闽江流域福州过境段大肠杆菌毒素基因的定性定量分析与季节性变化

分别于不同季节在闽江流域福州过境段的洪山桥和解放大桥断面采集水样,进行大肠杆菌的分离、鉴定,用多元PCR方法对不同季节分离的大肠杆菌毒素基因的时空分布进行定性与定量分析。从分离的2 015株粪大肠杆菌中发现840株潜在的致病性大肠杆菌,分别属于肠出血性大肠杆菌（EHEC）、肠聚集性大肠杆菌（EAEC）、肠致病性大肠杆菌（EPEC）和肠产毒性大肠杆菌（ETEC）;检出的10种毒素基因中,以扩散性黏附素基因（aidA-1）、热稳定性肠毒素基因（astA）和耐药性因子（sepA）为最多;细菌总量、大肠杆菌总数和致病性大肠杆菌总数在冬季较少,春季较多,夏秋季节达到全年数量的高峰;潜在的致病性大肠杆菌毒素基因的种类和数量也是在冬季最少,春夏季上升,秋季最多。     

禽大肠杆菌O2、O78菌株外膜蛋白A基因扩增及序列分析

根据Genbank中大肠杆菌K-12外膜蛋白A基因的核苷酸序列设计引物,从禽大肠杆菌O为O2、O78及它们的融合株O2．78(Chl^rNor^r)中分别扩增得到外膜蛋白A基因(ompA),进行序列测定及分析发现3个菌株的ompA均由2276nt组成,核苷酸序列完全相同,只有一个大的开放性阅读框(ORF),长1041bp,编码由346个氨基酸组成的前外膜蛋白A(pro-OmpA),前21个氨基酸残基组成信号肽,成熟的OmpA由325个氨基酸残基组成,相对分子质量为37000．其氨基酸序列也完全相同．从基因水平上证明了禽大肠杆菌O2和O78菌株存在相同的外膜蛋白A抗原。     

大肠杆菌焦磷酸酶基因的克隆和序列分析

按ＣＴＡＢ法提取大肠杆菌Ｋ－１２的ＤＮＡ,应用ＰＣＲ技术获得目的基因片段（ＰＰａｓｅ基因）,低熔点胶回收后,在Ｔ４ＤＮＡ连接酶的作用下,将目的基因克隆到ｐＵＣｍ－Ｔ载体上,并转化ＪＭ１０９感受态菌中。转化获得的克隆提取质粒ＤＮＡ,０．８％琼脂糖凝胶电泳分析,并进行ＰＣＲ扩增鉴定、序列分析证明插入片段确为ＰＰａｓｅ基因。本文用ＰＣＲ技术扩增并克隆大肠杆菌焦磷酸酶基因,为导入甜菜选育高含糖量品种奠定基     

福州地区宠物犬源大肠杆菌耐药性及耐药基因调查

从福建农林大学校宠物医院采集健康和患病犬肛拭子50份(健康犬23份、患病犬27份),通过选择性培养基分离大肠杆菌,并采用肠杆菌科细菌生化鉴定管进行细菌鉴定;采用琼脂稀释法测定大肠杆菌对12种抗菌药物的敏感性,通过PCR检测耐药基因的携带情况.结果显示：分离的50株宠物犬源大肠杆菌对氟苯尼考的耐药率最高(86%),其次是四环素(50%)、庆大霉素(30%)、环丙沙星(28%)、卡那霉素(26%)、头孢噻呋(24%)、阿奇霉素(16%)、头孢他啶(14%)、阿米卡星(4%)、多黏菌素E(4%);所有菌株均对美罗培南和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑敏感;β-内酰胺类耐药基因以bla_TEM为主(检出率24%),四环素类耐药基因以tet(A)为主(检出率28%),氟喹诺酮类耐药基因则以qnrS(检出率18%)、qnrB(检出率14%)、oqxA(检出率14%)较为流行.综上,福州地区宠物犬源大肠杆菌的耐药状况严峻,且携带多种重要耐药基因,应加强对宠物细菌耐药性的监测与管理.     

犊牛腹泻大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的序列测定及分析、

将PCR方法扩增出的犊牛腹泻大肠杆菌Ler、eaeA、irp2和fyuA基因片段产物进行胶回收,连接到pMD18-T Vector上转化DH5α感受态细胞后送TaKaRa公司测序。结果表明犊牛腹泻大肠杆菌Ler、eaeA、irp2和fyuA基因片段的PCR扩增产物分别是196 bp、552 bp、301 bp、953 bp。用DNAStar软件对犊牛腹泻大肠杆菌Ler、eaeA、irp2和fyuA基因片段序列与GenBank中报道的相应参考菌株各基因片段进行核苷酸同源性比较分析,同源性高达88.3%~100%,说明上述4个基因片段具有较高的同源保守性。     

猪源大肠杆菌耐药性及相关耐药基因检测

【目的】 研究新疆阿克苏地区某规模化猪场猪源大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药情况及相关耐药基因携带情况,分析耐药表型与耐药基因之间的关系。【方法】 采用琼脂稀释法,对分离鉴定的443株猪源大肠杆菌进行猪场常用6大类13种抗菌药物最小抑菌浓度的测定。采用PCR方法,检测13种抗菌药物相应的4大类10种耐药基因。【结果】 该猪场猪源大肠杆菌对被检的8种抗菌药物耐药率超过70.0%,其中对恩诺沙星、链霉素、大观霉素、金霉素、土霉素的耐药率高达90.0%以上,对阿米卡星、安普霉素、头孢噻呋、多黏菌素E具有较好的敏感性,耐药率未超过25.0%;多药耐药结果以7~9耐为主,占63.6%。除tetK外,对被检的其他9种耐药基因均有检出,以携带floR(66.4%)和ant(3″)-Ia(66.4%)耐药基因为主。【结论】 新疆阿克苏地区某规模化猪场猪源大肠杆菌至少对被检的1种抗菌药物表现为耐药,且多药耐药情况严重,耐药谱广,耐药基因携带率高,应从基因水平对耐药大肠杆菌进行传播机制的监测。     

3株HPI+大肠杆菌fyuA与int基因的检测及序列分析

在耶尔森氏菌强毒力岛(HPI)的基因中,fyuA编码鼠疫菌素受体与细菌的摄铁能力调节有关,int编码的整合酶与HPI在大肠杆菌基因组αsn-tRNA位点的整合相关.根据GenBank中已发表的HPI基因序列设计2对引物,分别用于fyuA和int的PCR扩增.将从3株仔猪腹泻源HPI+大肠杆菌(S70903株、S70925株、S70931株)中扩增的片段克隆至pGEM-Teasy载体,分别获得含有fyuA和int的重组质粒.琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明:所克隆的fyuA基因大小均为948 bp,与已发表序列的同源性为98.6%～100%.所克隆的int基因片段大小均为1 391 bp,与已发表序列的同源件为96.0%～99.6%.研究结果提示,这3株细菌的fyuA基因并没有因为HPI的转移而缺失或被修饰,并且均整合在大肠杆菌基因组口αsn-tRNA位点.     

不同年代大肠杆菌耐药性监测分析

对分离自不同年代患病畜禽的196株大肠杆菌采用纸片扩散法对20种抗菌药物(氨苄西林、阿莫西林、头孢氨苄、头孢呋辛钠、头孢曲松、四环素、多西环素、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、氯霉素、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、土霉素、头孢噻呋、磺胺异恶唑、安普霉素、氟本尼考和甲氧苄啶)的耐药性进行了监测。结果表明:分离菌株除对头孢氨苄、头孢呋辛钠、头孢曲松、安普霉素全部敏感外,对其余抗菌药物均显示出不同程度的耐药性。不同年代分离菌株对多数抗菌药物的耐药性呈现逐渐增强的变化趋势,菌株的多重耐药率也明显增加。不同年代菌株显示出不尽相同的耐药谱,且耐药谱呈现出不断增宽的趋势。     

闽江流域年径流序列整体与局部趋势特征分析

应用Mann—Kendall法和滑动平均法以及差积曲线法,对闽江流域竹岐站1936年－2004年径流序列的整体趋势特征和局部趋势特征进行了分析。结果表明：闽江流域整体趋势减少,但无显著性;滑动平均法和差积曲线法划分时段分析局部趋势,呈现分阶段增加或减少趋势,但也都没有显著性,只是丰水期的趋势变化程度在丰枯期划分的3个时段中最大,增加相对明显。     

仔猪黄白痢大肠杆菌耐药性检测及ERIC图谱分析

以47株黄白痢临床分离大肠杆菌为材料,通过Kirby-Bauer法检测细菌耐药表型并用PCR扩增Ⅰ型整合酶基因,进而对不同耐药谱菌株进行以肠杆菌科基因间重复一致序列为引物的聚合酶链反应(ERIC-PCR)基因分型并用统计分析软件SPSS 16.0聚类.耐药表型检测结果显示:47株大肠杆菌均呈多重耐药,共9种耐药表型;Ⅰ型整合子阳性菌株检出率为95.7%(45/47);ERIC-PCR扩增出现稳定可重复的基因指纹图谱,耐9~13种药物菌株(85.1%,40/47)的ERIC指纹图谱分别显示出2种主要谱型,各代表1个猪场的菌株类型.聚类分析提示,相同耐药谱的来自同一猪场和不同猪场分离株的平均相似率分别为68.7%和53.5%,显著高于47株菌的平均相似率37.3%.说明菌株耐药性可能与特定的ERIC指纹图谱相关,ERIC指纹图谱分析可作为考察猪源致病性大肠杆菌多重耐药表型与基因型特征的新视角.     

山西省猪致病性大肠杆菌血清型调查及耐药性监测

从山西省50多个规模化养猪场无菌采集疑似大肠杆菌病死仔猪心、肝、脾、肠系膜淋巴结以及可疑病猪的直肠内容物等病料,进行病原菌分离、生化试验、致病性试验、血清型鉴定及药物敏感试验。结果表明,从50多个养猪场中分离出69株致病性大肠杆菌,分属30个血清型,其中,主要流行血清型为O138,O101,O9,O119,O141。药敏试验结果表明,大肠杆菌致病菌株对头孢呋辛钠、头孢哌酮、头孢噻肟、磷霉素这4种抗生素高度敏感,而对青霉素、链霉素、磺胺嘧啶、利福平、痢菌净、红霉素、诺氟沙星、阿莫西林、氨苄青霉素、氯霉素、庆大霉素、强力霉素、罗红霉素、环丙沙星等药物的耐药性菌株比例在65%以上,说明山西地区猪致病性大肠杆菌血清型多样、耐药性强、耐药谱广。     

贵州鸡源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性测定

经分离培养采自贵州省5个地区县级市65个规模化养鸡场的1180份样品,生化鉴定得到839株大肠杆菌,分离率为70.89%,采用微量肉汤稀释法测定其对9种抗菌药物的耐药情况。结果表明,分离菌对9种抗菌药物具有不同程度的耐药,土霉素、氟苯尼考和复方新诺明的耐药率高达80%以上,对多粘菌素E、大观霉素耐药率相对较低。839株大肠杆菌均为多重耐药菌株,最少的对2种药物耐药,最多的对9种药物耐药。     

三株鸡源大肠杆菌iss基因的检测

采用鸡胚致死对HL11、HL32、SD27鸡源大肠杆菌(Escherichia coli)的致病性进行测定,并检测其血清抗性及iss基因序列。结果表明,3株大肠杆菌为致病性、血清补体敏感菌株,iss基因序列与已知禽大肠杆菌iss基因序列同源性为99.0%~99.7%。     

贵阳市散养户猪、鸡源性大肠杆菌耐药性调查

为调查贵阳市散养户猪、鸡大肠杆菌的耐药情况,本文通过采集贵阳市农村散养的猪、鸡肛门拭子105份,经分离、鉴定得到96株大肠杆菌,再应用琼脂稀释法测定其对10种抗菌药物的MIC值。结果表明,96株大肠杆菌对10种药物的耐药率依次为:氟苯尼考(88.5%)、头孢噻呋钠(83.4%)、土霉素(82.3%)、阿莫西林(79.2%)、链霉素(76%)、磺胺嘧啶钠(75.0%)、恩诺沙星(71.9%)、环丙沙星(63.6%)、卡那霉素(61.4%)、庆大霉素(53.2%)。96株大肠杆菌均为多重耐药菌株,最少的对2种药物耐药,最多的对10种药物耐药。其结果说明,贵阳市散养户猪、鸡源大肠杆菌的耐药较严重。     

新疆塔城地区不同来源大肠杆菌的耐药性调查

掌握新疆塔城地区不同来源大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药情况,可以为今后塔城地区建立细菌耐药数据库提供信息。采集新疆塔城地区某养殖场饮用水样（12份）、饲料样（49份）、牛粪样（56份）和养殖户家羊粪样（20份）,分离大肠杆菌。采用琼脂稀释法对分离的大肠杆菌进行耐药性检测,通过卡方检验比较不同来源大肠杆菌耐药性的差异。结果表明：饮用水源菌对恩诺沙星、环丙沙星、阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林耐药率达100%;饲料源菌对阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林的耐药率分别为61.2%和51.0%;牛源菌对阿莫西林/克拉维酸和环丙沙星的耐药率均为14.3%;羊源菌对阿莫西林/克拉维酸和环丙沙星的耐药率分别为40.0%和35.0%。饮水源大肠杆菌对恩诺沙星、环丙沙星、阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林的耐药率显著高于牛源菌、羊源菌和饲料源菌（P<0.05）。此外,不同来源大肠杆菌对头孢噻呋、阿米卡星、庆大霉素、安普霉素和氟苯尼考均敏感。多药耐药结果显示：饲料源菌以0耐（38.8%）和4耐（38.8%）为主;牛源菌以0耐（786%）为主;羊源菌以0耐（50.0%）为主;饮水源菌以4耐（100%）为主。上述结果表明不同来源大肠杆菌对被检抗菌药物的耐药情况差异显著,共性之处为不同来源大肠杆菌对被检药物的中介率均较高,暗示如不改变用药方案,近期耐药菌株数有迅速增长的风险。     

郑州市宠物源大肠杆菌生物被膜表型与耐药谱型分析

为分析郑州市宠物源大肠杆菌的生物被膜表型与耐药谱型,分别采用微量肉汤稀释法和改良结晶紫法对194株宠物源大肠杆菌进行耐药率和生物被膜形成能力检测。结果表明,弱生物被膜表型菌株比例最高,占63.4%;耐药谱多样性是造成生物被膜形成能力差异的主要原因,但耐药谱中抗菌药物种类对生物被膜表型能力的影响不明显。     

盐生植物盐穗木HcPS_H基因大肠杆菌表达载体的构建

[目的]构建盐穗木HcPS_H基因的大肠杆菌表达载体。[方法]以质粒pGEM-T-HcPS_H为模板,HcPS_H-pET28a-F、HcPS_H-pET28a-R为引物进行PCR扩增,获得两端含酶切位点的HcPS_H基因目的片段。将该目的片段与大肠杆菌表达载体pET-28a通过T4DNA连接酶连接,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α,得到重组子克隆,抽质粒进行测序鉴定。[结果]扩增出HcPS_H基因片段长度为441 bp,将其连接到大肠杆菌表达载体pET-28a上后,得到重组子质粒,经PCR检测、双酶切验证及测序鉴定,表明成功构建原核表达载体。[结论]该研究成功构建了盐穗木HcPS_H基因的大肠杆菌表达载体,为进一步进行该基因功能的研究奠定了基础。     

太子河流域水体中总大肠菌群污染现状研究

[目的]研究太子河流域水体中总大肠菌群的数量,探讨大肠菌群污染状况及其与理化指标的相关关系。[方法]于丰水期（7月）和平水期（10月）对太子河流域8个干流断面和6个支流断面地表水进行采样,采用滤膜法监测水体中的总大肠菌群数量,结合理化分析监测指标COD、NH3-N、TP确定出水体污染的性质和程度。[结果]太子河干/支流监测断面地表水中总大肠菌群数量在丰水期为9.2×103～1.7×106cfu/L,平水期为4.0×102～6.3×105cfu/L,总大肠菌群具有明显的季节分布特征,总体上丰水期各断面地表水中总大肠菌群含量高于枯水期。丰水期大肠菌群对数值与COD和NH3-N含量之间呈显著（P〈0.05）或极显著（P〈0.01）正相关关系。[结论]太子河干/支流监测断面地表水中总大肠菌群污染严重。     

山西省鸡致病性大肠杆菌耐药性研究

采用纸片扩散法,对山西省11个地区的138株鸡致病性大肠杆菌用26种抗菌药物进行敏感性测定,结果,138株鸡致病性大肠杆菌对卡那霉素、阿米卡星、磷霉素、头孢唑林、头孢噻肟、头孢曲松等的高敏率为62.3%~83.3%;对氧氟沙星、庆大霉素、多黏菌素B、氟苯尼考的中敏率为50%以上;对26种抗菌药物均产生不同程度的耐药性,如恩诺沙星耐药率为81.2%,多西环素为83.3%,氨苄青霉素为85.5%,阿莫西林为87.0%,罗红霉素为89.1%,复方磺胺为99.2%,利福平为100%。所以,临床首选高敏的药物,慎重使用中敏药物,尽量不用恩诺沙星等高耐药性的药物。