支气管败血波氏杆菌PRN黏附素R1区蛋白的免疫原性

百日咳杆菌黏附素(PRN)是支气管败血波氏杆菌最重要的保护性抗原.为研究PRN的R1区多肽的免疫原性,分别将prn基因的全长编码区2 040 bp及5'端1 173 bp的片段(prnR1)克隆到原核表达载体pGEX-KG,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达.SDS-PAGE和Western blot检测证实2种表达产物GST-R1和GST-PRN均具有良好的免疫学反应活性.在主动免疫保护试验中,GST-R1和GST-PRN免疫组小鼠均能产生较高的PRN抗体水平;当使用3 LD50的Bb强毒株HH0809进行鼻腔攻毒后,其保护率均为100%(9/9);当使用10 LD50HH0809攻毒时,其保护率分别为33.3%(3/9)和77.8%(7/9).在被动免疫保护试验中,腹腔免疫GST-R1和GST-PRN兔抗血清均能100%(10/10)保护小鼠抵抗10 LD50 HH0809的腹腔攻击,但经PRN吸附后的2种兔抗血清均失去了保护力(0/5).这些研究结果表明,重组PRN的N端R1区多肽具有良好的免疫原性.     

支气管败血波氏杆菌的研究进展

支气管败血波氏杆菌是广泛感染多种哺乳动物,有时也感染人的一种常在病原菌。该菌属于波氏杆菌属,借其粘附素和毒素对宿主致病,引起感染动物的呼吸道疾病,并协同其他病原菌形成严重的肺部混合感染,备受人们的广泛关注。本文对该菌的形态特征、培养特性、抗原性、致病情况以及相关研究进展进行了简要概述,以提供人们对支气管败血波氏杆菌的了解。     

支气管败血波氏杆菌表面提取物蛋白成份分析

利用超声波处理结合TritonX-100溶解法制备了10株支气管败血波氏杆菌的表面提高取物，经SDS－PAGE证明Ⅰ相菌株和Ⅲ相菌株的表面蛋白组成及含量存在明显差异，有8种蛋白成份，（123K、112K、102K、91K、77．6K、76K、29．5K和27．5K）为Ⅰ相菌株所特有，另有4种蛋白成份（114．8K、83K、25K和21K）在Ⅲ相菌株中含量减少，结果表明，支气管败血液氏杆菌发生变异与表面蛋白组成的改变有关。     

禽波氏杆菌与支气管败血波氏杆菌的生物学特性比较研究

本试验从菌体形态，培养特性、生化特性，血清学特性、致病性，药敏特性等方面对禽波氏杆菌与支气管败血波氏杆菌进行了比较，结果表明：二者在形态结构，生化特性等方面比较一致，在培养特性，血清学特性，致病性等方面存在差异。     

兔支气管败血波氏杆菌DNT蛋白的分段表达及其免疫保护性研究

皮肤坏死毒素(DNT)是支气管败血波氏杆菌(Bb)的主要毒力因子之一。为研究DNT结合位点和催化位点的免疫保护性,本研究分别将其核苷酸序列N-端的1 612 bp片段(DNT1)和C-端的973 bp片段(DNT3)克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,经IPTG诱导后在E.coli BL21(DE3)中获得表达。SDS-PAGE和western blot检测表明重组蛋白DNT1、DNT3均具有良好的反应原性。在主动免疫保护试验中,重组蛋白免疫组小鼠均能够产生较高的DNT抗体水平;当使用2 LD50的Bb强毒株BJL0504进行腹腔攻毒后,其存活率为100%,而阴性对照组则为40%;当使用1.07×108 cfu/mL Bb强毒株BJL0504进行滴鼻攻毒后第9 d时,重组蛋白免疫组小鼠已基本清除肺脏内的Bb菌,而阴性对照组小鼠肺脏内的Bb菌落数仍高达1.2×105 cfu/肺。本实验结果表明,DNT的结合位点和催化位点均具有良好的免疫保护性,有希望作为疫苗添加成分,为新型疫苗的研制提供实验依据。     

兔支气管败血波氏杆菌PRN基因缺失突变株的构建及特性研究

利用自杀性质粒构建兔支气管败血波氏杆菌百日咳黏附素(PRN)缺失突变株以研究PRN在支气管败血波氏杆菌(Bb)致病机理中的作用,同时为支气管败血波氏杆菌病减毒活疫苗的研究提供理论依据.PCR扩增出PRN1(PRN上游基因)和PRN2(PRN下游基因)2个目的基因片段,运用基因重组技术将庆大霉素抗性基因(GM)连接到PRN1和PRN2之间,将连接好的基因片段克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建自杀性载体pMEG375-PRN1-GM-PRN2,将其转化到宿主菌SM-10中,通过宿主菌SM-10与受体菌Bb固相滤膜交配,自杀性载体转移到受体菌,根据同源重组原理,抗性筛选得到基因缺失突变株,命名为Bb(△PRN).对突变株Bb(△PRN)与野生株WT进行了遗传稳定性、生长特性、溶血特性、细胞黏附特性、毒力、免疫保护性等比较研究.结果表明:Bb(△PRN)具有遗传稳定性;与野生株相比,突变株生长速度较慢,毒力有所下降,溶血活性及对Hep-2细胞的黏附能力没有明显变化;小鼠免疫原性试验结果显示,突变株免疫小鼠后可以产生强有力的免疫力,能够抵抗野生株的攻击.Bb(△PRN)突变株构建成功并具有良好的免疫原性,为支气管败血波氏杆菌病减毒活疫苗的研究奠定了基础.     

家兔支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定

从2只病死幼兔的心血和肺脏中,分离到2株细菌,通过对其培养特性、形态学观察和生化特性的研究,初步鉴定为兔支气管败血波氏杆菌。     

獭兔支气管败血波氏杆菌病的诊治

２００１年３～４月间，我区３个獭兔养殖场饲养的美系獭兔相继发生了一种以呼吸困难、精神沉郁和慢性死亡为主要症状的传染病，发病率虽较高，但死亡率不太高。病兔多为１～３日龄幼兔。综合流行病学、临床症状、病理剖检、实验室诊断，最后确认为支气管败血波氏杆菌病。现将结果报道如下。１临床症状病兔早期精神不振，食欲降低。后期表现为精神高度沉郁、食欲废绝、呼吸迫促，最后发展为呼吸困难，呈现腹式呼吸。多数的病兔鼻腔流出粘液性甚至脓性分泌物，随着病程的延长，患兔逐渐消瘦，最后死亡。该病病程较长，一般经过７～１５天死亡…     

兔支气管败血波氏杆菌PCR检测方法的建立及应用

根据支气管败血波氏杆菌菌毛蛋白基因(fimN)序列设计了一对引物,扩增出大小为648bp的目的基因片段,建立了快速检测兔支气管败血波氏杆菌的PCR方法。特异性和敏感性试验表明,该方法对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌和巴氏杆菌均无交叉性反应。用该PCR法检测了从杨凌、咸阳采集的50份表现临床症状的兔呼吸道分泌物检出支气管败血波氏杆菌阳性35例,阳性率为70%。同时与传统的细菌检查法、微量凝集法进行了比较,结果显示,该PCR法的检出率是细菌检查法的3.89倍,是微量凝集法的1.94倍。     

肉兔支气管败血波氏杆菌病的疹治

1999年 4月 ,山东临沂地区某养兔场饲养的 3月龄新西兰肉兔发生一种以呼吸困难、精神沉郁和慢性死亡为主要症状的传染病 ,发病率较高 ,但死亡率不太高。综合流行病学、临床症状、病理剖检以及实验室诊断 ,最后确诊为支气管败血波氏杆菌病。1　发病情况及临床症状病兔早期症状为精神不振、食欲降低。后期表现为精神高度沉郁 ,食欲废绝 ,呼吸困难 ,多数病例鼻腔流出粘液性甚至脓性分泌物。随着病程延长 ,患兔逐渐消瘦 ,最后死亡。病程较长 ,一般经过 7～ 30天死亡 ,每天死亡 3～ 1 0只不等 ,发病率为 40 %,死亡率约为 1 6%。2　病理剖检变化前…     

猪支气管败血波氏杆菌菌毛fimD基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立

参照GenBank上支气管败血波氏杆菌的菌毛fimD基因序列（X75811）,设计1对引物,从本实验室分离鉴定的猪源支气管败血波氏杆菌中扩增出fimD编码区1098bp的片段,将其克隆至原核表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行融合表达。SDS-PAGE和Western blot检测证实该表达产物以包涵体形式存在,大小约42ku,与用支气管败血波氏杆菌菌体制备的阳性血清能发生特异性反应。将包涵体变性和复性后包被酶标板建立间接ELISA（fimD-ELISA）,特异性良好。用fimD-ELISA检测临床送检的668份血清,阳性率为30．7％。用该法与微量凝集试验平行检测102份血清,fimD-ELISA的敏感性高于微量凝集试验。     

家兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定

从病死兔的肺部病变组织中分离到6株细菌,对其形态学、培养特性、生化试验、血清学反应、毒力测定和药物敏感性试验等进行研究。结果表明,分离菌株均属支气管败血波氏杆菌,具有较高的致病性;6株菌对四环素、左氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、阿奇霉素等呈高度敏感。     

兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定

山东莱州某兔场饲养有2000只种兔,2007年4月份起,部分兔出现打喷嚏、流鼻涕现象;有的病兔被毛蓬松,精神不振;2~3 d后,有的病兔鼻孔发现有粘液性或脓性分泌物,呼吸困难。全场发病率约45%;发病期间,每天死亡2~5只不等,多为40日龄左右幼兔,病死率约10%。笔者对送检病兔通过病原分离鉴定和生物学特性试验,确诊为兔支气管败血波氏杆菌感染。现将试验情况报告如下。1材料与方法1.1材料①病料:山东莱州某兔场送检的病兔。②培养基:鲜血琼脂平板、麦康凯琼脂平板、马丁肉汤,按常规方法自制。③生化发酵管:购自山东省卫生防疫站。④药敏试验纸片:购自…     

肉兔支气管败血波氏杆菌病的诊治

山东临沂地区某养兔场饲养新西兰肉兔２０００只,１９９９年４月,３月龄的肉兔发生一种以呼吸困难、精神沉郁和慢性死亡为主要症状的传染病。主要剖检病变为肺脏充血、水肿、化脓灶和肉变区,发病率较高,但死亡率不高。综合流行病学、临床症状、病理剖检以及实验室诊断,最后确诊为肉兔支气管败血波氏杆菌病,现将诊治情况报道如下。１　发病情况及临床症状病兔早期症状为精神不振,食欲降低。后期表现为精神高度沉郁,食欲废绝,呼吸困难,多数病例鼻腔流出粘液性、甚至脓性分泌物。随着病程延长逐渐消瘦,最后死亡。病程较长,一般经过…     

长毛兔支气管败血波氏杆菌病的诊治

1发病情况 齐齐哈尔市碾子山区一养殖场,2004年春季,以几家入股形式从南方购进德系长毛兔200套,年龄在2～5月龄之间.采取笼式、舍饲饲养.购入第6天,部分兔出现呼吸道病症,发病率14%.经我站化验室诊断为兔支气管败血波氏杆菌病.