蝇蛆几丁糖对几种植物病原真菌的抑制作用

观察了由蝇蛆壳制备而成的几丁糖（壳聚糖）,在ｐＨ５．６、１ｍｇ／ｍｌ时１６种常见植物病原真菌的生长抑制作用,以及几丁糖含量分别在０．７５、１．５、３．０、６．０ｍｇ／ｍｌ时对菌丝生长的抑制情况,发现几丁糖具有广谱的抑菌特性,而且随几丁糖浓度的提高,其抑制率也相应提高,但当几丁糖浓度达到３．０ｍｇ／ｍｌ以后,抑制率又保持相对稳定,从抑菌效果来看,几丁糖对丝核菌的抑制效果高,而对棉炭疽病及茄枯萎病菌则     

蝇蛆几丁糖抑菌机理的初步研究

蝇蛆脱乙酰几丁质(几丁糖)可抑制多种植物病原真菌的生长。赖凡等研究发现在供试的16种植物病原真菌中,蝇蛆几丁糖除对棉花炭疽病菌、茄枯萎病菌没有明显的抑制作用外,对其它14种真菌均表现出一定的抑制效果,体现出广谱的抑菌性,其中对立枯丝核菌、花生白绢病菌、水稻纹枯病菌表现出强烈的抑菌效果[1]。几丁糖对植物病原真菌的抑制效果愈来愈受到人们的关注,为弄清几丁糖对病原真菌的抑菌机理,笔者从1997～1998年进行了一些探索性研究。1　材料与方法1.1　供试材料1)虫源。家蝇ＭｕｓｃａｄｏｍｅｓｔｉｃａｖｉｃｉｎａＭａｃｇｕａｒｔ幼…     

木霉几丁质酶和几丁寡糖的制备及提纯

[目的]为木霉几丁质酶和几丁寡糖的开发应用提供必要的技术支持。[方法]由高产几丁质酶的木霉菌株YHS-1液体振荡培养得到木霉几丁质酶粗酶液,分别测定了木霉菌株YHS-1在不同时间、不同温度下的几丁质酶活值,优化木霉产酶条件。并研究了几丁寡糖的制备及提纯方法。[结果]供试木霉最佳产酶温度为35℃,最佳产酶时间为4 d,此时酶活值为55 U。几丁质酶粗酶液通过(NH4)2SO4分级沉淀、阴离子交换柱层析、SDS-PAGE提纯后可以达到层析纯,出现单一并且峰值很高的层析峰,电泳确认2条带,分别为几丁质外切酶和几丁质内切酶。几丁寡糖用初提纯的几丁质酶与过量的胶态几丁质反应得到粗溶液,再经过蛋白质沉淀和冷冻离心后得到纯化。[结论]建立了木霉几丁质酶和几丁寡糖的制备及提纯方法,为木霉几丁质酶和几丁寡糖的开发应用提供了必要的技术支持。     

蝇蛆几丁糖对几种细菌抑制作用的研究

蝇蛆几丁糖对３种细菌均表现出不同程度的抑制作用,但在不同ｐＨ值条件下的抑菌效果不同,以ｐＨ５．５条件下抑菌效果较好,且随几丁糖质量浓度的升高,抑菌效果也相应增加。     

HPLC-CAD分析在几丁寡糖激发子制备中的应用

研究通过摸索正相液相色谱条件,分析了几丁寡糖标准品.再定性定量分析蟹壳的几丁质酶酶解产物,为二次利用螃蟹壳制备寡糖激发子寻找合适的产物分析方法.结果表明:在氨基柱(Shodex NH2P-504E Asahipak)上,流动相(30%水 70%乙腈)以0.5ml/min等度洗脱,几丁寡糖标准品可得到基线分离.螃蟹壳酶解产物中主要为几丁二糖、三糖及N-乙酰葡萄糖胺(NAG)(收率2.04%、1.475%和0.585%).简单前处理后的蟹壳粉即可被几丁质酶有效地降解,表明二次利用螃蟹壳制备几丁寡糖激发子,并利用正相高效液相色谱进行产物分析是可行的.     

蝇蛆几丁糖的免疫调节作用研究

以化学方法制备的蝇明几丁糖，按不同剂量喂饲实验动物小鼠，检测其对小鼠器官，细胞免疫、体液免疫、吞噬功能及ＮＫ细胞性的影响，结果表明：蝇明几丁糖０．１０、０．２０ｍｌ／１０ｇ体重剂量组对小鼠胸腺／脏体比、脾脏＝脏体比有显著增高作用，能使细胞免疫（ＤＴＨ）、体液免疫（ＨＣ５０）、单核－巨噬细胞功能及ＮＫ细胞活性增强。     

蝇蛆几丁糖保健功能的评价

以化学方法制备的蝇蛆脱乙酰几丁糖,按不同剂量喂饲试验动物雄性大鼠,检测其对试验动物的降血脂作用,结果表明：蝇蛆几丁糖能显著降低大鼠血清总胆固醇（ＴＣ）和甘油三酯（ＴＧ）水平。以蝇明几丁糖不同剂量喂饲昆明小鼠,检测其对小鼠抗突变和促进小肠运动作用的影响,结果表明：蝇蛆几丁糖可明显降低致突物环磷酰胺对小鼠骨髓嗜多染红细胞的微核发生率和丝裂霉素Ｃ对小鼠睾丸染色体畸变发生率,对ＴＡ９８的抗突变试验结果为阳     

脱乙酰几丁质酶降解产物的纸层析分析

对本实验室筛选保存的几株产脱乙酰几丁质酶菌株的产酶条件,如pH值、氮源和金属离子进行初步研究,结果表明,其酶作用最适pH范围为5.0～6.0,氮源及Cu2 、Co2 和Mn2 对脱乙酰几丁质酶有不同程度的促进作用,Zn2 对脱乙酰几丁质酶有较强的抑制作用。用纸层析测定这些菌株在不同产酶条件下发酵产物中壳寡糖的含量和成分,根据产物情况推测酶作用方式,表明不同条件下得到壳寡糖有所变化。     

产几丁质酶链霉菌SO1菌株的筛选及培养条件

从土样中分离获得的链霉菌ＳＯ１菌株在产酶培养基中，２８℃振荡培养７天，其胞外几丁质酶活力可达１８０９ｕ／ｍｌ。实验表明，不同碳、氮源及诱导物对ＳＯ１菌株产几丁质酶有不同的影响，以酵母粉对产酶的促进作用最为明显，比对照提高了７５．２％。部分脱乙酰几丁质、胶体几丁质及几丁质均可作为ＳＯ１菌株产几丁质酶的诱导物，其中以几丁质诱导产酶的效果最好。     

甲壳素衍生物在农业上的应用及展望

甲壳素又称几丁质,是由Ｎ－乙酰氨基葡萄糖通过β－１,４－糖苷键连接起来的不分枝的链状高分子化合物,甲壳素在甲壳素酶类作用下或用其他化学方法可产生一系列甲壳素衍生物,如脱乙酰几丁质（又称壳聚糖）、羧甲基壳聚糖、羟乙基几丁质、几丁寡聚糖、氨基葡萄糖等。这...     

植物几丁酶的分子生物学研究进展

综合评述了近年来植物几丁酶的结构与功能、基因表达和调节、录译后加工及分类研究方面所取得的进展．植物几丁酶前体均含Ｎ－端信号肽和催化区，有的还有几丁质结合区和Ｃ－端液泡导向区；植物几丁酶绝大多数可由病原物等生物因素或乙烯等非生物因素诱导，并有组织专化性，有些受发育调节；译后几丁酶前体切除Ｎ－端信号肽→脯氨酸羟基化→切除Ｃ－端信号肽而成为成熟蛋白；几丁酶的分类目前存在两个系统，分别将几丁酶分为５类（ｃｌａｓｓ）或将几丁酶基因分４组（ｇｒｏｕｐ）．     

贵州木霉NJAU4742几丁质酶基因chi8的克隆、表达和酶学特性研究

[目的]本研究旨在从贵州木霉(Trichoderma guizhouense NJAU4742)菌株中克隆、表达几丁质酶基因chi8并深入研究其酶学特性,分析Chi8水解胶体几丁质的产物,为其在农业生产中的实际应用提供理论依据。[方法]基于序列比对获取chi8与其他几丁质酶基因的同源关系,并设计引物扩增得到完整的chi8序列,利用pET-29a质粒和大肠杆菌BL21进行异源表达;经镍柱纯化后并研究Chi8酶学特性;利用MALDI-TOF/MS检测Chi8水解胶体几丁质的最终产物;基于同源建模法构建Chi8的三维模型并与几丁六糖进行对接获取其催化相关位点信息。[结果]本试验克隆、表达得到的Chi8与哈茨木霉几丁质酶(ACM47359)的序列相似度为93.38%;Chi8在30～40℃酶活性较高且能保持较好的热稳定性,在pH6.0时酶活性为0.50 U·μmol~(-1)·h~(-1);Ca~(2+)可以显著提高Chi8的酶活性,可达到原酶活性的110.62%,而Co~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)均有抑制作用,与酶作用后Chi8酶活性下降至原酶活性的89.70%、60.17%和5.93%;在酸性条件下,Chi8水解胶体几丁质的最终产物主要为几丁二糖[(GlcNAc)_2]。Chi8同源建模结果表明,其含有18个螺旋和15个β-折叠,末端的IMD残基可形成1个咪唑环;底物对接结果表明,Chi8中Asn197、Trp110、Tyr218、Arg274、Arg31可以与几丁六糖形成氢键,可能为该蛋白的活性中心。[结论]本试验克隆、表达得到的几丁质酶Chi8具有良好的生化特性,能够高效水解胶体几丁质并生成壳寡糖,产物主要为几丁二糖。     

甘蔗每公顷产糖15吨配套技术

甘蔗单位面积效益值的高低取决于单位面积的原料蔗产量及蔗糖分含量，而原料蔗产量是基础，蔗糖分则是核心，只有两者的相对统一，才可获得最佳效益。如何使二者得以统一，实现高产、高糖，获得最佳效益，即是本文研究的着力点。１９９３年列项对甘蔗每公顷产糖１５吨进行配套技术研究．以提高单位面积产糖量为目的，着力于良种的推广和高产、高糖综合配套技术的研究应用，结果表明：此套技术投资省、操作简便、农民易接受，并得出每公顷产糖１５吨的主要构成指标是：有效茎１０．５万株／公顷，单茎重１．３５千克，原料茎产量１４１．７５吨／公顷，产糖率１０．８０％以上。     

草酸对黄瓜叶片几种与抗病有关酶的系统诱导作用

试验用盆栽黄瓜为材料,研究了草酸对黄瓜叶片中几种下抗病有关的酶的系统诱导作用,结果表明：０．０４ｍｏｌ／Ｌ的草酸诱导几丁质酶总活性的效果最好,草酸和圆刺盘孢菌在１～７ｄ内可诱导几丁质谱活性持续提高,第７ｄ挑战接种后活性继续上升,草酸和圆刺盘孢菌诱导的内切几丁质酶活性提高的倍数显著大于外切几丁质酶,在１～１１ｄ内,草酸对苯丙氨酸解胺酶的诱导效果不明显,而圆刺盘孢菌诱导该酶活性从第４ｄ开始上升,草酸和     

产几丁质酶烟草内生细菌的筛选及产酶条件研究

从健康烟草叶片中筛选出一株产几丁质酶活性较高的内生细菌FEC-1，经16SrDNA基因序列和菌株生理生化特征分析，确定该菌株为环状芽孢杆菌。对FEC-1菌株产酶发酵条件研究表明，该几丁质酶是诱导酶，最佳氮、碳源是酵母膏和2g／L单糖或二糖，多糖效果相对较差，最适初始pH为9．0左右，最适温度为30℃左右。在优化条件下，摇瓶培养60h时产酶达123．16U／mL。     

蝇蛆几丁低聚糖抑菌作用的初步研究

 研究了蝇蛆几丁低聚糖对主要农作物种子病原菌和一些果蔬腐烂菌的抑制作用,并探索影响其抗菌活性的主要因子。结果表明,蝇蛆几丁低聚糖具有广谱的抗菌活性,对测试的32种农作物病原真菌和果蔬腐烂真菌中的花生白绢菌等31种有较好的抑制作用;蝇蛆几丁低聚糖的抗菌活性与脱乙酰度和分子量大小有关,随着脱乙酰度的增加,几丁低聚糖的抗菌活性逐渐增强,随着分子量的增大,几丁低聚糖的抗菌活性逐渐下降。盆栽试验结果表明,蝇蛆几丁低聚糖处理玉米、小麦和棉花种子,可以提高发芽率和出苗率。蝇蛆几丁低聚糖喷雾处理对玉米苗期小斑病具有一定的防病     

壳寡糖和几丁寡糖的制备方法及其在水产上的应用

人们期望无污染、无残留的绿色水产品。但近年来,随着水产养殖密度和规模迅速扩大,水产动物病害频发,滥用抗生素所导致的菌株耐药性等问题逐渐凸显,这给水产养殖可持续发展、绿色发展带来挑战。而壳寡糖和几丁寡糖由于无毒、无害、无残留,具有多种生物活性功能且来源广泛,逐渐被众多学者重视并研究。壳寡糖是几丁质或者壳聚糖经过酶解法、化学法或者物理法而获得的低聚糖,几丁寡糖是几丁质的降解产物或壳寡糖的乙酰化产物。目前,有关壳寡糖和几丁寡糖作为绿色的饲料添加剂、疫苗佐剂和水产品保水保鲜剂的研究已经开展,其在水产养殖中具有非常广阔的发展空间和应用前景。基于此,对壳寡糖和几丁寡糖的制备方法进行了总结,探讨了壳寡糖和几丁寡糖在水产动物饲料添加剂、疫苗佐剂和水产品保水保鲜中的应用,突出其调节水生动物免疫、促生长、抗氧化、影响鱼类体成分等方面的生物活性,以期为壳寡糖和几丁寡糖在水产上的深入研究和产业化应用提供参考。     

昆虫糖基水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶研究进展

糖基水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶是N-乙酰己糖胺代谢过程中一个重要的酶,其可将位于非还原端以β糖苷键连接的N-乙酰己糖胺从寡糖及糖复合物中水解下来。昆虫糖基水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶参与昆虫多个生理过程,包括表皮几丁质水解、蛋白质N糖基化修饰、糖复合物水解及精卵识别,因此可能成为生态农药设计的潜在靶标,受到国内外学者的普遍关注。根据昆虫20家族β-N-乙酰己糖胺酶的进化关系和生理功能,可以将其分为4个亚家族,分别为Hex1、Hex2、Hex3和Hex4。Hex1主要在昆虫蜕皮时期的表皮中表达,RNA干扰该基因能够导致昆虫在发育过程中不能正常蜕皮而死亡。通过酶学性质研究发现,Hex1能够专一性水解以β 1-4糖苷键连接的几丁质寡糖底物,而不能水解以其他形式连接的底物,是专一性的参与几丁质水解的β-N-乙酰己糖胺酶。目前获得的唯一一个昆虫β-N-乙酰己糖胺酶的晶体结构来自于亚洲玉米螟的OfHex1,其参与底物结合的“+1”位点存在一个特殊的三明治结构,使得Hex1对几丁质寡糖具有高度的选择性和水解活性。Hex2在双翅目昆虫中并不存在,与人类的β-N-乙酰己糖胺酶具有高度的相似性,RNA干扰该基因的表达能够导致幼虫化蛹时异常,成虫翅、附肢、触角等异常。通过酶学性质研究表明,Hex2能够水解释放几丁质寡糖,糖复合物等底物中的β-N-乙酰己糖胺,具有广泛的底物谱。Hex2的功能可能与人类Hex酶的功能类似,参与糖复合物的水解。Hex3是目前研究较少的一类β-N-乙酰己糖胺酶,RNA干扰该基因的表达能够导致幼虫蜕皮过程异常。Hex3存在于昆虫蜕皮液中,与Hex1存在相互作用,可能形成二聚体。通过酶学性质研究表明,Hex3能够水解几丁质寡糖底物,但活性较弱,说明其可能参与几丁质的水解。此外,Hex3、Hex1和Hex4被发现存在于双翅目昆虫精子的表面,可能参与精卵识别过程。Hex4又被称为FDL,是因为该基因的缺失能够导致果蝇左右大脑发生融合（fused lobe）。它是另外一种具有严格底物选择性的β-N-乙酰己糖胺酶,能够专一性地水解糖复合物GnGn中α1-3分支上以β 1-2糖苷键连接的GlcNAc β 1-2Man,通过细胞定位研究表明Hex4主要存在于高尔基体当中。以上表明Hex4的主要功能是参与细胞内的糖基化修饰过程。尽管目前对于昆虫β-N-乙酰己糖胺酶的研究取得了很大的进展。对Hex1的功能、酶学性质和晶体结构研究得较为透彻,对于设计环境友好的杀虫剂具有较强的指导意义。但其他3种β-N-乙酰己糖胺酶在生理条件下如何发挥功能,以及4种β-N-乙酰己糖胺酶活性差异的结构基础并不是十分清楚。作者从进化关系、晶体结构、酶学性质和生理功能等方面对昆虫糖基水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶的研究进展进行综述。     

微生物几丁质酶在植物病害生物防治中的应用

生防菌几丁质酶能水解病原菌细菌壁的几丁质，抑制病原菌的生长、增殖；几丁寡糖（几丁质酶酶解几丁质的产物）具有抗菌、抑菌功率，可直接杀死病原菌。几丁寡糖还可作为植物功能调节剂，调节、促进植物的生长发育，并可作为激发子启动植物的防御反应，使植物产生更多的防御蛋白以增强植物对病原物的抗性，免受病原物的进一步侵害。     

化学合成的几丁寡糖类似物诱导黄瓜对镰孢霉枯萎病的抗性

    报道3种化学合成的寡糖(β-1,3-乙酰氨基葡聚二糖,β-1,3-乙酰氨基葡聚三糖和Lewisa三糖)诱导黄瓜对镰孢霉枯萎病(Fusarium oxysporum f. sp. cucumerium)的抗性.在黄瓜胚根期,β-1,3-乙酰氨基葡聚二糖和β-1,3-乙酰氨基葡聚三糖浸泡种子胚根后,表现抗病性,相对诱导抗性效果分别为21.9和22.3,β-1, 3-乙酰氨基葡聚糖的最低有效诱导浓度为5 μg·mL-1;而Lewisa三糖处理不表现抗病性.在黄瓜幼苗期,用β-1,3-乙酰氨基葡聚二糖和β-1,3-乙酰氨基葡聚三糖叶面喷雾,均表现抗病性,相对诱导抗性效果分别是28.5和23.5,β-1,3-乙酰氨基葡聚糖的最低有效诱导浓度为10 μg·mL-1;而Lewisa三糖同样处理后不表现抗性.化学合成的几丁寡糖类似物(β-1,3-乙酰氨基葡聚二糖和β-1,3-乙酰氨基葡聚三糖)和Lewisa三糖诱导黄瓜抗性的差异可能是由于糖残基、还原末端取代基及(或)其主链结构的差异.