CTAB法基础上,采取先破碎细胞收集细胞核,将存在于细胞质中的大量影响DNA提取质量的多酚等次生代谢物除去后,再加核裂解液释放DNA,经分离纯化,提得的DNA通过A260/A280比值的测定及电泳,限制性内切酶消化,PCR扩增,结果表明,用改进的CTAB法提取的DNA纯度和完整性均优于常规的CTAB法。     

不同化学类型樟树叶片总RNA提取方法比较

采用SDS/酸酚法、Trizol试剂法、常规CTAB法及改良的CTAB法,分别提取5种化学类型樟树叶片总RNA,并对提取效果进行了比较分析。结果表明:Trizol法难以提取樟树叶片总RNA,得率很低;SDS/酸酚法和常规CTAB法得到的RNA存在DNA污染,富含蛋白、多糖、多酚等杂质;这3种方法均不适于富含多糖多酚类物质的樟树叶片总RNA的提取。改良的CTAB法能够提取得到樟树5种化学类型叶片总RNA,且在操作过程中,异樟比油樟和脑樟更易提取。此法能有效去除多糖和蛋白,提取得到的RNA 28S和18S rRNA条带清晰,OD260/OD280值为2.0左右,平均产率分别为115.8μg/g FW。经RT-PCR检测,所得总RNA质量高、完整性好、成功率高,可以满足下一步实验的要求,可作为樟树叶片总RNA提取的首选方法。     

黑榆不同无性系苗期表型性状及光合特征的差异性比较

为了解黑榆不同无性系的遗传变异情况,以河北省深州市栽培的15个黑榆无性系为材料,对黑榆不同无性系的生长、叶片形态和光合生理指标进行对比分析,结果表明:15个黑榆无性系间苗期生长性状及光合生理等性状指标差异显著,在15个黑榆无性系中,D7的地径最大,为2.33cm;B19平均苗高最大,为2.57m;叶长、叶宽、叶面积在不同无性系间存在显著差异,单叶面积最大相差4.1倍,不同无性系间宽长比在0.58~1.21之间变化,说明黑榆不同无性系间在叶片形态上存在着广泛的遗传变异,而且差异显著。无性系B18、D9的净光合速率最高,分别为23.54μmol/(m2·s)和23.82μmol/(m2·s);无性系D2蒸腾速率最高,为11.18mmol/(m2·s),无性系D4的蒸腾速率最低,为6.71mmol/(m2·s)。结合生长性状分析不同无性系的净光合速率,发现具有较高净光合速率的无性系,并不具有较大生长量,蒸腾速率反而和较大生长量存在显著的负相关。