高原线虫草子座、菌核及生境土壤真菌多样性分析

采用Illumina Miseq高通量测序技术对高原线虫草(Ophiocordyceps highlandensis)子座、菌核和生境土壤样本真菌ITS序列进行测定,分析其真菌多样性和群落结构.所测样本共获得1650个OTU,子座、菌核和生境土壤的OTU数量分别为524、272和854个,注释的真菌隶属于19纲70目1...     

林下种植灵芝内生细菌和放线菌的分离鉴定

以林下种植灵芝为试材，采用16S rDNA鉴定方法，研究了不同分离方法对灵芝内生细菌和放线菌多样性的影响，以期能够发现产生活性成分的菌种或者新种，从而推动微生物医药的发展进程。结果表明：从健康的灵芝子实体内分离得到放线菌1门1属的4个菌株(LZ-F1、LZ-F2、LZ-F3、LZ-F4)和细菌2门4属的5个菌株(LZ-B1、LZ-B2、LZ-B3、LZ-B4、LZ-B5)。4株放线菌均属于链霉菌属(Streptomyces),5株细菌分别属于周杆菌属(Peribacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、新根瘤菌属(Neorhizobium)和芽孢杆菌属(Bacillus)。该研究为其它食用菌内生菌的分离提供了技术支撑，也为灵芝活性成分的进一步开发利用提供了较好的参考价值。     

分泌金黄色的真姬菇隐性污染菌包微生物的分离与鉴定

真姬菇(Hypsizygus marmoreus)凭借独特的风味和优良的保健功效成为工厂化栽培的食用菌之一,但生产过程中易受杂菌污染,为了分析污染原因,降低污染率和生产成本,采用稀释涂平板法从菌袋上部变黄吐黄水的污染菌袋中分离得到5株细菌及5株真菌,通过形态学结合细菌16S r RNA以及真菌ITS保守序列进行鉴定并构建了系统发育树。研究结果表明,5株细菌分别属于芽孢杆菌属(Bacillus)、肠杆菌科(Enterobacter)、西地西菌属(Cedecea)、假单胞菌属(Pseudomonas)、藤黄色杆菌属(Luteibacter),5株真菌分别属于枝孢菌属(Cladosporium)、青霉菌属(Penicillium)、曲霉菌属(Aspergillus)、格孢腔菌目(Pleosporales)、镰孢菌属(Fusarium)。系统发育树分析表明污染菌相互之间的亲缘关系较远。     

8种常见芽菜致病微生物的分离鉴定

对目前产业化程度较高的黄豆、黑豆、豇豆、萝卜、蕹菜、花生、黄秋葵、向日葵等8种芽菜患病植株上的致病微生物进行分离、纯化,共得到24株细菌菌株和8株真菌菌株;利用真菌ITS和细菌16Sr DNA通用引物,分别对分离得到的细菌和真菌基因组进行分子生物学鉴定。结果表明:24株细菌分属8个属,分别为克雷伯氏菌属(Klebsiella)、肠杆菌属(Enterobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)、不动杆菌属(Acinetobacter)、果胶杆菌属(Pectobacterium)、短稳杆菌属(Empedobacter)、戴尔福特菌属(Delftia)、从毛单孢菌属(Comamonas);24株细菌均为革兰氏阴性菌,除果胶杆菌属外,其余都不是典型的植物病原菌;其中不动杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属和假单胞菌属的细菌出现在2种或2种以上芽菜上;另外4个属的细菌则只出现在1种芽菜上,呈现出寄主的专化性。8株真菌分属3个属,分别为镰刀菌属(Fusarium)、链格孢属(Alternaria)和根霉属(Rhizopus);其中根霉属和链格孢属的真菌分别只出现在萝卜芽菜和蕹菜芽菜上,其他6种芽菜上分离得到的真菌菌株均属于镰刀菌属。分离菌株回接试验结果表明,所有菌株均能对芽菜造成不同程度的腐烂症状,生产过程中环境微生物污染同样能致芽菜腐烂病发生。     

苦豆子内生放线菌的分离鉴定及其拮抗菌筛选

采用3种消毒时间对健康苦豆子植株体内的内生放线菌进行分离。结果表明：消毒3 min消除非内生菌的影响效果较好;同一植株分离内生放线菌的数量,根部比茎、叶部多。经初步鉴定,苦豆子内生放线菌以链霉菌属和诺卡氏菌属为最多,分别占分离总数的35%和27%;其次为小多孢菌属,占12%;而类诺卡氏菌属、小单孢菌属、孢囊放线菌属和分枝杆菌属分离较少。26株纯化菌株对茄子枯萎病菌进行平板对峙培养,筛选出3株抑菌带宽度达到10 mm以上的菌株,其中菌株KDS22发酵液抑菌效果最好。     

对一种可以抑制疣孢霉生长的细菌的鉴定

对分离获得的FJ-08菌株进行形态特征的观察、生理生化实验,VITEK全自动微生物鉴定仪鉴定以及16S rDNA测序,结果表明该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);该菌对福建省蘑菇生产中广泛分布的3类疣孢霉菌的生长有抑制作用.     

红色红菇Russula rosea微生物菌群鉴定及分析

为探究红色红菇Russula rosea生境中的微生物群落及物种多样性，采用高通量测序技术或平板分离的方法对其子实体及菌根根际土壤进行分析。高通量方法分析结果，红色红菇生境中真菌种类覆盖5门，15纲，54目，75科，157属，其中绝对优势属红菇属Russula和金孢菌属Chrysosporium的占比分别为80%、2.3%,2个优势真菌R.rosea与Chrysosporiu spp.呈负相关关系；细菌种类覆盖3门，6纲，11目，20科，104属，其中绝对优势属杜檊氏属Duganella和假单胞菌属Pseudomonas分别占32%、20%，且Duganella sp与Pseudomonas sp属于正相关的功能群。此外，从R.rosea子实体上分离到3株真菌，从其根际土壤鉴定到4株真菌和2株细菌。研究为红菇的人工分离培养，微生态制剂的开发等提供理论依据。     

葡萄根瘤蚜共生细菌分离与分子生物学鉴定

从严格密封温室的盆栽巨峰葡萄根系、寄生的葡萄根瘤蚜虫体和根际土壤中分离获得17个细菌菌株,并对其16S rDNA基因进行PCR扩增和序列分析。结果表明,17个细菌菌株16S rD-NA均扩增出1 500 bp左右的片断,通过与Genbank上已知同源性较高细菌的16S rDNA部分序列对比,初步确定了这17个细菌菌株分属于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、枯草芽孢杆菌(Bacillus substilis),其中蜡状芽孢杆菌(菌株C2、R2、L2、L3、L4)和巨大芽孢杆菌(菌株L1、L4、R1、R3、C1、B1、B2、J1、J2)集中于葡萄根系和葡萄根瘤蚜虫体,而枯草芽孢杆菌(菌株T1、T2)只在根际土壤中发现,说明蜡状芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌为葡萄根系和葡萄根瘤蚜的共生细菌。     

黄瓜疫霉菌生防菌的筛选及鉴定

为了筛选对黄瓜疫霉菌有抑制作用的生防菌,采用土壤稀释法从湖南、北京等地采集的土壤样品中分离到269株放线菌和细菌,以黄瓜疫霉菌为靶标菌,通过平板对峙培养法,筛选出2株对黄瓜疫霉菌有明显拮抗作用的生防菌株。采用5倍稀释发酵液对黄瓜疫霉菌进行抑菌活性检测,放线菌X54和细菌P3的抑制率达到70%以上。通过培养形态特征观察、生理生化试验及16Sr DNA分子鉴定,放线菌X54为弗吉尼亚链霉菌(Streptomyces virginiae),细菌P3为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。     

苦豆子内生放线菌产酶特性分析及活性菌株鉴定

以宁夏干旱荒漠区的126株苦豆子为试材,采用透明圈法对分离自其内生放线菌进行分泌胞外酶活性检测.结果表明:有71株内生放线菌具有酶活性,占总菌株数的56.3％.其中有3株菌株酶活性最为显著,菌株NDZKDS73、NDZKDS7具有的淀粉酶活性最高,透明圈半径达到24.62mm和19.12m m;菌株FJYKDS5具有的蛋白酶活性高,透明圈半径16.94 mm;菌株FJYKDS11、BJGKDS2具有的纤维素酶活性最高,透明圈半径为24.72 mm和22.40 mm;菌株FJJKDS2具有的几丁质酶活性最高,透明圈半径17.76mm;菌株NDZKDS24、NDZKDS20对葡聚糖酶活性最高,透明圈半径为12.06mm和10.50mm.通过形态特征和16S rRNA基因序列同源性分析,有7株活性菌属链霉菌属(Streptomyces),1株属拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis).     

贝莱斯芽孢杆菌XC1的筛选、鉴定及其对苹果连作障碍的影响

从连作苹果园健康苹果树根际土壤中筛选出1株对苹果连作障碍镰孢属病原菌具有较强拮抗作用的细菌XC1,该菌对尖孢镰孢菌的抑菌率最高,达到79.83%。根据其形态、生理生化特征和基于16S rDNA、gyrA基因的系统发育分析,鉴定该菌为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。目前菌株XC1已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCCNo.20057。苹果连作土盆栽试验表明,XC1菌肥处理能显著促进平邑甜茶(Malus hupehensis Rehd.)幼苗的生长,其株高、地径、鲜质量和干质量分别比对照提高了54.8%、34.8%、121.1%和96.0%;显著提高连作土壤中的蔗糖酶、脲酶、过氧化氢酶和中性磷酸酶的活性,分别为对照的1.57倍、2.71倍、1.21倍和1.79倍;显著减少连作土壤中真菌的数量,提高细菌和放线菌的数量,且对尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)有很好的抑制作用,尖孢镰孢菌的基因拷贝数比对照降低了76.4%。这说明贝莱斯芽孢杆菌抑制连作障碍病原菌的效果明显,可改善土壤环境,促进平邑甜茶幼苗的生长,能在一定程度...     

不同菌剂处理对葡萄叶片细菌多样性的影响

以喷施砖红微杆菌Y24和解淀粉芽孢杆菌N22菌剂后的葡萄叶片为试材,采用PCR-DGGE方法研究葡萄叶片表面细菌多样性,以期阐明2种菌剂对葡萄叶片细菌多样性的影响。结果表明:经过PCR扩增出大小约为250bp的细菌16SrDNA V3可变区。经DGGE电泳共标记出17条带,其对应葡萄叶片上的15种已知细菌包括芽孢杆菌属(Bacillus)、微球菌属(Micrococcus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Streptomyces)等和2种非可培养细菌。其中砖红微杆菌Y24菌剂的细菌种类更为丰富,其中4条特有条带所代表的细菌类群包括微杆菌属(Microbacterium)、马杜拉放线菌属(Actinomadura)、黄假单胞菌(Pseudomonas flava)和简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)。聚类分析表明,Y24菌剂处理后与对照及N22菌剂处理的叶片在细菌多样性方面有明显差别,而N22菌剂的处理与对照没有差别。系统发育分析表明,葡萄叶片喷施菌剂后,其表面细菌仍维持一定的多样性。砖红微杆菌Y24菌剂可显著提高葡萄叶片的细菌多样性,而解淀粉芽孢杆菌N22对葡萄叶片细菌多样性无显著性影响。     

大青叶樱桃根际微生物种群结构及其变化动态

利用选择性培养基,对2年生大青叶樱桃(Cerasus pseudocerasus)根际微生物进行了分离、鉴定和分类,分析了不同物候期根际微生物种群结构的变化。结果表明,从大青叶樱桃根际分离纯化获得的细菌分别属于15个属,以芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)为主;放线菌属于链霉菌属的6个类群,以白色类群(Albosporus)、黄色类群(Flavus)为主;真菌以镰刀菌(Fusarium)和木霉属(Trichoderma)为主。不同生育期根际微生物种群结构不同,落叶期根际细菌种群结构最丰富,萌芽期最少。     

高原线虫草子座和菌核活性成分比较

采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)和紫外分光光度法(ultraviolet-visible spectrophotometry,UV)对高原线虫草(Ophiocordyceps highlandensis)子座和菌核的核苷类、麦角甾醇、总多糖、甘露醇、黄酮、皂苷和三萜等活性成分进行测定和分析。结果表明,核苷类成分、麦角甾醇含量,子座高于菌核;而总多糖、甘露醇、黄酮、皂苷、三萜的含量,菌核高于子座。     

一株辣椒炭疽病生防芽孢杆菌的筛选

从贵州省安龙县辣椒炭疽病发病地块采集健康辣椒根际土壤,通过平板对峙法获得具有明显拮抗辣椒炭疽病菌(Colletotrichum capsici)的1株芽孢杆菌,通过形态学和生理生化特征观察,并结合16S rDNA、gyrA基因序列分析结果构建系统发育树。结果表明:该菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。该菌株可产生蛋白酶、纤维素酶、嗜铁素和磷酸酯酶等生防相关酶,对高粱叶斑病菌(Alternaria alternata)、烟草黑胫病菌(Phytophthora nicotianae)、石榴干腐病菌(Phomopsis sp.)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)等5种重要植物病原真菌也有很强的抑菌活性,可作为生防制剂进一步研究开发。     

生草覆盖‘寒富’苹果园土壤优势细菌的碳代谢特征研究

 为了解土壤管理制度对果园土壤微生物碳代谢特征的影响,研究了生草覆盖‘寒富’苹果园不同时期土壤优势细菌碳代谢功能及种群组成。结果表明,6月、7月土壤中优势细菌数量及碳代谢能力明显高于4月、5月、8月和9月。生草覆盖处理4月分离到的优势细菌菌株数较清耕少1株,5—8月相同,而9月较清耕多1株。除4月外,生草覆盖处理分离到的优势菌株明显增强了对蔗糖、葡萄糖、淀粉等糖类化合物,山梨醇、肌醇等醇类化合物,天门冬氨酸及白氨酸等氨基酸类化合物的利用能力。16S rDNA序列分析可知,53.8%的优势细菌属于芽孢杆菌属（Bacillus）,存在于多数供试土壤中,产碱菌属（Alcaligenes）、假单胞杆菌属（Pseudomonas）和厚壁菌属（Firmicutes）也因季节和管理措施影响而成为不同土壤的优势菌属。与4月、5月、8月和9月相比,整体上6月和7月土壤中相对增加了产碱菌属（Alcaligenes）和厚壁菌属（Firmicutes）,其中7月生草覆盖处理较清耕增加了厚壁菌属（Firmicutes）和一些不可培养的菌属。     

一株葡萄白腐病拮抗放线菌的筛选及鉴定

采用梯度稀释法从葡萄园土壤中筛选到9株抑制葡萄白腐病的放线菌,研究了其抑菌情况和离体果防治效果,其中对葡萄白腐病抑菌效果最好的菌株为K5,其抑菌率为62.56%。处理1 (喷发酵原液50倍稀释液24 h后再刺伤接种葡萄白腐病菌)和处理2 (刺伤接种白腐病菌24 h后,再喷拮抗菌50倍稀释发酵液)两个处理中,K5的相对防效分别为63.75%和58.75%。形态学和16S rDNA测序鉴定表明K5菌株为淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae)。     

羊耳蒜内生真菌的分离鉴定与抑菌活性筛选

以兰科野生植物羊耳蒜为试材,采用常规无菌培养技术分离其根部的内生真菌,同时采用平板对峙的方法,研究了所获得的内生真菌菌株对常见植物病原真菌的抑菌活性。结果表明:从羊耳蒜的根中共分离获得43株内生真菌,经形态学鉴定分属于7个属,其中丝核菌属占优势。筛选得到4株具有较强抑菌活性的菌株,占分离菌株总数的9.3%,抑菌活性集中在油菜菌核病菌。结合分子生物学鉴定发现,这4株菌株分别为腐皮镰孢菌Fusarium solani、柱孢霉属菌株Cylindrocarponsp.、轮枝菌属菌株Lecanicilliumsp.和胶膜菌属菌株Tulasnella sp.。     

香蕉枯萎病拮抗菌的鉴定及香蕉组培袋装苗防病试验

采用平板对峙法比较海南省土壤中分离到的5株对香蕉枯萎病有较强拮抗作用细菌,并进行形态特征及16S rDNA序列鉴定.结果表明,菌株S40为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis.不同浓度S40的发酵滤液均可抑制病原菌菌丝生长、孢子萌发和生长.该拮抗菌发酵液可明显推迟组培袋装香蕉苗发病和死亡,不同处理的相对防治效果均大于70%.     

银耳杨梅霜病发病机理及其病原菌抗菌谱的测定

以银耳杨梅霜病发病菌筒为试材,采用平板培养及分子生物学方法,研究了杨梅霜病病原菌的生物学特性及抗菌谱。结果表明:分离到3株病原菌Js-1T、Js-2、Js-3的形态特征和培养特性相同,16SrDNA酶切带型完全一致,三者为重复菌株;回接试验证实Js-1T菌株为杨梅霜病的病原菌;对峙培养试验表明,Js-1T菌株产生的抗菌物质抑制香灰菌和银耳菌丝的生长;16SrDNA序列分析表明,Js-1T菌株与链霉菌属菌株Streptomyces hebeiensis strain NBRC 101006T的同源性最高为97.62%。结合形态特征和分子生物学分析,证明Js-1T菌株属于链霉菌属。同时测定了Js-1T菌株的抗菌谱,其对大肠杆菌的抑菌圈直径为2.76cm,对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径为1.26cm;对真菌核盘菌、有害疣孢霉菌、稻瘟菌、木霉、根霉的抑菌圈直径分别为4.29、4.07、3.85、3.37、2.90cm。此外,对镰刀菌和香蕉枯萎病菌天蓝一号也具有一定的抑制作用。