高效液相色谱法测定饲料中艾司唑仑的含量

建立了高效液相色谱法测定预混合饲料、配合饲料和浓缩饲料中艾司唑仑含量的检测方法。试样用正己烷-二氯甲烷(1∶1,V/V)提取,经MCX固相萃取柱进一步净化,采用反相高效液相色谱-紫外检测法进行定量分析。饲料中艾司唑仑的检测限为0.1 mg/kg,定量限为0.25 mg/kg。在饲料中添加0.25、0.5、2.5 mg/kg水平的药物回收试验中,平均回收率均在82.8%~105.9%之间,相对标准偏差为1.62%~8.40%。该方法灵敏、准确,适用于饲料中艾司唑仑含量的分析检测。     

高效液相色谱法测定饲料中喹乙醇含量

利用高效液相色谱法测定饲料中喹乙醇含量.采用C18色谱柱,以0.02 mol/L磷酸‐甲醇(85∶15)为流动相,流速为0.8 mL/min,检测波长为380 nm.喹乙醇在0.1~100 μg/mL范围内线性关系良好,r＝0.999 904;经5种不同浓度回收率的测定,其回收率在85.5%～93.6%之间,RSD小于5.2%(n=5).     

HPLC法同时测定大鼠血浆中3种CYP 450 探针药物的浓度

建立同时测定大鼠血浆中3种细胞色素P450（CYP450）亚型酶( CYP1A2、CYP2C9、CYP3A4)活性的Cocktail探针药物的高效液相色谱（HPLC）检测方法,为相关肝药酶代谢研究提供方法学参考。分别取非那西丁,咪达唑仑和甲苯磺丁脲三种探针药物,制成混合探针溶液,用一种提取溶剂系统对3种探针药物同时提取,并用高效液相色谱法（HPLC）同时测定该3种探针药物的血药浓度,并对其进行专属性,线性范围及检测限,精密度,回收率,稳定性的验证。色谱条件选用Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相为甲醇-50 mM磷酸盐缓冲对（45:55;pH3.2）;检测波长：230 nm;流速1.0 mL/min;柱温35 ℃。结果：非那西丁,咪达唑仑,甲苯磺丁脲的线性范围分别为0.10～10.0 μg/mL(r=0.9993),0.05～5.0 μg/mL(r=0.9999),0.10～50.0 μg/mL(r=0.9991);方法回收率分别为79.28 %～87.91 %,76.43 %～85.36 %,82.79 %～90.61 %。该HPLC检测方法快捷,准确,灵敏度高,可以在同一次试验中,同时测定大鼠血浆中3种CYP450亚酶探针药物（非那西丁,甲苯磺丁脲,咪达唑仑）的浓度,各探针药物的吸收峰分离完全,无干扰,可用于开展某些受试药物对大鼠CYP450的3个主要亚型酶（CYP1A2,CYP2C9,CYP3A4）调控作用的相关研究。     

反相高效液相色谱法测定预混合饲料中维生素A乙酸酯的含量

建立了反相高效液相色谱法测定预混合饲料中维生素A乙酸酯含量的方法.色谱柱为C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇;检测波长326 nm.维生素A乙酸酯浓度在0.05～100 IU/mL范围内,峰面积与浓度呈现良好的线性关系,相关系数r=0.999 9.2个不同浓度的添加回收率分别为93.6%和98.3%.     

高效液相色谱法测定饲料中的唑吡旦

建立一种高效液相色谱法测定饲料中唑吡旦的方法。饲料中的唑吡旦经1%三氯乙酸提取,离心后经混合型阳离子交换MCX柱净化,氮气吹干,流动相溶解,高效液相色谱法进行测定,保留时间定性,外标法定量。结果表明:该方法在0.1~10.0g/ml范围内线性关系良好,相关系数R2为1.0000;在1.0~100mg/kg添加浓度范围内,方法平均回收率为78.5%~87.4%,相对标准偏差为3.0%~6.5%,定量限为1.0mg/kg。方法稳定可靠,适用于饲料中唑吡旦的测定。     

混合型饲料添加剂中胆汁酸含量测定方法比较研究

本试验采用高效液相色谱-示差折光（HPLC-RID）和高效液相色谱-荧光（HPLC-FLD）法,研究建立混合型饲料添加剂中猪胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸含量的高效液相色谱测定方法,并对2种高效液相色谱法、重量法、容量法胆汁酸含量测定结果进行比较分析。HPLC-RID法：试样用甲醇-乙腈-水溶液提取,C18柱分离,HPLC-RID测定,3种胆汁酸的定量限为10.0～20.0 mg/g,平均回收率为82.54%～108.50%,相对标准偏差（RSD）为2.90%～7.61%;HPLCFLD法：试样用甲醇提取,氢氧化钾甲醇溶液皂化,以1,4,7,10,13,16-六氧杂环十八烷乙腈液和4-溴甲基-7-甲氧基香豆素乙腈液衍生,C18柱分离,HPLC-FLD测定,3种胆汁酸的定量限为2.0～3.0 mg/g,平均回收率为70.43%～84.31%,RSD为4.82%～9.80%。结果表明：HPLCRID法、HPLC-FLD法均可测定混合型饲料添加剂中的3种胆汁酸含量,但由于HPLC-FLD法胆汁酸需要衍生,易受样品基质影响,胆汁酸含量测定结果重现性、稳定性差;重量法、容量法测定的是混合型饲料添加...     

采用HPLC法测定双峰驼血浆咪达唑仑浓度

旨在建立测定双峰驼血浆咪达唑仑浓度的高效液相色谱紫外检测法(HPLC-UV),为后续的特异性探针药物法研究双峰驼CYP3A酶体内活性提供方法学支撑。首先采用乙腈沉淀血浆样品蛋白,离心后经022μm有机针孔滤膜过滤,采用色谱柱为Sigma C18柱(46 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈:001 mol·L-1PBS缓冲溶液=60∶40(V/V),流速为05 mL·min~(-1),柱温为30℃,检测波长为254 nm等色谱条件进行样品检测。结果表明:咪达唑仑的保留时间为1324 min,峰形良好、无杂峰干扰,并在039~25μg·mL~(-1)浓度范围内线性关系良好(r2=0999,n=7)。高、中、低3个浓度的相对回收率与绝对回收率均符合检测要求。因此,本试验建立的测定双峰驼血浆咪达唑仑浓度的HPLC紫外检测方法灵敏度高,稳定性好,分离完全,峰形良好。     

饲料添加剂牛至油中香芹酚和百里香酚含量的测定

试验建立了高效液相色谱法测定饲料添加剂牛至油中香芹酚和百里香酚含量的方法。采用高效液相色谱法,色谱柱Diamonsil C18(2)柱,流动相为甲醇-水-冰醋酸(60??4??2),检测波长274 nm,流速1.0 ml/min。结果显示,牛至油中香芹酚含量为37.81%,百里香酚含量为7.05%,香芹酚和百里香酚的回收率分别为98.2%、98.4%,变异系数分别为1.0%、1.3%。试验为牛至油中香芹酚和百里香酚的检测提供了准确、灵敏、可靠的分析方法。     

沙葱异黄酮含量测定方法的研究

比较紫外分光光度法和高效液相色谱法测定沙葱异黄酮的含量,建立沙葱异黄酮含量测定的最佳试验方法。两种试验方法均以鸢尾苷为对照品,紫外分光光度法在其最大吸收峰295nm处进行测定。高效液相色谱法以Intertsil ODS-SP C18(250mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,流动相为30%乙腈,柱温25℃,流速0.5ml/min,进样量10μl,检测波长295nm。试验结果表明,紫外分光光度法中,沙葱异黄酮含量比高效液相色谱法结果高出46%,相对标准偏差为5.7%,平均加样回收率为98.75%;高效液相色谱法中,沙葱异黄酮含量为4.320mg/kg,相对标准偏差为0.26%,平均加样回收率为99.99%。紫外分光光度法简便、快速,但测定误差大。高效液相色谱法虽然复杂,但比紫外分光光度法准确。     

反相液相色谱法测定饲料中的金霉素含量

采用反相液相色谱法测定饲料级、预混合饲料和配合饲料中的金霉素含量方法的研究.色谱柱为C18预柱及分析柱150×4.6mm,5μm;流动相为0.01 mol/L草酸溶液-乙腈-甲醇(1032);紫外检测器,检测波长为360nm;柱温25℃.结果为在0.2～50μg/ml之间呈现良好的线性关系,相关系数r为0.9997,3个不同浓度样品加样回收率(n=5)分别为95.96%,98.32%,95.41%.本法简便,快速,准确度和精密度较高,适用于各种饲料中金霉素含量的测定.     

RP-HPLC测定水产饲料中L-抗坏血酸-2-磷酸酯含量

建立了反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定水产饲料中L-抗坏血酸-2-磷酸酯含量的分析方法。采用ZORBAX SB-C18分析柱(250mm×4.0mm,5μm),以甲醇-离子对试剂缓冲液(15:85,v/v)为流动相,流速为1.0ml/min,检测波长为254nm,柱温为30℃,在此色谱条件下,L-抗坏血酸-2-磷酸酯在1.0～100.0mg/l浓度范围内线性关系良好,相关系数r>0.9999,在10.0～50.0mg/kg加标浓度范围内,样品平均回收率为88.7%～101.6%,日内相对标准偏差为1.84%～5.31%,日间相对标准偏差为5.04%～9.13%,方法的检出限为2.0mg/kg。     

饲料中磺胺二甲嘧啶、磺胺六甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲恶唑的检测方法

试验的目的是建立测定饲料中磺胺二甲嘧啶、磺胺六甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲恶唑含量的反相高效液相色谱方法。以ZorbaxSB-C18为色谱柱;乙腈-冰乙酸-水(18+1+81)为流动相;紫外检测波长为285nm;柱温为40℃;进样量为10μl。结果表明,线性在20～160mg/kg良好,平均回收率较高;检测限达到10mg/kg。该法准确度高、精密度好、简便快速。     

杂交猪白介素IL-18全基因克隆及原核表达

为研究杂交猪白细胞介素-18(IL-18)蛋白的结构与功能,将杂交猪外周血淋巴细胞体外刺激培养后,提取淋巴细胞总RNA,通过RT-PCR扩增的方法,获得IL-18全基因,克隆到pMD18-T载体中进行测序,测得核苷酸序列与GenBank登录的参考序列的同源性在99.0%～99.8%之间,推到氨基酸同源性在99.7%～100%之间;然后亚克隆到pET30a(+)表达载体中,构建并筛选出阳性重组子,标记为pET30a/IL-18。将阳性重组质粒转化进RossettaTM宿主菌中,通过改变IPTG浓度、诱导温度和诱导时间,使重组蛋白获得表达,并确定最佳诱导条件为:IPTG终浓度1.0mM、诱导温度37℃、诱导时间为3-4h。经SDS-PAGE和Western-blotting分析表明该重组蛋白相对分子量约为35Ku,表达量约为38%,主要存于包涵体中,具有良好的免疫学活性。     

超高效液相色谱质谱联用测定饲料、牛乳及乳制品中双氰胺

建立超高效液相色谱质谱联用法检测饲料、牛乳及乳制品中双氰胺的方法.研究适用于检测饲料、牛乳及乳制品的前处理方法,并对色谱柱进行了选择.样品经乙腈提取、C18固相萃取填料净化后,低温冷冻离心除掉杂质,含0.1％甲酸的乙腈溶液和含0.1％甲酸的10 mmol/L甲酸铵水溶液梯度洗脱,通过Acquity BEH Amide色谱柱分离,电喷雾正离子多反应监测模式进行检测.结果表明:该方法在1～1 000 μg/L范围内线性良好,相关系数r大于0.995,饲料定量限最高40 μg/kg.不同添加质量浓度的回收率为80.5％～108.4％,相对标准偏差小于7.0％.该方法具有简单方便、检测周期短,适用于饲料、牛乳及乳制品检测等特点.     

高效液相色谱法测定鱼饲料中甲基睾丸酮含量的研究

试验建立了鱼饲料中17α-甲基睾丸酮的液相色谱检测方法。该方法以甲醇提取样品中的甲基睾酮,3β-甲基-17β-羟基-5-雄烯-7-酮为内标;梯度洗脱,流动相分别为水-乙腈溶液(80:20,V/V),流速0.5 ml/min;柱温40℃,DAD检测器检测,内标法定量,甲基睾酮的平均保留时间为11.29 min(R.S.D=0.20%),内标为8.68 min(R.S.D=0.19%)。结果表明,在7.5～60.0μg/ml范围内线性关系良好,拟合度为0.999 8,回收率在94%～100%之间,相对标准偏差为1.97%～3.21%。     

降低生长肥育猪饲料中磷酸氢钙水平的研究

分30~60kg BW、60~100kg BW和30~100kg BW三个阶段研究了降低饲料中磷酸氢钙水平及降低磷酸氢钙的同时添加植酸酶对猪生长性能的影响。结果表明:磷酸氢钙添加水平在生长猪(30~60kg BW)饲料中由对照组的0.920%降低到0.552%、肥育猪(60~100kg BW)饲料中由对照组的0.760%降低到0.380%时都没有显著降低猪的生长性能(P>0.05),降低磷酸氢钙的同时添加植酸酶虽没有显著提高猪的生长速度(P>0.05),但能降低料肉比,其中在全阶段(30~100kg BW)的作用显著(P<0.05)。     

高效液相色谱法检测渔用饲料及原料中的三聚氰胺

试验建立了应用高效液相色谱法检测渔用配合饲料及原料中三聚氰胺含量的方法。样品经三氯乙酸-乙酸铅-盐酸提取,MCX固相萃取净化后,应用MGC18色谱柱进行分离,柱温为30℃,流动相为庚烷磺酸钠-柠檬酸-乙腈,流速1ml/min,紫外检测器240nm检测。外标法定量,方法线性范围为0.2～10μg/ml,线性方程为y=86621x+718.98,相关系数R=1,检测限为2mg/kg。不同样品的加标回收率为84.6%～99.2%,相对标准偏差为1.8%～5.2%。     

高效液相色谱法测定饲料中黄曲霉毒素含量的研究

旨在建立检测饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量的高效液相色谱分析方法。样品用甲醇溶液提取,利用免疫亲和柱净化,以C18反相色谱柱分离,光化学衍生器衍生后应用荧光检测器检测。结果表明:4种黄曲霉毒素在0.5~20ng/mL范围内呈现良好的线性关系,回收率为71.6%~89.0%。采用该方法检测5种饲料样品中的黄曲霉毒素总量,检出率范围在74.0%~86.7%,检出值的范围为0.5~4.3μg/kg。建立的方法精密度高、重复性好,为监测饲料中黄曲霉毒素含量水平提供了有效的分析方法。     

高效液相色谱法测定乳粉中5种核苷酸的含量

建立乳粉中核苷酸高效液相色谱的测定方法.采用超纯水作为提取剂,0.5％的乙酸沉淀蛋白,SAX固相萃取小柱净化,C18色谱柱分离,流动相为0.1 mol/L的磷酸二氢钾溶液.每100 g乳粉中核苷酸添加量为0.3～50 mg时,回收率大于90％,定量限为0.3 mg/100 g.该方法具有结果准确、操作简便、重复性好等优点,可用于乳粉中核苷酸的检测.     

高效液相色谱法测定乳品与饲料中阿维菌素类药物残留

建立乳品与饲料中阿维菌素类药物(埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素)残留液相色谱的测定方法。乙腈为提取剂,tC18固相萃取小柱净化,三氟乙酸酐和N-甲基咪唑柱前衍生,C18柱分离,甲醇-乙腈的混合溶剂与水梯度洗脱,液相色谱仪荧光检测器检测,外标法定量。每1 000 g乳粉(或每1 000 mL液态乳)中阿维菌素添加量为1.5 μg时,回收率大于95％。本方法液态乳、酸乳、乳粉的定量限为2μg/kg,饲料的定量限为10 μg/kg。该方法具有结果准确、操作简便、重复性好等优点,可用于乳品和饲料中阿维菌素类药物残留的检测。