烟草青枯菌致病型及其与寄主品种的互作关系

阐述了烟草青枯病菌系致病型及分布特点,种质资源抗性分类,主栽品种抗性表现,生态环境因素的影响;讨论了病原菌与寄主相互作用中的遗传关系。     

烟草感染青枯菌前后POD及同工酶的变化

【研究目的】对烟草感染青枯菌前后的根、茎、叶内过氧化物酶(POD)及同工酶进行比较研究,为抗病育种提供理论基础。【方法】采用比色法测POD酶活,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)进行POD同工酶的比较。【结果】对烟草感染青枯菌前后,酶活性测定结果表明,烟草叶部POD活性显著高于根部和茎部。烟草接菌后,根、茎、叶内的POD活性均在第3天升至最高,而叶内比对照增高了29.67%。同工酶电泳分析表明,烟草接菌后的同工酶谱带,在条带的数目、种类和各条的相对活性上表现出差异。【结论】POD作为植物的保护酶类,随植物抵抗疾病的过程变化而变化,故与植物抗病性密切相关。     

消毒剂对烟草漂浮育苗材料表面青枯雷尔氏菌的杀灭作用

为了指导烟草漂浮育苗消毒剂使用,通过载体表面菌落杀灭试验,测定了10种消毒剂对聚苯乙烯泡沫苗盘、聚氯乙烯塑料膜和不锈钢刀片表面的青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacoarum,简称青枯菌)的杀灭效果。结果表明,除98%磷酸三钠300 mg/L和24%混脂酸铜80 mg/L对青枯菌几乎没有杀灭作用外,其余消毒剂具有较好的杀灭效果。在聚苯乙烯泡沫苗盘、聚氯乙烯塑料池膜和不锈钢刀片表面,8种消毒剂的90%致死剂量(EC90)差异大,30%有效氯漂白粉为96.4~145.7 mg/L,7%有效氯次氯酸钠为53.7~215.3 mg/L,美国消毒剂为26.2~83.5 mg/L,98%硫酸铜.5H2O为93.8~114.0 mg/L;98%高锰酸钾为14.8~163.0 mg/L;40%育宝为247.7~404.6 mg/L;10%二氧化氯(维绿)为185.7~472.9 mg/L;0.6%菌毒净为101.6~441.0 mg/L。消毒剂的使用剂量需要根据表面材料种类选择。     

青枯菌拮抗菌生物有机肥防控烟草青枯病研究

采用青枯菌拮抗菌生物有机肥,并结合深耕、石灰消毒措施,研究该生物有机肥对烟株生育期及青枯病发病情况的影响.结果表明,先施石灰再施生物有机肥不仅有利于烟株的生长,还对青枯病有较好的防控作用,尤其对烟株生长后期青枯病的防控作用最明显;病情指数比只施烟草专业肥低48.2％;深耕再施生物有机肥对青枯病的防控效果次之.     

不同致病性青枯雷尔氏菌诱导番茄代谢产物的异质性研究

采用基于气相色谱-质谱联用技术的代谢组学方法 ,研究不同致病性青枯雷尔氏菌诱导番茄植株代谢物变化的异质性。将青枯雷尔氏菌强致病力菌株FJAT-91和无致病力菌株FJAT-1458分别单独接种和混合接种番茄植株,以清水为对照,接种后6、24、48、72、96h取样,测定番茄植株代谢产物的变化。结果表明,检测到的代谢物种类主要为醇类、酯类、酸类、醛类、吡啶类和烷烃类。不同处理番茄代谢产物组成变化的时间动态结果表明,FJAT-91单独接种处理48h、FJAT-1458单独接种处理48h、同时接种FJAT-91和FJAT-1458处理96h及对照处理72、96h的番茄中检测到代谢物种类最多,分别为12、18、15和15种。邻苯二甲酸二丁酯在不同处理不同时间的番茄中均检测到,为完全分布类型,其他代谢物为不完全分布类型。FJAT-91单独接种处理能诱导番茄代谢产物棕榈酸消亡,而FJAT-1458单独接种或与菌株FJAT-91混合接种及对照处理的番茄植株该代谢物维持在相当含量,说明该代谢物可能与植株免疫抗病有关。主成分分析表明,不同接种处理诱导番茄植株的代谢谱存在一定的差异,主成分一和主成分二基本上能将其区分开来。     

烟草青枯菌土壤拮抗真菌的筛选及鉴定

为有效地利用生物防治技术防治烟草青枯病,提升烟草及烟草制品的产量和质量,解决使用化学防治造成的有害物质残留超标问题,通过采用平板对峙培养法、分子生物学与形态学相结合的生物防菌鉴定法等,对从健康的烟草根际土壤中分离获得的烟草青枯菌土壤拮抗真菌进行筛选和鉴定研究。结果表明:从烟草根际土壤中分离获得的56株真菌中有3株具有拮抗作用,经鉴定分别为淡色生赤壳菌(Bionec-tria ochroleuca)、棘孢木霉(Trichoderma asperellum)和嗜松青霉(Penicillium pinophilum),其拮抗效果从高到低依次为淡色生赤壳菌(平均抑菌圈直径达31.23mm)>棘孢木霉(11.28mm)>嗜松青(10.54mm)。     

烟草青枯菌拮抗放线菌和细菌的田间试验

从健康烟草根围土壤中分离、筛选得到对烟草青枯病菌拮抗效果较好的放线菌和细菌。经鉴定两株拮抗放线菌均属链霉菌属(Streptomyces),分别是绿色类群橄榄绿链霉菌(S.olivaceoviridis)、粉红孢类群玫瑰暗黄链霉菌(S.roseofulvus);拮抗细菌分别为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、球形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sphaericu)。在贵州省麻江县烟田进行田间试验,3次平均相对防效从大到小依次为粉红孢类群玫瑰暗黄链霉菌(63.65%)、球形赖氨酸芽孢杆菌(60.03%)、蜡样芽孢杆菌(43.85%)、绿色类群橄榄绿链霉菌(41.76%)、40%硫酸链霉素(17.11%)。     

一株烟草青枯菌拮抗细菌的筛选及鉴定

利用不同地点采集发病烟苗根围土样的方法,从重庆黔江烟草地共采集了土样31份,经分离纯化获得一株对供试致病烟草青枯菌有较强抑制作用的拮抗菌株swu31-2,通过其形态特征,生理生化试验和16S rDNA序列的测定,初步判定属于铜绿假单胞菌．     

福建省青枯雷尔氏菌脂肪酸多态性研究

 【目的】利用气相色谱技术检测福建省的40株青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)菌株细胞内的脂肪酸，分析其脂肪酸分布的多态性；研究青枯雷尔氏菌脂肪酸多态性与青枯雷尔氏菌现有种下分化方法之间的关系。【方法】对40株青枯雷尔氏菌脂肪酸进行气相色谱分析，比较同一寄主分离的青枯雷尔氏菌和不同寄主分离的青枯雷尔氏菌脂肪酸的分布；对40株青枯雷尔氏菌脂肪酸进行聚类分析，分析聚成的各类青枯雷尔氏菌脂肪酸的特点以及脂肪酸多态性与其生理小种、生化型和致病性之间的关系。【结果】同一寄主分离的青枯雷尔氏菌和不同寄主分离的青枯雷尔氏菌，其脂肪酸都存在着明显的多态性；对40株青枯雷尔氏菌的脂肪酸进行聚类分析，可以聚成3类，即group Ⅰ、group Ⅱ和group Ⅲ；青枯雷尔氏菌生理小种1存在着不同的脂肪酸类群，青枯雷尔氏菌脂肪酸多态性与其生化型之间不存在相关性，但是脂肪酸和致病性之间存在一定的相关性：group Ⅰ为无致病性菌株，group Ⅱ为过渡性菌株，group Ⅲ为强致病性菌株。【结论】福建省青枯雷尔氏菌脂肪酸分布存在着明显的多态性；青枯雷尔氏菌脂肪酸多态性与致病性之间存在一定的相关性，脂肪酸有望成为青枯雷尔氏菌小种鉴定的新指标。     

几种内生菌防治烟草青枯病药效研究

进行001号、009号、011号、2-轻-9及湘1-2 5种内生菌防治烟草青枯病田间小区试验,结果表明:5种内生菌对烟草青枯病均有一定防效,平均防效如下:011号为63.09%,2-轻-9为58.43%,湘1-2为51.54%,与农用链霉素作比较差异达极显著水平,001号、009号没有显著差异。内生菌2-轻-9大面积示范防治烟草青枯病效果一般,为38.92%。     

3种杀菌剂对烟草青枯病的室内毒力测定

采用生长速率法测定了3种杀菌剂对烟草青枯病菌（Pscudomonas solanacearum Smith）进行室内抑菌毒力测定。测定结果表明,20％青枯灵可湿性粉剂对烟草青枯病菌菌丝生长的抑制作用最强,相对抑制率达到23．71％～93．66％,在烟草青枯病菌的防治中具有重要的价值。     

不同酯酶型球孢白僵菌株系及相同酯酶型株系经寄主转移后毒力变化的研究

对12个酯酶型的16株白僵菌进行了毒力生物测定.结果表明,不同酯酶型株系对松毛虫的毒力差异显著,LT50可相差数倍;同一酯酶型株系经不同寄主转移后,其毒力也发生了较明显的变化.如从松灰象甲上分离出的不同酯酶型的2株白僵菌[MGS980404-21(酯酶型05),MGS980510-06(酯酶型06)]和人工释放的酯酶型02菌株Bb13毒力都很高,而从松灰象甲分离出的与释放菌株属同一酯酶型的另一个菌株MGS980507-34,毒力虽然很低,但却是林间最常见的流行菌株.上述结果理解为白僵菌在林间的宿存,尤其是它在松毛虫低虫口状态下能在林间长期宿存不绝的原因,以及对于从林间采集筛选高毒菌株提供了可能.     

烟草青枯病菌生防菌的筛选和鉴定

采用纸碟片法筛选到4株对烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)有抑菌作用的生防菌C2c、C1a、Tsb和Ch1b,抑菌圈直径分别为51.50、25.95、24.40 mm和20.05 mm。通过16S r DNA序列分析,C2c、C1a和Tsb为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa),Ch1b为成团泛菌(Pantoea agglomerans)。这4株生防菌对烟草赤星病菌(Alternaria alternate)、烟草根黑腐病菌(Thielaviopsis basicola)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、苹果霉心病菌(Trichothecium roseum)等病原真菌也有较好的抑制作用。     

不同培养基继代培养球孢白僵菌对西花蓟马毒力和产孢量的影响

【目的】通过开展连续继代培养对高毒菌株产孢和毒力的影响研究,获得对西花蓟马(Frankliniella occidentalis)毒力和产孢量均高且稳定的球孢白僵菌（Beauveria bassiana）菌株,进一步提出有效防止菌株退化、优良菌株保存和改良的方法与措施,为高效菌株的规模化生产提供参考。【方法】室内条件下,采用浸虫法,用浓度为1×107个孢子/mL球孢白僵菌悬浮液处理西花蓟马初羽化成虫,分别测定28株不同来源的菌株对西花蓟马的毒力;并将筛选出的4株高毒力菌株的分生孢子分别涂布于玉米琼脂（CMA）培养基与SDAY培养基上,比较不同菌株以及不同培养基之间产孢量的差异,筛选出高产孢菌株与产孢培养基,以筛选得到的白僵菌菌株为初始菌株F0,把F0代球孢白僵菌分别接种于CMA培养基、添加蝉蜕的CMA培养基和添加西花蓟马虫尸粉的CMA培养基,分别测定经过不同培养基连续5代继代培养得到的球孢白僵菌对西花蓟马成虫的毒力,并测定产孢量。使用模型模拟分析球孢白僵菌菌株经过不同培养基继代培养后培养代数与产孢量的关系,并对不同培养基培养得到的不同培养代数的白僵菌菌株的产孢量与其对西花蓟马的致死中时（LT₅₀）进行回归分析,研究毒力与产孢量的相关关系。【结果】经过室内毒力测定,处理5 d后,菌株DZDC-9、GZGY-5、WLMQ1-8、SZ-26对西花蓟马成虫的校正累积死亡率均高于90%,LT₅₀均在3 d内,毒力显著高于其他菌株;比较高毒力菌株在两种产孢培养基上的产孢量,发现4株球孢白僵菌的产孢量存在显著差异,菌株DZDC-9的产孢量显著高于其他3株,4株菌株在CMA培养基中的产孢量均明显高于SDAY培养基。随着白僵菌菌株在CMA培养基上连续5代的继代培养,菌株对西花蓟马成虫的致病力呈现下降趋势,从第3代开始致病力显著降低,而添加蝉蜕的CMA培养基培养得到的不同培养代数的分生孢子对西花蓟马致病力则没有显著差异,添加西花蓟马虫尸粉的CMA 培养基培养得到的不同代数的分生孢子对西花蓟马致病力有一定的增强趋势;通过模型可以发现单纯以CMA培养基继代培养白僵菌的产孢量随培养代数呈现指数下降,而在培养基中添加蝉蜕或西花蓟马虫尸粉白僵菌产孢量则随培养代数呈现指数上升,蝉蜕或西花蓟马虫尸粉的添加对产孢量有一定的增强作用。白僵菌菌株产孢量与毒力存在一定正相关关系,产孢量相对较高的菌株对西花蓟马成虫的致病力相对较高,致死中时短。【结论】筛选得到一株对西花蓟马高效的白僵菌菌株DZDC-9,产孢培养基中加入蝉蜕和西花蓟马虫尸可以维持菌株生长特性,延缓毒力退化趋势;同一菌株的产孢量可以作为菌株毒力评价的一个指标。     

2 个烟草青枯病菌菌株的致病力差异与基因组比较分析

【目的】探索比较 2 个不同青枯病菌菌株之间致病力差异和基因组差异,分析影响菌株致病力差异的关键基因,为烟草青枯病的防治提供理论参考。【方法】从烟草青枯病发病烟株上分离获得不同的青枯病菌菌株并进行鉴定,通过侵染试验比较 2 个菌株之间的致病力差异,并对 2 个菌株的基因组进行测序,比较二者之间基因组序列差异,分析影响菌株致病力差异的基因。【结果】从江西省抚州市广昌县和南丰县分离到2 株青枯病菌菌株 RsTP2 和 RsTY2,egl 测序表明菌株 RsTP2 和 RsTY2 均属于亚洲分支演化型Ⅰ中的序列变种13,其中菌株 RsTP2 对云烟 87 致病力较强,而菌株 RsTY2 致病力较弱。通过对 2 个菌株进行基因组测序,获得二者的基因组框架图,其基因组大小分别为 5.43 MB 和 5.23 MB。将获得的基因和蛋白序列与相关数据库进行比对,获得基因的功能及物种注释信息。通过分析发现,菌株 RsTY2 有 52 个蛋白和菌株 RsTP2 的 44 个蛋白比对后序列存在差异,其相似度在 50.00%~99.88%,其中存在较大差异的编码蛋白主要是凝集素类蛋白,其次是细胞溶素分泌激活蛋白和穿孔素家族蛋白。【结论】通过比较不同致病力青枯病菌株 RsTP2 和 RsTY2 的基因组序列差异,发现二者基因组中编码凝集素类蛋白、细胞溶素分泌激活蛋白和穿孔素家族蛋白等蛋白序列差异较大,这类编码蛋白主要参与细菌的黏附、膜溶解、穿透等功能,与细菌侵入宿主细胞的能力关系密切。这几类编码蛋白的差异推测是导致菌株 RsTP2 和 RsTY2 致病力差异的重要因素之一。     

青枯雷尔氏菌脂肪酸型与致病性的关系

 【目的】分析青枯雷尔氏菌脂肪酸种类变化与致病性指标-弱化指数和回接发病率的相互关系,提出青枯雷尔氏菌脂肪酸型种下分化的分类方法。【方法】青枯雷尔氏菌脂肪酸型分为：脂肪酸Ⅰ型,弱化指数＞0.8,回接发病率0%,属无致病力型;脂肪酸Ⅱ型,弱化指数为0.6～0.8,回接发病率为6.7%～100%,属过渡型,脂肪酸Ⅲ型,弱化指数＜0.6,回接发病率100%,属强致病力型。利用聚类分析、主成分分析、判别分析,分层筛选与脂肪酸型有关的脂肪酸种类.【结果】筛选出十四碳脂肪酸（X1）、十七碳脂肪酸（X9）,十八碳脂肪酸（X13）为主要因子,组建数据矩阵,建立脂肪酸型判别模型：Y1=-16.3353 + 0.0012X1 + 0.0056X9 - 0.0016X13,Y2= -3.4928 + 0.0002X1 + 0.0003X9 + 0.0025X13,Y3= -9.1550 - 0.0003X1 + 0.0039X9 + 0.0042X13,对于一个未知脂肪酸型的青枯雷尔氏菌菌株,首先测定脂肪酸图谱,取出X1（十四碳脂肪酸）、X9（十七碳脂肪酸）、X13（十八碳脂肪酸）,代入方程,计算Yi,当1≤Yi≤2时,归为脂肪酸型Ⅰ,当2≤Yi≤3时,归为脂肪酸型Ⅱ,当Yi＞3时,归为脂肪酸型Ⅲ,模型的判别准确率达90.00%。【结论】青枯雷尔氏菌脂肪酸型的研究,为其种下分化建模的标准化和计算机自动分析方法的建立,提供可靠的基础。脂肪酸型的模型建立也为其他植物病原菌的致病性研究提供了思路和方法。     

2株鸭源肠球菌的生物学特性的观察

对2株鸭源肠球菌临床分离株和1株粪肠球菌参考菌株的形态特征、培养特性、生理生化特性、对药物的敏感性等生物学特性进行了初步研究。结果表明,3个被检菌株在光学显微镜下呈球形、革兰氏阳性染色和链状排列方式,能在10℃、45℃和6.5%NaCl肉汤等条件下生长,能耐热60℃30min,其特性均符合肠球菌属的特征,各菌株生化反应特性均与粪肠球菌特性基本一致,3个菌株均可鉴定为粪肠球菌。药敏试验结果表明,3个菌株均对青霉素、万古霉素、庆大霉素、红霉素和氯霉素敏感而对四环素耐药。     

甘蔗愈伤组织继代培养中的蔗糖效应

以甘蔗幼嫩叶鞘为外植体，经多种培养基诱导出愈伤组织，选择产愈率较高的三种培养基继代，对增殖效果较好的培养基再次进行不同蔗糖浓度梯度的增愈试验。结果表明，低蔗糖浓度（１．５％）有利于愈伤组织的生长发育，组织块质量好．产愈量和产胚量高；高浓度则不利于愈伤组织增殖。     

11个昆虫病原线虫品系对光肩星天牛的致死能力

测定了11个品系昆虫病原线虫对光肩星天牛成虫和幼虫的防治效果。结果表明:Heterorhabditis sp.ZH品系线虫对光肩星天牛成虫和幼虫均有较高致病力,为最佳线虫品系。侵染10 d后成虫累计校正死亡率为94.59%,LT50为4.10 d;侵染光肩星天牛幼虫4 d后累计校正死亡率为100%,LT50为1.61 d。并测定了不同ZH品系线虫用量对光肩星天牛幼虫的致死能力,发现最优用量为3 500条/mL。