茶树总蛋白质提取方法及双向电泳体系的建立

为探索适用于茶树叶片蛋白质组学研究的双向电泳技术体系(2-DE),比较三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法和改良酚抽法2种不同总蛋白质提取方法、不同蛋白上样量对2-DE的影响。结果表明:改良酚抽法更适合茶树总蛋白质的提取;采用1.5 mg的蛋白质上样量,最终可获得蛋白质点较多、背景清晰、分辨率较高的双向电泳图谱,为进一步深入开展茶树蛋白质组学的研究奠定了基础。     

水稻蛋白质的双向电泳分析技术

 在O'Farre11(1975)和Anderson(1978)等的基础上对双向电泳方法进行改进得到了一种适合于分析水稻种子胚、黄化芽、绿色幼苗及成熟叶片等不同组织蛋白质的双向电电泳方法。用这一方法对15个水稻品种的种子胚、黄化芽、二叶期绿色幼苗及雌雄蕊形成期成熟叶片的蛋白质进行双向电泳分离，经考马斯亮蓝R250染色后，均获得了清晰而稳定的图谱。以200 μg左右的蛋白质进行电泳，从上述组织可分辩出的蛋白质(多肽)点分别选捌550、500和350个。由此建议在分子水平上研究水稻等禾谷类作物的遗传学、发育生理学以及品种资源鉴定时采用本方祛。     

大豆叶片蛋白质双向电泳技术的改良

以大豆叶片为材料,比较分析了3种蛋白质的提取方法,讨论了等电聚焦时间和染色方法等关键因素对双向电泳的影响,同时选择不同的IPG胶条,设定了第1向等电聚焦和第2向SDS-PAGE电泳的电泳程序及参数.结果表明:采用TCA-丙酮沉淀法提取蛋白质,选择pH 4 ～7( 17 cm) IPG胶条,适当延长和改变等电聚焦的第2步...     

茶树雌蕊总蛋白质双向电泳分离体系的建立

为建立一套适合茶树雌蕊总蛋白质分离的双向电泳体系,对茶树雌蕊总蛋白的提取方法、SDS-PAGE凝胶浓度、聚焦条件和IPG胶条pH范围等进行了比较优化。结果表明,TCA/丙酮-clean up kit法提取总蛋白,用17 cm pH 5~8 IPG胶条,13%SDS-聚丙烯酰胺凝胶进行分离,用考马斯亮蓝R250染色,可以获得清晰、分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,共检测到约1200个蛋白点,主要分布在pH 5~8,相对分子量14~117 kD范围内,碱性蛋白得到有效分离,可以满足茶树雌蕊的蛋白组学分析和研究。     

适于蛋白质组研究的大豆种子蛋白双向电泳技术的改进

以大豆种子为材料,通过对样品制备、电泳条件以及染色方法等关键步骤进行改进,在大豆种子蛋白分析研究中获得了质量较高的双向电泳图谱,为大豆种子蛋白质组研究提供一较好的实验方法.     

茶树蛋白质提取及双向电泳的改良方法

研究了茶树芽叶蛋白质提取纯化及双向电泳技术,在样品制备、电泳及染色等方面进行了技术改进,解决了茶树芽叶中富含色素、多酚类化合物及其氧化产物等对双向电泳严重干扰的问题,探索出一种可获得重复性好,清晰度高的蛋白质双向电泳图谱技术;同时发现一种辨别茶树蛋白质样品质量好坏的简便方法。电泳图谱可分辨出茶树芽叶蛋白质斑点数500个左右,蛋白质相对分子量约在14.0 kD～100.0 kD范围内,主要分布在14.0 kD～67.0 kD之间;等电点约在4～9.5范围内,主要分布在4～6.5。     

低温胁迫下玉米叶片蛋白质的双向电泳分析

采用玉米大黄4079×200527的种子培养至3叶期,置4℃下冷激处理12 h,同时设对照,从叶片中提取可溶性总蛋白进行双向电泳。以体积比为主要标准,寻找Ratio>1的点,同对照相比,冷激处理后的玉米种子中8种蛋白质含量增加,出现5种新蛋白质点,新蛋白质全部为酸性蛋白,初步认为这5种蛋白质与玉米的抗寒性有关。     

影响木薯叶片蛋白质双向电泳图谱的因素分析

以木薯华南205为试材,采用苯酚抽提法提取叶片蛋白质,并通过双向电泳技术研究影响木薯叶片蛋白电泳分析图谱的主要因素。结果表明：pH 4～7的IPG胶条可提高特定范围蛋白质点的分辨率;上样量200 μg可得到较好的双向电泳图谱。本研究不仅为进一步研究木薯叶片蛋白电泳分析提供技术手段,同时也为分析木薯块根、茎和繁殖器官的蛋白质提供参考。     

大豆种子萌发中蛋白质组成的双向电泳分析

采用双向电泳技术分析了大豆种子萌发时期蛋白质的差异表达.研究发现,在考染胶上,通过PDQuest分析,在成熟干种子和萌发种子的2-DE图谱上分别获得341和376个蛋白斑点,两个时期的2-DE图谱非常相近,说明绝大部分大豆种子贮藏蛋白在萌发期尚未开始降解.有21个蛋白点在萌发的大豆种子中表达量上调,9个表达量下调.对这些蛋白的进一步鉴定将有助于深入理解大豆种子萌发过程的生理及分子机制.     

‘四季蜜’龙眼花芽总蛋白质提取方法及双向电泳体系的优化

利用TCA丙酮法、丙酮法、TCA酚抽提法和改良酚抽法等4种方法,提取‘四季蜜’龙眼花芽的总蛋白质,在蛋白产量、单向SDS-PAGE和2-DE图谱等方面进行比较,并对IPG胶条种类、蛋白质上样量及等电聚焦条件等进行优化。结果表明:采用改良酚抽法,选用24 cm、pH3~10的胶条,按120μg上样,在适宜的等电聚焦条件下,可获得背景清晰、重复性好、分辨率高的2-DE图谱,本研究为‘四季蜜’龙眼花芽蛋白质组学后续研究奠定了基础。     

水稻花粉总蛋白质双向凝胶电泳方法建立及应用

采用石英砂加液氮研磨方法破碎花粉,然后用两种不同的方法提取水稻花粉总蛋白质,之后采用固相pH梯度等电聚焦/SDS PAGE 双向凝胶电泳对红莲型细胞质雄性不育水稻单核期花粉总蛋白质进行了分离。通过银染显色, PDQuest 2DE软件可识别约1 000~1 500个蛋白质点。其中TCA 丙酮提取法更适合提取花粉总蛋白质进行双向凝胶电泳分离,并可获得分辨率和重复性较好的双向电泳图谱。对红莲型细胞质雄性不育水稻的不育系单核期和二核期花粉总蛋白进行了双向电泳分离,通过比较两个时期花粉蛋白质电泳图谱后发现,二核期的花粉蛋白质较单核期花粉蛋白质数目减少,并且部分蛋白质表达量下降。     

槟榔叶片总蛋白质提取及双向电泳条件初探

采用3种提取植物组织蛋白的方法(TCA/丙酮沉淀法、E-TCA法、酚法)提取槟榔叶片总蛋白,在蛋白产量,一维和二维电泳图谱等方面对3种方法的提取效果进行比较.结果表明,TCA/丙酮沉淀法效果较好,是槟榔叶片总蛋白提取的可选方法,同时优化了双向电泳的条件和上样量.     

小麦穗突变体Sda1与其野生型叶片总蛋白双向电泳体系的建立

为探索适合小麦穗突变体Sda1叶片蛋白的双向电泳体系,寻找Sda1与其野生型叶片的差异蛋白,以Sda1与其野生型的抽穗期叶片为材料,从蛋白质提取、双向电泳条件等方面对适合Sda1及其野生型叶片蛋白的双向电泳体系进行探索。分析试验得到的双向电泳图谱,发现利用TCA/丙酮提取叶片总蛋白,用pH 4~7的17cm线性胶条,采用13%浓度的分离胶,上样量为900μg,利用改良的等电聚焦程序,能够得到背景清晰、分辨率高的电泳图谱;电泳图谱在低分子区蛋白点分布均匀,并且重复性好。利用PDQuest 8.0.1软件分析图谱,得到27个差异点蛋白,相比于野生型植株,Sda1突变体表现为蛋白表达量下调与缺失,发现6个缺失蛋白,21个表达下调蛋白。     

水稻蛋白组分鉴定方法及其在食味品质评价上的应用

蛋白质含量与稻米食味品质关系密切。目前的研究发现,一些表观蛋白含量相近的水稻品种食味评分差异很大,可能与其蛋白组分有一定关系。本研究在前人基础上从蛋白的提取剂、进样量、固定及染色等方面进行优化,建立了两种水稻蛋白电泳方法,即水稻清蛋白电泳方法及水稻谷蛋白电泳方法。采用改进后的水稻谷蛋白电泳方法进行谱带分析,发现蛋白含量相近、食味评分不同的水稻品种谷蛋白电泳谱带无差异;北方粳稻和南方粳稻的谷蛋白电泳谱带有差异。对不同来源的粳稻品种,采用优化后的清蛋白电泳方法进行谱带分析,发现蛋白含量相近、食味评分不同的水稻品种,70~105 kDa处谱带缺失或谱带浓度加强。初步确认105 kDa是与稻米食味相关的谱带,谱带颜色越深,稻米食味品质越好。     

水稻种子贮藏蛋白总含量分布和多态性分析

用考马斯亮蓝G 250染色法测定了来自世界各地的110个水稻品种或品系种子贮藏蛋白的含量,发现不同水稻品种或品系种子贮藏蛋白含量存在一定的多样性。110个水稻材料贮藏蛋白含量分布在34.29 ~95.08 mg/g,含量最高的为来自国际水稻研究所的品系C105A51;大部分水稻材料的种子贮藏蛋白含量在40 ~60 mg/g,有72个,占所测水稻材料总数的655%;总蛋白质含量超过80 mg/g的水稻材料很少,只有3个,占2.7 %。SDS PAGE蛋白电泳图谱表明水稻贮藏蛋白种类和含量存在较高的多态性。     

Differential Proteins Expressed in Rice Leaves and Grains in Response to Salinity and Exogenous Spermidine Treatments

Exogenous application of spermidine(Spd) has been reported to modulate physiological processes and alleviate salt-induced damage to growth and productivity of several plants including rice. Employing a proteomic approach, we aimed at identifying rice leaf and grain proteins differentially expressing under salt stress, and in response to Spd prior to Na Cl treatment. A total of 9 and 20 differentially expressed protein spots were identified in the leaves of salt-tolerant(Pokkali) and saltsensitive(KDML105) rice cultivars, respectively. Differential proteins common to both cultivars included a photosynthetic light reaction protein(oxygen-evolving complex protein 1), enzymes of Calvin cycle and glycolysis(fructose-bisphosphate aldolase and triose-phosphate isomerase), malate dehydrogenase, superoxide dismutase and a hypothetical protein(Os I_18213). Most proteins were present at higher intensities in Pokkali leaves. The photosynthetic oxygen-evolving enhancer protein 2 was detected only in Pokkali and was up-regulated by salt-stress and further enhanced by Spd treatment. All three spots identified as superoxide dismutase in KDML105 were up-regulated by Na Cl but down-regulated when treated with Spd prior to Na Cl, indicating that Spd acted directly as antioxidants. Important differential stress proteins detected in mature grains of both rice cultivars were late embryogenesis abundant proteins with protective roles and an antioxidant protein, 1-Cys-peroxiredoxin. Higher salt tolerance of Pokkali partly resulted from higher intensities and more responsiveness of the proteins relating to photosynthesis light reactions, energy metabolism, antioxidant enzymes in the leaves, and stress proteins with protective roles in the grains.     

Proteomic Study for Responses to Cadmium Stress in Rice Seedlings

A proteomic approach including two-dimensional electrophoresis and mass spectrometric (MALDI-TOF MS) analyses was used to investigate the responses to cadmium (Cd) stress in seedlings of rice (Oryza sativa L.) varieties Shanyou 63 and Aizaizhan. Cd stress significantly inhibited root and shoot growth, and affected the global proteome in rice roots and leaves, which induced or upregulated the expression of corresponding proteins in rice roots and leaves when rice seedlings were exposed to 0.1 or 1.0 mmol/L Cd. The Cd-induced proteins are involved in chelation and compartmentation of Cd, elimination of active oxygen free radicals, detoxification of toxic substances, degradation of denatured proteins or inactivated enzymes, regulation of physiologic metabolism and induction of pathogenesis-related proteins. Comparing the Cd-induced proteins between the two varieties, the β-glucosidase and pathogenesis-related protein family 10 proteins were more drastically induced by Cd stress in roots and leaves of Aizaizhan, and the UDP-glucose protein transglucosylase and translational elongation factor Tu were induced by 0.1 mmol/L Cd stress in roots of Shanyou 63. This may be one of the important mechanisms for higher tolerance to Cd stress in Shanyou 63 than in Aizaizhan.