禽流感病毒夹心ELISA诊断试剂盒的研制及应用

将成熟的禽流感病毒（AIV）夹心ELISA快速检测方法组装成诊断试剂盒。试剂盒由1～11号试剂、一块酶标板和一份说明书组成。对试剂盒内各组份进行了特异性、敏感性、重复性及保存期的测定。结果表明．在-10℃下能保存6个月．而且特异性强、敏感性高、重复性好，操作简单．方便．能快速、准确地检测出样品中是否带有AIV抗原。先后制备了8个批次的诊断试剂盒．于湖北、安徽及河南等地的养禽场、兽医站、农科院、农业院校等化验室应用．取得了良好的效果。     

雌二醇残留ELISA检测试剂盒的研制

采用包被单克隆抗体直接竞争ELISA法研制一种检测食品中雌二醇残留的ELISA试剂盒。将不同浓度的雌二醇添加到鸡肉样品中,用制备的试剂盒检测雌二醇残留,结果样品的加标回收率在73.1%～102.7%之间,变异系数<20%。对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定,结果表明:研制的试剂盒最低检出限为0.5μg/L;在4℃条件下试剂盒有效期可达6个月。用ELISA试剂盒检测雌二醇残留可批量分析样品,具有快速、简便、灵敏、经济的特点,可广泛应用于食品中雌二醇的监测。     

禽流感抗体的间接ELISA检测

本试验建立了AIV抗原,检测AIV抗体的AI-ELISA方法。本试验应用单方阵滴定法确定了酶联免疫吸附试验(ELISA)检测禽流感抗体的最适工作浓度、最适血清稀释倍数,建立了ELISA检测鸭血清抗体的程序,并提出以P/N(Positive/Negidive)确定阳性血清滴度的方法。经小批血清的实验检测表明此方法特异性较好,操作简便,适于大批鸭群抗体水平的检测,并为免疫监测提供了可靠的技术手段。     

间接ELISA检测禽流感抗体方法的建立

应用醛化的鸡红细胞经吸附释放方法获得纯化的禽流感病毒 (AIV) ,经 triton X-1 0 0处理并反复冻融制备禽流感 EL ISA抗原。应用抗鸡 Ig轻链单抗 1 B7辣根过氧化物酶结合物建立了定量检测禽流感抗体水平的 EL ISA方法。确立了将鸡血清 1 0 0倍稀释监测 EL ISA效价(ET)的回归方程 y=0 .77452 x 0 .8793 5(r=0 .9466) ,可用于定量测定。血凝抑制 (HI)抗体与 EL ISA方法的比较试验表明 ,EL ISA法比血凝抑制试验敏感 1 .5倍以上     

去氢甲睾酮ELISA试剂盒的研制

以实验室自主研发的一株能稳定分泌去氢甲睾酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株为基础,应用ELISA原理研制去氢甲睾酮残留快速检测试剂盒,并对试剂盒特性进行测定。结果表明,该试剂盒标准曲线的回归方程为y=-0.205 5x+0.516(R2=0.993 1),线性检测范围为0.1ng/mL～100ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为3.20ng/mL,对猪肉加标样品的检测回收率在87.41%±5.44%～110.70%±2.05%之间,试剂盒检测与去氢甲睾酮结构类似物丙酸睾酮酯、群勃龙的交叉反应率均小于1%;试剂盒在4℃能稳定保存6个月。说明试剂盒能够应用于食品中残留去氢甲睾酮的快速检测。     

黄曲霉毒素B1残留ELISA试剂盒的研制及应用

本研究采用间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)检测黄曲霉毒素B₁(aflatoxins B₁,AFB₁)残留量。将AFB₁与蛋白质载体牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备了AFB₁-BSA和AFB₁-OVA偶联物,以AFB₁-BSA作为免疫原制备特异性抗体,并成功建立了AFB₁残留间接竞争ELISA检测方法及检测试剂盒。试剂盒IC₅₀为128.8 ng/L,检测线性范围为50~1800 ng/L,检测限不超过100 ng/kg;食用油、花生和谷物的平均添加回收率大于71.3%,批内、批间变异系数均小于14.2%。因此,本试剂盒具有操作简便、检测快速、灵敏度高等特点,将在植物性食品中AFB₁的残留检测中发挥重要作用。     

苏丹红Ⅰ和对位红残留检测ELISA试剂盒的研制

针对苏丹红I和对位红的芳香胺共同化学结构特点,采用琥珀酸酐法人工合成苏丹红I免疫原,建立了快速检测苏丹红I和对位红残留的酶联免疫方法。同时对其灵敏度、准确度、特异性、基质效应性等技术指标进行测定。结果表明:该试剂盒与其它系列苏丹红均无交叉反应;试剂盒检测相关系数R2=99.56%,试剂盒最低检出限为0.1μg/L,半数抑制率IC50=0.599μg/L;油基质和水基质的辣椒样品的平均添加回收准确率分别为79.9%和78.2%;不同基质对该试剂盒的检测结果影响不大。该试剂盒适合于苏丹红I和对位红残留的快速检测,具有较高的推广价值。     

用ELISA猪瘟抗原检测试剂盒诊断猪瘟

近年来，猪瘟的流行特征发生了重要变化，出现了以慢性、阴性感染为主的流行趋势，致使猪瘟的临床诊断更为困难。目前实验室检测猪瘟的方法很多，以抗原一抗体反应为基础的酶联免疫吸附试验(ELISA)被广泛采用，ELISA是快速检测猪瘟的有效方法。笔者利用ELISA猪瘟抗原检测试剂盒，对某猪场送检病料进行猪瘟诊断，取得了较好的效果。     

可乐定ELISA检测试剂盒的研制及其性能评价

本研究通过制备可乐定完全抗原,免疫新西兰大白兔,得到特异性多克隆抗体,并和HRP标记的羊抗兔,构建间接ELISA检测法试剂盒,并进行性能测试评价。结果表明,吸光度百分比值与赛庚啶质量浓度的对数在0.1-8.1μg/L呈线性关系,相关系数R₂为0.977,半数抑制浓度(IC₅₀)为0.675μg/L,检测限为0.2μg/L,回收率为81% ～109%,具备良好的特异性,可用于动物尿样、血清和组织中的可乐定残留检测。     

应用Kappa检验比较猪蓝耳病ELISA抗体检测试剂盒

[目的]比较两个猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体酶联免疫吸附试验（ ELISA）检测试剂盒结果的一致性。[方法]对390份猪血清进行PRRSV抗体ELISA检测,应用Kappa检验比较两种试剂盒检测结果的一致性并进行分析。[结果]两种试剂盒联合检测出250份PRRSV抗体阳性和70份阴性,阳性一致性为80.65%,阴性一致性为87.50%,符合率82.1%,结果一致性为中度一致（ Kappa值=0.552）。[结论]2种方法检测结果一致性较好,建议根据实际需要选择PRRSV抗体检测试剂盒。     

鸡传染性法氏囊病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用

采用vero细胞增殖的IBDV抗原建立了间接ELISA，用于定量检测IBDV抗体。对该方法进行了标准化研究，确立了该方法的最佳工作条件。在此基础上研制了相应的诊断试剂盒，并对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性、可重复性、符合率、与国外同类产品的比较、保存期等进行了全面、详细的研究。结果表明，研制的试剂盒在-20℃保存至6个月时各项性能都很好。该试剂盒与进口试刺盒对同样血清样品检测，符合率为86．7％。间接ELISA试剂盒与琼扩试验的符合率为92，5％。该试刺盒可对大量血清样品进行检测，操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、快速，更适合于大型鸡场IBD免疫抗体水平的监测及现地疫病诊断等需要。     

间接ELISA检测鸭病毒性肝炎抗体的研究

本试验以氯仿去脂-滤膜过滤-浓缩层析方法纯化病毒作包被抗原，成功地建立了检测鸡抗鸭肝炎病毒(DHV)血清抗体的间接ELISA方法，经交叉试验和阻断试验表明，该方法具有很高的敏感性和特异性，应用于DHV抗体检测比较有效，为鸭抗DHV血清抗体检测以及进行DHV单克隆抗体筛选提供了依据。     

禽流感抗体斑点—ELISA诊断技术的研究

以混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体,用自制的禽流感全病毒抗原和酶标抗体,建立了禽流感抗体斑点 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测法,其抗原最适包被量为 ０．０６μｇ／点;血清抗体最佳稀释度为 １１００;酶标抗体作 １２００ 稀释;出现明显清晰的斑点者判为禽流感抗体阳性。该方法对 Ｓ Ｐ Ｆ鸡血清及新城疫、传染性法氏囊病等其它 １１ 种鸡疫病阳性血清均为阴性,对不同亚型特异性的禽流感病毒（ Ａ Ｉ Ｖ）分型血清、琼扩（ Ａ Ｇ Ｐ）阳性血清及血凝抑制（ Ｈ Ｉ）阳性而 Ａ Ｇ Ｐ疑似的血清样品均呈阳性;对人工接种 Ａ Ｉ Ｖ 的 Ｓ Ｐ Ｆ鸡第 ３ 天即能检出抗体阳性,第 ５～１１７ 天可全部检出。与间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法比较,不仅其特异性、敏感性、重复性相一致,而且结果可用肉眼判定,更适合现地禽流感抗体监测及流行病学调查。     

重组N蛋白抗原检测PRRSV抗体ELISA的研究Ⅱ.试剂盒阴阳性临界值的测定及其与IDEXX公司试剂盒的比较

对临床上采集的899份猪血清样本。用以纯化的重组N蛋白为包被抗原建立的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体的间接ELISA进行检测．运用统计学方法摸清了检测结果的分布规律。并扣国外IDEXX公司PRRSV抗体检测试剂盒同时对460份血清样本进行检测。结果表明。2种方法的符合率为91．73％。利用TG—ROC软件确定了自制的ELISA酶标板（NP—ELISA）的临界值。并标定试剂盒的特异性扣敏感性均为92．6％。ELISA的结果判定标准是：当以血清样本L为标准参考阳性血清时，样品与阳性血清的比值（S／P）小于或等于0．4为阴性；S／P在0．4与0．5之间为可疑；S／P大于或等于0．5为阳性。与IDEXX公司PRRSV抗体检测试剂盒对临床样品的检测结果进行比较后，初步判定所建立的ELISA之所以出现较多的假阴性。可能是目前临床上出现了PRRSV欧洲型所致。     

检测禽流感病毒抗体的重组核蛋白间接ELISA方法的建立

以大肠杆菌系统表达的H9N2亚型禽流感病毒（AIV）核蛋白（NP）为抗原，建立了禽流感间接酶联免疫吸附试验抗体检测技术（NP—ELISA）。对263份待检血清（包括临床收集的243份血清和20份H9N2亚型AIV免疫鸡阳性血清）进行检测，NP—ELISA与琼脂免疫扩散试验（AGP）的总符合率为83．3％，与血凝抑制试验（HI）的总符合率为92％。特异性试验表明，NP—ELISA方法可以检测H5、H7和H9亚型AIV特异性抗体，检测为阳性的血清样品能够被阳性鸡胚尿囊液阻断。敏感性试验证实，NP—ELISA最早可以检测鸡感染后7d的血清样品，并于感染后10d确定100％血清阳性，而AGP检测直到首免后21～28d才出现部分血清阳性，HI检测直到10～14d才出现部分血清阳性，并且NP-ELISA要比HI敏感4～40倍。试验证明，NP—ELISA是检测AIV血清型特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。     

抗氧氟沙星单克隆抗体的制备及ELISA快速试剂盒的初步研制

本试验通过碳二亚胺法,将半抗原氧氟沙星与载体牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）偶联,制备得到氧氟沙星免疫原和包被原,并制备抗氧氟沙星的单克隆抗体,初步研制测定氧氟沙星的ELISA试剂盒,经过测试,对鱼肉样本中氧氟沙星的检测限为1 μg/kg,添加回收率在62.8%～97.7%之间,批内、批间试验的相对标准偏差均小于10%。     

应用间接ELISA检测猪旋毛虫抗体

以猪旋毛虫抗原基因Ts88的重组蛋白为包被抗原,建立了猪旋毛虫抗体间接ELISA检测方法。最佳抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释倍数为1:80。采用间接ELISA方法检测2000份猪血清,阳性检出率为1.5%,血清样本对应猪肉采用镜检法,阳性检出率为1.30%。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪旋毛虫的临床诊断和流行病学调查。     

应用间接ELISA检测猪旋毛虫抗体

以猪旋毛虫抗原基因Ts88的重组蛋白为包被抗原,建立了猪旋毛虫抗体间接ELISA检测方法。最佳抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释倍数为1:80。采用间接ELISA方法检测2000份猪血清,阳性检出率为1.5%,血清样本对应猪肉采用镜检法,阳性检出率为1.30%。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪旋毛虫的临床诊断和流行病学调查。