对虾养殖海区芽孢杆菌筛选及其水质净化研究

从胶南、红岛、仰口不同的对虾养殖区域,采集凡纳滨对虾养殖水体中的水样、底泥以及对虾肠道和粪便样品,从中分离筛选芽胞杆菌菌群,获得8株不同的芽胞杆菌菌株.通过形态学特征、生理生化特性结果分析和16S rDNA分析鉴定,确定其中的JNSY1菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus).安全性测试发现该蜡样芽孢杆菌JNSY1菌株对养殖的凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)无毒害作用.水质净化实验结果表明,10 d后该JNSY1菌株对养殖水体中氨氮的降解率达到65.5%,对亚硝酸盐的降解率达到68.3%,表明该菌株对养殖水体有明显的净化作用,可以研发作为微生态制剂.     

1株耐高温纤维素酶产生菌的分离与鉴定

从环境样品中筛选得到1株耐高温纤维素酶产生菌A13。形态及生理生化特征测定结果表明,A13菌株与芽孢杆菌属(Bacillus)中地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的特征基本一致。测定了该菌株的16S rDNA序列并根据16S rDNA构建了系统发育树,在系统发育树中,A13菌株与地衣芽孢杆菌形成一个类群,序列同源性为90%。最终确定该菌株为地衣芽孢杆菌。     

一株产蛋白酶地衣芽孢杆菌的分离与鉴定

[目的]对产蛋白酶的地衣芽孢杆菌进行分离与鉴定。[方法]从饲料样品中筛选出产蛋白酶的菌株,对其进行形态和生理生化特征鉴定,并构建该菌株的16S rDNA系统发育树。[结果]分离到的菌株GW201205与地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的生理生化特征相同,且其16S rDNA序列与B.licheniformis相似性最高。[结论]可将试验分离到的菌株GW201205初步鉴定为B.licheniformis。     

柿树根际嗜铁细菌地衣芽孢杆菌CAS20的分离鉴定

采用CAS检测平板法,从柿树根际土壤中分离获得一株具有较强产嗜铁素能力的细菌菌株CAS20。根据菌株在LB固体培养基上的培养特征和生理生化特性,将其初步鉴定为芽孢杆菌(Bacillus);经16S rDNA序列分析,CAS20的16S rDNA基因序列(KY199559)与地衣芽孢杆菌(Bacillus.licheniformis)代表菌株ATCC14580的16S rDNA序列(NR_074923)具有99.93%的相似性,并且位于系统进化树的同一分枝。据此,将菌株CAS20鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。     

盐泽地分离的耐盐性芽孢杆菌菌株的分子鉴定

采用生理生化检测、Rep-PCR指纹图谱分析、16S rDNA及gyrB基因序列分析技术,对在青海尕海盐泽地植物根际土壤中分离得到的几株菌落形态较为特殊的芽孢杆菌菌株进行鉴定。生理生化分析结果表明:分离的芽孢杆菌菌株革兰氏染色为阳性。Rep-PCR指纹图谱表明,不同分离菌株间的指纹图谱完全相同,为同种芽孢杆菌。16S rDNA及gyrB基因序列鉴定结果显示,菌株与地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的亲缘关系最近。综合几种鉴定结果,最终将分离自盐泽地的芽孢杆菌菌株鉴定为B.licheniformis。     

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为改善和提高青贮饲料的品质提供优良菌种,采用MRS平板分离、生理生化分析和16S rDNA鉴定相结合的方法对新疆阿克苏地区青贮玉米(Zea ma ys L.)中乳酸菌的种类、形态学及生理生化特性进行研究.结果表明:从青贮玉米分离到10个菌株,其中,2株为地衣芽孢杆菌(Bacillus lichenni formis),2株为面包乳杆菌(Lactobacillus crustorum),4株为鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus),2株为干酪乳杆菌(L.casei),均为异型乳酸菌.地衣芽孢杆菌(B.lichenni formis)在pH 3.0～3.5能生长,其他菌不生长或者生长较弱,但在pH 4.0～8.0均能生长;10个菌株均可在6.5％和8.0％NaCl条件下生长;地衣芽孢杆菌(B.lichenni formis)的生长速度快、产酸性能好,可作为制作青贮饲料的优良菌株.     

青贮玉米优良乳酸菌的分离与筛选

为改善和提高青贮饲料的品质提供优良菌种,采用MRS平板分离、生理生化分析和16SrDNA鉴定相结合的方法对新疆阿克苏地区青贮玉米(Zea mays L.)中乳酸菌的种类、形态学及生理生化特性进行研究。结果表明:从青贮玉米分离到10个菌株,其中,2株为地衣芽孢杆菌(Bacillus lichenniformis),2株为面包乳杆菌(Lactobacillus crustorum),4株为鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus),2株为干酪乳杆菌(L.casei),均为异型乳酸菌。地衣芽孢杆菌(B.lichenniformis)在pH 3.0~3.5能生长,其他菌不生长或者生长较弱,但在pH 4.0~8.0均能生长;10个菌株均可在6.5%和8.0%NaCl条件下生长;地衣芽孢杆菌(B.lichenniformis)的生长速度快、产酸性能好,可作为制作青贮饲料的优良菌株。     

宋河酒曲中产淀粉酶芽孢菌的分离鉴定及产酶特性

为了有效控制宋河酒曲的制曲过程和发酵进程,对宋河酒曲中产淀粉酶芽孢菌进行了分离鉴定并研究筛选菌株的产淀粉酶特性。结果表明:从宋河酒曲中共分离到12株产淀粉酶芽孢菌,均属革兰氏阳性杆状菌,初步鉴定归为1个属5个种,即芽孢杆菌属(Bacillus)、坚硬芽孢杆菌(Bacillus firmus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium),其中,坚硬芽孢杆菌是宋河大曲产淀粉酶芽孢菌的数量优势菌群,获得1株地衣芽孢杆菌SQ2为中温型高产淀粉酶菌株,其液态发酵产酶特性为37℃培养,前24h产酶较弱,此后,酶活力迅速上升,72h达到最大值为89μg/(mL.min),产酶旺盛期发生在菌体成熟期和衰亡初期,产酶过程pH值先稍偏酸性后接近中性。     

芽孢杆菌胞外产物对凡纳滨对虾蛋白酶活性影响的体外试验

用半透膜法收集地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis De株的胞外产物(Extracellular products, ECP),以匀浆离心法提取凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei的肝胰腺和肠道消化酶,将ECP和对虾消化酶提取液按1:9(体积比)混合,研究不同温度、pH条件下ECP对对虾蛋白酶活性的影响.结果表明:在不同温度、pH条件下,试验组与对照组没有显著性差异(P＞0.05),即地衣芽孢杆菌ECP在体外条件下对对虾蛋白酶活性没有显著性影响;且试验组中芽孢杆菌ECP的添加量与其蛋白酶活性呈负相关.     

姜瘟病拮抗细菌的筛选与鉴定

2003年6月在雅安飞仙关多功乡13个未发病或发病较轻的生姜田块中分离到217个细菌菌株,通过平板抑菌试验筛选,其中3个菌株(L1、D4、T10)对姜瘟病有强抑菌作用,抑菌圈直径都在2.2cm以上。对L1、D4、T10菌株进行形态特征和生理生化鉴定,确定L1为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、D4和T1为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。     

草地早熟禾根际磷细菌的分离与鉴定

利用选择性培养基从草地早熟禾(Poa pratensis)根际土壤中筛选到8株有机磷细菌和7株无机磷细菌,根据其形态学和生理生化等特性进行了鉴定。结果表明,有机磷细菌菌株PO1、PO3、PO4、PO5鉴定为Bacillus cereus(蜡状芽孢杆菌),菌株PO2、PO6和PO7鉴定为Bacillus megaterium(巨大芽孢杆菌),菌株PO8为Bacillus badius(栗褐芽孢杆菌),而本试验筛选到的无机磷细菌菌株均为Pseudomonas sp.(荧光假单胞菌)。     

牛源肠道益生菌芽孢杆菌BN-9菌株的分离鉴定

从健康牛的粪便中筛选出对大肠杆菌(Escherichia coli)有抑制作用的芽孢杆菌,并对其进行鉴定.以大肠杆菌为指示菌进行初筛和复筛,采用SPSS软件对复筛结果进行显著性分析,选择抑制大肠杆菌活性较强的菌株.经过形态观察、生理生化试验和16S rDNA全序列分析鉴定其种属:采用稀释活菌计数法测绘活性菌株的生长曲线,利用SPSS软件结合修正的Gompertz方程和Logistic方程对生长曲线进行拟合,以获得活性菌株的生长动力学参数.经过鉴定,筛选得到的对大肠杆菌有较强抑制作用的芽孢杆菌BN-9菌株属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);采用SPSS软件拟合得到的生长曲线的相关系数(R)在0.985以上.筛选并鉴定出强烈抑制大肠杆菌的牛源肠道益生菌BN-9:采用SPSS软件可以较准确地预测这些菌株的生长动力学参数.     

益生菌制剂对凡纳滨对虾生长、营养代谢及抗氧化能力的影响

【目的】研究饲料中添加地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌对凡纳滨对虾生长性能、营养代谢及抗氧化能力的影响。【方法】将凡纳滨对虾幼虾随机分成3组,对照组投喂仅用蛋白液包裹的基础饲料,试验组分别投喂含活菌量达10~8 CFU/g的凝结芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的试验饲料,养殖周期为28 d。于试验第7,14,21和28天取样,测定血清总蛋白(TP)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、一氧化氮(NO)含量及谷氨酰胺合成酶(GS)、苹果酸脱氢酶(MDH)、脂肪酶(LPS)、已糖激酶(HK)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活性和总抗氧化能力(T-AOC);试验结束后测定凡纳滨对虾的生长性能和肌肉营养成分。【结果】(1)与对照组比较,2个试验组凡纳滨对虾的终末体质量显著提高(P0.05),饲料系数显著降低(P0.05),肌肉中粗蛋白质、肌糖原含量和呈味氨基酸总量显著提高(P0.05);凝结芽孢杆菌组血清中TP、TC及TG含量与对照组差异显著(P0.05),地衣芽孢杆菌组TG含量显著高于对照组(P0.05)。(2)凝结芽孢杆菌组GS活性在试验第14天显著高于其他2个组(P0.05);2个试验组HK活性在第21天显著高于对照组(P0.05);凝结芽孢杆菌组MDH活性在第21天显著高于对照组(P0.05);2个试验组LPS活性在第7天显著高于对照组(P0.05),2个试验组之间无显著差异(P0.05)。(3)凝结芽孢杆菌组T-AOC活性在试验第7天最高(55.21 U/mL),地衣芽孢杆菌组在第14天最高(45.08 U/mL),均显著高于对照组(P0.05);2个试验组CAT活性在第21天最高,SOD活性在第7天最高,均显著高于对照组(P0.05),而2个试验组之间无显著差异(P0.05);凝结芽孢杆菌组GSH-PX活性在第28天最高(957.30 U/mL),地衣芽孢杆菌组在第21天最高(932.25 U/mL),均显著高于对照组(P0.05);凝结芽孢杆菌组NOS活性和NO含量均在第14天最高,显著高于对照组(P0.05);地衣芽孢杆菌组NO含量在第28天最高,显著高于对照组(P0.05)。【结论】地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌均可作为饲料添加剂使用,提高凡纳滨对虾的生长性能,增强其营养物质代谢水平,提高其抗氧化能力。     

西瓜枯萎病拮抗细菌HD-5菌株的筛选及鉴定

筛选对西瓜枯萎病病原菌西瓜专化型尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schl.f.sp.niveum)具有拮抗作用的芽孢细菌.通过对土样中分离的产芽孢细菌进行初筛和复筛,得到一株具有较强抑菌活性的拮抗芽孢细菌HD-5菌株,并对该菌株进行了形态特征观察、生理生化鉴定和16S rDNA全序列分析.结合HD-5菌株的形态特征、生理生化特性和16 SrDNA全序列分析结果综合考察,判定该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).     

解钾芽孢杆菌的分离·鉴定及其代谢产物分析

[目的]分离与鉴定具有解钾能力的芽孢杆菌,并对筛选出的细菌进行代谢产物分析。[方法]从土壤中分离得到1株具有解钾能力且有一定抗逆性的菌株YJ09,对其进行生理生化性质研究、16S rRNA序列分析,并考察解钾菌培养液中的组分及各组分对钾长石的分解作用。[结果]菌株YJ09为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）;解钾菌培养液中含有0.54g/L的有机酸、0.413 mg/L的氨基酸和2.80 g/L的多糖,起解钾作用的主要是多糖。[结论]该研究为具有解钾能力的地衣芽孢杆菌在微生物肥料中的应用提供了理论依据。     

高蛋白酶活性的地衣芽孢杆菌热带菌种的筛选与鉴定

从海南省文昌市、海口市的海水养殖池和天然海域中采集的海水与底泥样品中分离和筛选出13株具有高蛋白酶活性的地衣芽孢杆菌菌株,经菌落形态观察、标准生理生化分析和16S rDNA测序,确定获得的菌株均为野生型热带种地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。     

一株耐盐乙草胺降解菌的分离、筛选及鉴定

为获得更加适应自然环境的乙草胺降解菌株,以MSM基础盐培养基从常年经受乙草胺污染的农田土壤中分离乙草胺降解菌,筛选高效降解菌株,并对其进行鉴定及生长和降解特性分析。结果表明,共分离得到乙草胺降解细菌12株,通过高效液相色谱法定量检测确定菌株ACD-9的降解效率最高,3 d内对初始浓度为50·mg·L-1的乙草胺降解率可达到56.78%;从菌落特征、生理生化特性以及16S r RNA基因序列3个方面分析,鉴定菌株ACD-9为芽孢杆菌(Bacillus sp.);菌株ACD-9可在温度4～50℃、pH值4.5～10.0、NaCl质量浓度为0～150 g·L-1的条件下生长,其最适条件为46℃,pH值5.0～6.0,NaCl 0～10 g·L-1。综合而言,菌株ACD-9环境耐受力较好,适应能力较强,具有良好的应用前景。     

一株鹿源纤维素降解菌Lu14的分离与鉴定

从梅花鹿粪便中分离筛选出24株芽孢杆菌,初筛获得10株具有纤维素降解能力的菌株,经过复筛,菌株Lu14纤维素降解能力较高,其内切葡聚糖酶活和滤纸酶活分别为1.106 U/m L和0.76 U/m L。对Lu14进行菌落形态、生理生化特征鉴定和16S rDNA序列分析,结果发现其与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的相似性高达99.99%,故鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。     

棉花黄萎病拮抗菌株DS45-2的分离鉴定

从土样中筛选对棉花黄萎病致病菌大丽轮枝菌(Verticillium dahliaeKleb)具有拮抗作用的芽孢杆菌菌株,初筛得到具有拮抗作用的菌株68株,复筛选出1株拮抗活性较高的菌株DS45-2,通过形态特征观察,生理生化试验及16S rDNA序列分析对此菌株进行鉴定,初步鉴定此菌株属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),与相应标准菌株NBRC 15535的16S rDNA序列相似度达99.50%。     

猪源肠道益生菌Z-16菌株的分离及耐受性研究

采集健康仔猪的粪便,筛选对病原指示菌大肠杆菌(Escherichia. coli)具有拮抗作用的芽孢杆菌益生菌株.通过初筛得到具有拮抗作用的菌株23株,复筛选出1株拮抗活性较高的菌株Z-16.通过形态观察和生理生化特征研究,初步鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis).菌株Z-16能耐受0.3%的猪胆盐,对pH值3.0的酸度有较强的抵抗力.用该菌株饲喂小鼠10 d后,小鼠生长正常、健活,解剖未见任何消化道病变,表明Z-16菌株对小鼠安全无毒,有望成为优良的益生菌菌株.