腺苷及类似物对猪血小板膜磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

猪血小板膜与不同浓度的腺苷或100μmol/L的腺苷类似物及γ—~(32)P—ATP37℃反应5min.被标记的磷脂酰肌醇—4—单磷酸通过薄层层析法分离、放射自显影定位、液体闪烁计数定量的结果表明:腺苷可强烈抑制猪血小板膜磷脂酰肌醇磷酸化,半数抑制率为14μmol/L;腺苷类似物cAMP、5′—氯—5′—脱氧腺苷、腺嘌呤、α′—脱氧腺苷、AMP、阿糖腺苷、cGMP在浓度为100μmol/L时对猪血小板膜磷脂酰肌醇磷酸化有不同程度的抑制作用。     

腺苷对猪血小板膜上磷脂酰肌醇激酶和磷脂酰肌醇-4-磷酸激酶的抑制作用

用差速离心法分离猪血小板膜，在适当条件下，用［ γ－３２ Ｐ） ＡＴＰ与其保温，观察３２Ｐ掺入磷脂情况。结果表明：（１）无外源性磷脂酰肌醇－４－磷酸（ＰＩＰ）时，３２Ｐ主要掺入ＰＩＰ；补充外源性ＰＩＰ后，３２Ｐ也可掺入磷脂酰肌醇－ ４， ５－二磷酸（ ＰＩＰ２） ９（ ２）腺苷及类似物 ５’－氧－ ５’－脱氧腺苷对３２ Ｐ掺入这两种磷脂均有强烈的抑制作用；（３）这种抑制作用呈剂量—效应关系（ＩＣ５０分别为８０μｍｏｌ／Ｌ和７０μｍｏｌ／ Ｌ），并与ＡＴＰ里竞争性。提示腺苷及类似物５’－氯－５’－脱氧腺苷这种抑制作用可能与其抑制血小板聚集作用有关。     

腺苷及其类似物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

本文研究腺苷及其类似物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响,结果表明:(1)腺苷对磷脂酰肌醇磷     

N6-(6-氨基己基)-5′-磷酸腺苷的合成

由肌苷开始经五步合成出Ｎ６－（６－氮基己基）－５’－磷酸腺苷。对６－氯－９β－Ｄ－呋喃核糖嘌呤的合成进行了改进。１，６－己二胺同６－氯－９β－Ｄ呋喃核糖嘌呤－５’－磷酸发生取代反应，合成出Ｎ６－（６－氮基己基）－５′－磷酸腺苷，基于核苷的总产率约７０％。     

人红细胞胞浆液中腺苷脱氨酶的分离

腺苷脱氨酶是机体重要腺苷代谢酶之一,能催化腺苷嘌呤环上6-位氨基脱氨,从而生成肌苷的氨解反应,与腺苷激酶、5′-核苷酸酶及 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶共同使机体腺苷水平保持相对稳定。文献报道人体组织中的腺苷脱氨酶分子有多种形式,其表观分子量分别为36000、114000、200000和298000。本文报告一种用亲和层析法,从人红细胞胞浆液中分离腺苷脱氨酶的新的简便快速方法。所采用的亲和层析胶,为 N~6-(6-氨己基)腺苷-Sepharose4 B 凝胶,是由N~6-(6-氨己基)腺苷与经溴化氰活化的 Sepharose4 B 胶偶联而成。人红细胞胞浆液中的腺苷脱氨酶,经两次亲和层析分离后,比活性提高了197倍,酶活性回收率为49%。高效液相凝胶排阻层析分析的结果表明,分离出的酶蛋白制剂含有表观分子量分别为36000、72000、114000和64000的四种蛋白质组分。其中前三种组分的表观分子量与文献报道基本相符。     

N^6—（6—氨基己基）—5‘—磷酸腺苷的合成

由肌苷开始经五步合成出Ｎ＾６－（６－氨基己基）－５＇－磷酸腺苷。对６－氯－９β－Ｄ－呋喃核糖嘌呤的合成进行了改进。１，６－己二胺同６－氯－９－β－Ｄ－呋喃核糖嘌呤－５＇－磷酸发生取代反应，合成出Ｎ＾６－（６－氨基己基）－５＇－磷酸泉甙，基于核苷的总产率约７０％。     

腺苷对大鼠心肌原蛋白I及磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

用差速离心及等密度离心法从大白鼠心肌细胞中分离收缩蛋白质及质膜,分别与[γ-~(32)P]ATP 保温,观察细胞成分的磷酸化,以及腺苷或腺苷类似物对磷酸化的影响.结果表明,在收缩蛋白质组分,~(32)P 主要掺入肌原蛋白Ⅰ(TroponinⅠ,29000Da);在质膜组分、~(32)P主要掺入磷脂酰肌醇-4-—磷酸(PtdIns-4-P);也就是 ATP 使磷脂酰肌醇(PtdIns)磷酸化。腺苷对此两种磷酸化都有抑制作用,尤以对PtdIns 的磷酸化抑制作用最强。cAMP 对肌原蛋白Ⅰ的磷酸化有刺激作用,这与文献报道相符.作者认为腺苷和 cAMP 对肌原蛋白Ⅰ磷酸化的拮抗作用,与腺苷和肾上腺素对心肌调节的拮抗作用有明显的相关性。鉴于近年发现肌醇磷脂转换在调节细胞活动中起有重要作用,腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用,可能具有重要的生物学意义。     

山楂生物膜磷脂组成的研究

本文用硅胶薄板进行单向层析,从山楂的不同组织和细胞器中分离出了7种膜磷脂:磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰已醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰丝氨酸(PS)磷脂酸(PA)和溶血磷脂酰胆碱(LPL).除定性分析外,对山楂不同组织和器官中膜磷脂的含量进行了测定比较。     

腺苷对大鼠心肌钙蛋白 I 及磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

用差速离心及等密度梯度离心法从大白鼠心肌细胞分离收缩蛋白质及质膜,分别与[γ—~(32)P]ATP 保温以观察细胞成分的磷酸化,以及腺苷和腺苷类似物对磷酸化的影响。结果表明,在收缩蛋白质组分,~(32)P 主要参入肌钙蛋白 I(Troponin1,29000Da);在质膜组分,~(32)P 主要参入磷脂酰肌醇-4-一磷酸(Ptd Ins4P),亦即 TAP 使磷脂酰肌醇(PtdIns)磷酸化。腺苷对此两种磷酸化都有抑制作用,尤以对 Ptd Ins 磷酸化的抑制最强烈。cAMP 对肌钙蛋白 I 的磷酸化有剌激作用,这与文献报道相符。作者认为,腺苷和 cAMP 对肌钙蛋白 I 磷酸化的拮抗作用与腺苷和肾上腺素对心肌调节的拮抗作用有明显的相关性。鉴于近年发现,肌醇磷脂转换在调节细胞活动中起重要作用,腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用可能有重要的生物学意义。     

重组人磷脂酰肌醇3-激酶p110β催化亚基的原核表达

目的：表达人磷脂酰肌醇3－激酶p110β催化亚基。方法：将构建有人磷脂酰肌醇3－激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K)p110β催化亚基cDNA的重组质粒，转化大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG进行诱导表达。用磷脂酰肌醇－4、5－二磷酸、[γ-^32P]ATP与重组PI 3－K p110β催化亚基一起保温的方法测定PI 3－K的活性；^32P标记的磷脂用氯仿和甲醇抽提、板薄层层析和放射自显影来分析。结果：SDS－PAGE显示表达出－110kD的新蛋白质分子，重组蛋白占菌体总蛋白的比例为15％，大多数重组蛋白以可溶性形成存在。wortmannin是PI3－K特异的抑制剂，wortmannin对重组PI 3－K p110β亚基有抑制作用，这种抑制作用呈剂量依赖关系（2.5-20nmol/L)。结论：重组蛋白是有活性的人PI3－Kp110β催化亚基。     

Wortmannin对凝血酶诱导的人血小板聚集和3┐磷酸化肌醇磷脂累积的影响

Ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ是能引起动物出血的真菌代谢产物,它是肌醇磷脂－３－激酶的不可逆抑制剂。Ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ对血小板的多种抑制作用已被广泛研究。用比浊法分析血小板聚集;用［γ－３２Ｐ］标记磷酸化肌醇磷脂;用氯仿和甲醇抽提磷酸化肌醇磷脂;用ＴＬＣ和放...     

肝素等药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响

用~(32)P标记法研究肝素等药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响,结果表明:肝素和新霉素对磷脂     

Tyrphostin AG555对重组人磷脂酰肌醇3-激酶pll0 β催化亚基的影响

磷脂酰肌醇 3 -激酶 (P13 - K)是多磷脂酰肌醇通路中一个重要的效应器和涉及信号转导、细胞转化的关键酶。P13 - K根据结构的相似性和底物的特殊性可分为 3种类型 ,其中第一种类型的 P13 - K是由 85 k D(p85 α和 p85 β)调节亚基和 110 k D(p110 α、p110 β和 p110 δ)催化亚     

用消化定磷法和光散射法定量测定磷脂酰肌醇4，5－二磷酸

用消化定磷法和光散射法定量测定磷脂酰肌醇４，５－二磷酸曾湘涛，刘郴淑，李丽清民航湛江机场卫生所检验室，湛江５２４０００广东医学院附属医院中心药房，湛江５２４００１多磷酸肌醇磷脂是细胞膜上含量较低的磷脂，在细胞的信号传递中起着重要的作用［１，２］。长期...     

EGF对人鼻咽癌细胞体外生长和膜蛋白磷酸化与肌醇磷脂磷酸化的影响

本文观察了表皮生长因子（ＥＧＦ）与人低分化鼻咽癌上皮细胞系 　ＣＮＥ－２ Ｚ在软琼脂培养基上集落形成能力及膜蛋白、膜肌醇磷脂磷酸化的关系。 结果表明：（１）ＥＧＦ经受体介导，低浓度时（０．０１～０．１７ｎｍｏｌ／Ｌ）促进细胞生 长，高浓度时（≥１．６７ｎｍｏｌ／Ｌ）抑制细胞生长；（２） ＥＧＦ促进膜蛋白磷酸化反 应；（３） ＥＧＦ促进膜肌醇磷脂转换。提示了ＥＧＦ对ＣＮＥ－ ２ Ｚ细胞体外生长的影 响与其促进膜蛋白磷酸化和膜肌醇磷脂转换有关。本文根据实验结果探讨了ＥＧＦ 与人鼻咽癌的关系。     

17β-雌二醇-黄素腺嘌呤二核苷酸结合物的合成

根据ＡＲＩＳ的需要,设计出标题物的分子结构模型。以黄素－５′－单磷酸、６－酮－１７β－雌二醇羧甲基肟和Ｎ６－（６－氨基己基）腺苷－５′－单磷酸为原料,经过３步反应合成出标题物。采用酶激活试验和免疫抑制试验确证了标题物的结构。     

肝素等药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响

在Mg~(2+)存在下,用(γ-~(32)P)ATP与猪红细胞膜保温(30℃)3min,观察一些药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响。用氯仿:甲醇中止反应。用酸性氯仿:甲醇混合液抽提磷脂及硅胶板TLC分离磷脂。经放射自显影及液体闪烁计数测定生成的(~(32)P)-磷脂酰肌醇-4-磷酸。结果表明①肝素和新霉素对磷脂酰肌醇磷酸化有抑制作用;②六氯环己烷对磷脂酰肌醇磷酸化有促进作用;③Li_2SO_4(10mmol/L)、EGTA(100μmol/L)、茶硷(100μmol/L)作用不明显;④二甲亚矾在低浓度时有促进作用,而在较高浓度时则有抑制作用。结果提示上述作用可能与这些药物的作用机理有关。     

17β—雌二醇—黄素腺嘌呤二核苷酸结合物的合成

根据ＡＲＩＳ的需要,设计出标题物的分子结构模型,以黄素－５‘－单磷酸,６－酮－１７℃－雌二醇羧甲基肟和Ｎ＾６－（６－氨基己基）腺苷－５’－单磷酸为原料,经过３步反应合成出标题物。采用酶激活试验和免疫抑制试验验证了标题物的结构。     

精胺对猪血小板膜中肌醇磷脂和蛋白质磷酸化的影响

用猪血小板膜与(r-~(32)P)ATP进行磷酸化反应,观察精胺对肌醇磷脂和蛋白质磷酸化的影响.结果表明:(1)对磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸的生成有明显促进作用;(2)对血小板中47KDa蛋白质磷酸化有强烈抑制作用(IC_(50)≈1.0mmol/L)。精胺的这些作用可能与其生理作用机理有关。     

大豆磷脂的开发利用

大豆磷脂是毛油精炼过程中得到的一种副产物。通常商业上获取的磷脂是一种成分复杂的混合物 ,主要含有 1 9%～ 2 0 %的卵磷脂 (磷脂酰胆碱PC)、8%～ 2 0 %脑磷脂 (磷脂酰乙醇胺 PE)、2 0 %～2 1 %的磷脂酰肌醇 PI及磷脂酰丝氨酸等。根据磷脂的性质与功能 ,磷脂常作为乳化剂、分