陕西省猕猴桃枝干溃疡病病原菌鉴定

对陕西关中地区猕猴桃枝干及花腐病上分离的5个菌株,经致病性测定、菌体形态、培养性状、生理生化及血清学反应等系统研究表明,病原菌接种温度为15℃左右,伤口入侵,LOPAT试验的+---+,确定陕西省关中地区猕猴桃枝干细菌性溃疡病的病原为丁香假单脆杆菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv. actinidia).与国内其它地区报道的一致.     

猕猴桃细菌性溃疡病现状及防治方法

介绍了猕猴桃溃疡病的症状及病害循环,综述了猕猴桃细菌性溃疡病原菌的研究进展,并提出了农业措施防治、化学防治、生物防治等措施。     

猕猴桃溃疡病病原菌及检测方法研究进展

猕猴桃细菌性溃疡病的发生具有潜伏性、传播速度快、防治困难等特点,目前已经成为一种危害世界猕猴桃生产的毁灭性病害,其病原菌为丁香假单胞菌猕猴桃致病变种（Pseudomonas syringae pv. Actinidiae,Psa）。综合国内外相关研究报道,就猕猴桃溃疡病病原菌特点、防治、传播及检测等方面进行了系统综述,旨在加深对丁香假单胞菌猕猴桃致病变种的认识,同时为开展该病原菌的早期检测及防治研究奠定基础。     

猪GM-CSF荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank中猪粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）基因序列设计一对引物,用RT—PCR技术从猪外周血单个核细胞中扩增出296bpcDNA片段,并克隆到pGEM—TEasy载体中。经测序鉴定后,构建出含猪GM—CSFcDNA部分片段的重组质粒。通过重组质粒的Real—timePCR方法,建立了猪GM-CSFcDNA的Real—timePCR标准曲线及其直线回归方程。该方法重复性好,敏感性高、特异性强,可用于猪GM—CSFmRNA水平的定量检测。     

实时荧光定量PCR反应体系的优化研究

为了降低实时荧光定量PCR(Real-Time Fluorescent Quantitative PCR,FQ-PCR)技术的实验成本,提高利用效率,对影响FQ-PCR较敏感的因素二甲基亚砜(DMSO)、甘油和Mg2+等进行了优化试验.结果表明,10μL反应体系的最优组分为:1×rTaqBuffer,0.16 mmol/L dNTPs,0.24μmol/L Primer,2.5 mmol/L Mg2+,5％甘油,5％ DMSO,1×SYBR Green I,0.8 U rTaq酶,100 ng模板.该反应体系为经济型FQ-PCR的广泛应用奠定了基础.     

实时荧光定量PCR定量方法研究进展

实时荧光定量PCR以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点而成为了分子生物学研究中的重要工具,综述了实时荧光定量PCR技术及其定量方法的研究进展,并展望了其应用前景。     

猴痘病毒荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank发表的猴痘病毒(AF380138)F3L基因全序列,设计并合成了引物和TaqMan、MGB探针,建立了F3L基因的荧光定量PCR检测方法.应用该方法可从人工合成的猴痘病毒F3L基因片段(48048～48 509 bp)扩增典型的"S"型曲线,25 μL反应体系检测灵敏度可达68拷贝,但不能从鸡痘、山羊痘等病毒中扩增出相应的扩增曲线.结论:本方法可快速、敏感、特异地检测猴痘病毒.     

猕猴桃细菌性溃疡病生物防治初步研究

在56个放线菌菌株中,利用抑菌圈的大小比较筛选了7个对猕猴桃溃疡病病原细菌Pseudomonas syringae pv.Actinida具有颉颃作用的菌株,并进行了初步鉴定.用其中3个菌株进行了生物防治试验,结果表明,菌株X22具有较好的防治效果.     

布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法的建立

[目的]根据DNA序列数据库上已公布的布鲁氏菌外膜蛋白(outer membrane protein,Omp)Omp 25基因,设计一对引物和荧光探针,通过反应体系优化,建立一种布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法.[方法]以构建的外膜蛋白目的片段重组质粒为标准品,验证该方法的灵敏度、特异性,通过优化反应条件,建立标准曲线.通过对34份已知临床背景的样品检测,验证该方法的敏感性.[结果]建立的布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法,特异性验证符合率100％,最低检测限约为100 copies/μL,敏感度的检出率为100％,建立标准曲线的R2为0.994,扩增效率99.73％.[结论]建立的布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可以用于布鲁氏菌的检测.     

CPT-I基因荧光定量PCR检测方法的建立

CPT-ImRNA的表达对研究奶牛肝脏脂肪酸氧化代谢具有重要作用,CPT-I在肝脏中脂肪酸从细胞浆转移到线粒体过程中起关键作用。本研究应用双标准曲线方法,建立了CPT-I基因的相对荧光定量方法。结果表明,所建立的SYBRGreenI荧光定量PCR方法检测CPT-I基因具有较好的效果,为肝细胞CPT-I基因定量分析奠定了基础。     

猕猴桃细菌性溃疡病研究进展

笔者总结了近年来国内外学者对猕猴桃细菌性溃疡病的研究和发现,详细介绍了猕猴桃细菌性溃疡病的症状、危害和传播途径以及致病菌Pseudomonas syringae pv. actinidiae的特征、分类和起源,分析了其可能的致病机理并总结了猕猴桃的抗病性研究。基于目前对猕猴桃细菌性溃疡病的防治方法和相关研究发现,展望了猕猴桃细菌性溃疡病的研究方向和防治措施,提出采取预防致病菌传入、增强树势和药剂防治相结合的防治措施,为以后的研究和生产实践提供了理论依据。     

猪瘟疫苗病毒荧光定量PCR检测方法的建立

【目的】建立一种检测猪瘟疫苗病毒(HCLV)含量的荧光定量PCR方法。【方法】用RT-PCR方法扩增HCLV基因200bp片段,构建含有该基因片段的重组质粒,对此重组质粒进行系列稀释后作为SYBR GreenⅠ荧光定量PCR模板,绘制定量检测HCLV的标准曲线。【结果】在(6.4×107~6.4×102)copies/μL模板浓度范围内,荧光定量PCR的扩增效率为92.2%,标准曲线的决定系数为0.9997。该方法的精确灵敏度为640copies/μL,重复性试验的变异系数小于2%,对牛病毒性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等的检测结果均为阴性。临床检测结果显示,不同商品猪瘟疫苗之间的病毒载量存在明显差异。【结论】建立了1种具有良好特异性与敏感性的HCLV荧光定量PCR检测方法。     

猕猴桃细菌性溃疡病防治技术研究

从栽培措施、化学防治、物理防治等方面对猕猴桃细菌性溃疡病的防治技术进行了研究.结果表明,该病的防治应以栽植抗病品种、合理的栽培措施以及冻害的预防为基础.化学防治以刮除病斑后涂抹复方治溃灵效果较好,防治效果可达86.另外,将其它果树上的"桥接"技术应用于该病的防治也取得了很好的效果.     

猕猴桃细菌性溃疡病发生规律研究

通过调查,研究了猕猴桃细菌性溃疡病的发生与品种、树龄、苗源、气候、土壤、雌雄株等因子关系,结果表明,秦美猕猴桃感病较重;树龄大发病严重;用疫区苗木所建园发病严重;无霜期短的地区发病严重;栽植密度大发病重;雄株发病重于雌株;管理水平高的园子发病轻.根据发病规律,提出了几点建议.     

猕猴桃细菌性溃疡病的研究进展

猕猴桃细菌性溃疡病是一种严重威胁猕猴桃生产的毁灭性病害。近年来,该病在新西兰和意大利等猕猴桃出口大国爆发,并有世界范围内进一步扩散之势,给猕猴桃产业的发展造成了严重威胁。笔者基于国内外最新的研究报道,对猕猴桃细菌性溃疡病的发病症状、病原鉴定、快速检测方法、致病力差异、病原菌侵染机理、病害发生流行规律及防治技术等方面进行了综述,并探讨了该病害未来的研究方向与防治策略。     

猕猴桃细菌性溃疡病病菌越冬场所的研究

通过对病园的越冬病株枝、叶、芽、叶痕、根、野生猕猴桃病枝、土壤等进行采样、分离,再接种、鉴定,证明猕猴桃细菌性溃疡病菌在田间的越冬场所有：田间病株枝、叶、芽、叶痕、野生猕猴桃病株、田间病残体、土壤表土层。病株根系经多次分离未获得稳定的致病菌株。为生产上制定防治措施提供了依据。     

猕猴桃溃疡病检测技术研究进展概述

猕猴桃溃疡病是严重危害猕猴桃生产的重要细菌性病害,阻碍了猕猴桃产业的发展.建立有效的检测技术是该细菌性病害防控体系的关键,笔者在对相关文献研究进行总结的基础上,简述了近年来猕猴桃溃疡病相关检测技术的研究进展.     

CHRNA7基因荧光定量PCR检测方法的建立

为了检测烟碱型乙酰胆碱受体(nicotine acetylcholine receptors,nAChRs)α7亚基基因(CHRNA7)的表达,笔者根据人源CHRNA7基因序列设计引物,PCR扩增CHRNA7基因,亚克隆到pMD-18T载体中后,测序鉴定并制备重组质粒,以梯度稀释的重组质粒为模板,进行荧光定量PCR来绘制标准曲线,并进行灵敏度和重复性实验,成功建立了检测CHRNA7基因的荧光定量PCR方法。该方法最低可检测10~1 copies·μL~(-1),且重复性良好,在10~4,10~5,10~6 copies·μL~(-1)时,5次重复的变异系数分别是1.22%,1.90%,2.63%。此外,还对人宫颈癌细胞SiHa和人正常宫颈细胞Ect1/E6E7中α7 nAChR亚基基因表达量进行检测,结果显示,α7 nAChR亚基在SiHa细胞系的表达明显低于其在Ect1/E6E7细胞系中的表达(P=0.015)。     

猕猴桃细菌性溃疡病可视化LAMP检测方法的建立与应用

为了建立能够广泛应用于田间的猕猴桃细菌性溃疡病快速检测技术,参考国外经验,设计并优化LAMP反应的检测体系,并可将检测结果可视化;同时,测试评价优化后的检测体系的灵敏性及特异性;通过采集猕猴桃不同部位的组织样品,验证优化后的检测体系的田间实际应用效果.结果 表明:该方法能够特异性地检测出Psa病原菌,检测灵敏度达到10...