原位杂交检测鸡的马立克氏病

马立克氏病（ Ｍａｒｅｋｓ Ｄｉｓｅａｓｅ, Ｍ Ｄ）是由马立克氏病病毒（ Ｍ Ｄ Ｖ）引起的 Ｔ淋巴细胞肿瘤。本文通过 Ｐ Ｃ Ｒ 方法扩增出长为３３９ｂｐ 的部分ｍ ｅｑ 基因片段,再以随机引物法制备 Ｄｉｇ 标记ｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针,首次采用原位杂交技术对１２ 例 Ｍ Ｄ 自然发病鸡的内脏组织石蜡包埋切片中的ｍ ｅｑ基因ｍ Ｒ Ｎ Ａ 进行检测。结果显示,ｍ ｅｑ 基因ｍ Ｒ Ｎ Ａ 在肿瘤组织中均有分布,这表明ｍ ｅｑ 基因的 Ｒ Ｎ Ａ 转录本可以作为 Ｍ Ｄ肿瘤的特异性分子标志物。     

猪生殖——呼吸综合征病毒蛋白的结构与功能

猪生殖－－呼吸道综合征（ＰＲＲＳ）病毒是新发现的ＲＮＡ病毒，其基因组有８个开放阅读框架（ＯＲＦ），ＯＲＦ１编码病毒的ＲＮＡ聚合酶，ＯＲＦ２－７分别编码糖蛋白ＧＰ２－５、Ｍ蛋白和Ｎ蛋白。本文概括了近几年来国际上对其病毒蛋白的研究成果，对这些病毒蛋白的结构，功能及其免疫学地位进行了分析和讨论。     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔的接种１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株，这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株，ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应，经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＣ２ａ，ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０＾３～１０＾５之间。     

免疫鸡MDV感染后羽毛根HVT的分离及HVT免疫对MDV抗原检测的影响

５只ＨＶＴ免疫鸡,实验感染ＭＤＶ后的第１～１０周期间,分别采用初次细胞分离培养物上清中的自由病毒粒子鉴定,ｄｏｔ－ｂｌｏｔＤＮＡ杂交和常规ＡＧＰ试验等方法,对并发感染鸡羽毛根进行了病毒及病毒抗原的动态检测与比较。结果显示,在上述羽毛根中可同时存在ＨＶＴ粒子和ＭＤＶＤＮＡ。ＨＶＴ可分离时间为ＭＤＶ攻毒后１～７周;ＭＤＶＤＮＡ最早检出时间为ＭＤＶ攻毒后的第１８～２２天,并达到其持续性（２２～７０ｄ）的检出率最高峰（１００％）;而ＡＧＰ法对此期间鸡只羽毛根ＭＤＶ抗原的最早检出时间在第２２天,且检出率很低。因此,羽毛病毒抗原ＡＧＰ检测法,对免疫鸡只或鸡群ＭＤＶ感染的诊断仍然是特异的,但较单纯感染的检测,其检出率更低,因而更难以反映出免疫鸡群中ＭＤＶ感染的真实状况。     

感染鸡传染性贫血病毒的雏鸡新城疫疫苗免疫后局部体液免疫球蛋白含量变化

本试验对感染鸡传染性贫血病毒（ＣＩＡＶ）雏鸡新城疫（ＮＤ）疫苗免疫及其强毒攻击后，其泪液、气管液、肠液和胆汁的免疫球蛋白ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量的动态变化进行了检测。结果发现，感染雏鸡泪液的ＩｇＧ、ＩｇＡ和气管液的ＩｇＧ及胆汁的ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量均于接种ＮＤ疫苗后７～２８天明显低于未感染ＣＩＡＶ的免疫对照雏鸡；泪液的ＩｇＭ和气管液的ＩｇＡ含量在ＮＤ免疫后１４～２８天明显降低；肠液的ＩｇＡ和ＩｇＭ、ＩｇＧ含量分别于免疫后７～１４和７、１４天也显著减少。表明ＣＩＡＶ感染雏鸡对ＮＤ疫苗免疫的局部体液免疫应答能力降低。ＮＤ强毒攻击后，ＣＩＡＶ感染ＮＤ免疫雏鸡泪液、气管液、肠液和胆汁的ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ含量及免疫保护率，均明显低于未感染ＣＩＡＶ的免疫对照雏鸡。     

抗牛病毒性腹泻／粘膜病病毒单克隆抗体的抗原结合位点分析

用ＥＬＩＳＡ测定了８株抗牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原结合位点，通过ＥＬＩＳＡ相加试验证实，８株单克隆抗体识别的抗原位点大多数比较接近，其中５Ａ５与５Ｃ２，５Ａ９与５Ｆ１１，以及５Ｄ７、５Ｃ９、２Ｇ３、４Ｅ６四株所识别的抗原位点相同或非常接近。     

抗牛病毒性腹泻/粘膜病病毒单克隆抗体的抗原结合位点分析

用ＥＬＩＳＡ测定了８株抗牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原结合位点，通过ＥＬＩＳＡ相加试验证实，８株单克隆抗体识别的抗原位点大多数比较接近，其中５Ａ５与５Ｃ２，５Ａ９与５Ｆ１１，以及５Ｄ７、５Ｃ９、２Ｇ３、４Ｅ６四株所识别的抗原位点相同或非常接近。     

口蹄疫病毒灭活的研究

将兔体传代的Ｏ型口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）适应ＢＨＫ２１细胞培养，该细胞毒的ＴＣＩＤ５０达７－７．６。在ＰＨ７．９的介质中，用胺类衍生物能使ＦＭＤＶ彻底灭活。给豚鼠接种灭活毒后１个月攻击强毒，能极有效地保护豚鼠抵抗强毒攻击，实验动物的保护达１００％。     

应用间接免疫荧光法检测鸡传染性贫血病病毒抗体的研究

用鸡传染性贫血病病毒（ＣＩＡＶ）ＭＳＢＩ－ＴＫ５８０３毒株感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ；细胞涂片为抗原，建立了检测ＣＩＡＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＩＦＡ）。应用该ＩＩＦＡ方法对人工感染的ＳＰＦ鸡进行了检测１５只１日龄ＳＰＦ鸡在接种后第７、１４天时均呈阴性反应；２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，３５天时呈明显阳性反应；１４只４０日龄ＳＰ     

口蹄疫病毒灭活的研究

将兔体传代的Ｏ型口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）适应ＢＨＫ（２１）细胞培养，该细胞毒的ＴＣＩＤ（５０）达７～７．６。在ｐＨ７．９的介质中，用胺类衍生物能使ＦＭＤＶ彻底灭活。给豚鼠接种灭活毒后１个月攻击强毒，能极有效地保护豚鼠抵抗强毒攻击，实验动物的保护达１００％．     

兔感染非致病性兔出血症样病毒的血清转化研究

某商业兔场已４年未发生兔病毒性出血症（ＲＨＤ），在对２３８只兔的ＲＨＤＶ抗体普查中发现兔血清转化现象，且其原因是由一株与ＲＨＤＶ抗原性相关、但无致病性的嵌杯病毒所致。３１日龄断奶仔兔的阳性率为３３．３％，断奶后５～７天、１３～１４天、１９～２０天、３２～３３天的阳性率分别为２７．６％、５６．１％、９０．３％、１００％。种兔血清全为阳性。种兔和刚奶仔兔的ＲＨＤＶ抗体主要是ＩｇＧ。然而，在断奶后１３～１４天却主要是ＩｇＭ和ＩｇＡ。大龄育肥兔ＩｇＭ和ＩｇＡ减少，ＩｇＧ增多。血清转化时未出现ＲＨＤ特异症状。由此可知，肉兔在断奶后不久就感染了这种非致病性病毒。     

绵羊进行性肺炎病毒对驴胎皮肤细胞的感染试验

绵羊进行性肺炎病毒在驴胎皮肤细胞（Ｄ细胞）上连续传代培养至６０代，随着代次的增加，以多核巨细胞为特征的细胞病变可提前至接毒后２－３天出现，至５－６天时大部分贴壁细胞脱落，病毒滴度达高峰（７．２５ＴＣＬＤ５９／０．１ＭＬ）。高代次的传代细胞毒经电镜超薄切片观察，病毒粒子呈政治协商会议形，直径８０－１２０ｎｍ，大多散在或以聚堆的形式分布在细胞外，环境在胞浆膜可以见到出芽增殖的病毒粒子，以绵羊进行性肺炎     

用狄高辛标记DNA探针从人工感染鸡脏器检出Ⅰ型马立克氏病病毒

用狄高辛标记ＤＮＡ探针从人工感染鸡脏器检出Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ），检出结果表明，人工感染ＧＡ强毒第三天就可从５只鸡中的三只心、肝、肺、肾、法氏囊、胸腺、肌胃检出Ⅰ型ＭＤＶ，第２５天５只鸡的脏器均能检出Ⅰ型ＭＤＶ。同时从感染第１０天就可从羽囊检出Ⅰ型ＭＤＶ，到第１５天羽囊检出阳性率１００％。     

鸡贫血病毒山东分离株全基因克隆

设计了 Ｃ Ａ５、 Ｃ Ａ６ 和 Ｃ Ａ７、 Ｃ Ａ８ 两对引物,分别扩增鸡贫血病毒（ Ｃ Ａ Ｖ）山东分离株 Ｓ Ｊ１ 的 １５ Ｋｂ 和 ０８ Ｋｂ Ｄ Ｎ Ａ 片段。并将这两个片段分别克隆至 ｐ Ｕ Ｃ１１９ 和ｐ Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（ Ｓ Ｋ＋ ）载体质粒,最后一起克隆到 ｐ Ｑ Ｅ３２ 载体质粒上,使两个片段前后连接成一个全长的病毒 Ｄ Ｎ Ａ。用该质粒转染 Ｍ Ｄ Ｃ Ｃ Ｍ Ｓ Ｂ１ 细胞,经免疫荧光抗体法和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测到 Ｃ Ａ Ｖ 病毒,结果证明我们得到了一个 Ｃ Ａ Ｖ 感染性全基因克隆。     

番鸭细小病毒ＭＤＰＶ—Ｑ株ＶＰ２蛋白基因的克隆与序列测定

根据genebank中番鸭细小病毒（ＭＤＰＶ）的基因序列，设计了一种引物ＬＨＭＰ７／ＬＨＭＰ８，同时在这２条引物中分别加入２种限制性核酸内切酶SacⅡ和KpnⅠ的酶切位点，使扩增后的ＤＮＡ片段的两端，分别含有这２种酶的酶切位点。应用ＰＣＲ技术扩增了ＭＤＰＶ－株的ＶＰ２蛋白基因片段。将扩增后的ＶＰ２蛋白基因重组到pMD18-T质粒载体上，并插入片段进行序列测定，测定结果表明，我国分离的ＭＤＰＶ－Ｑ株基ＶＰ２蛋白基因序列与国外分离株的同源性达９７．９％。     

感染鸡传染性贫血病毒的雏鸡新城疫疫苗免疫后局部体液免疫球蛋白…

本试验对感染鸡传染性贫血病毒雏鸡新城疫疫苗免疫及其强毒攻击后，其泪液，气管液，肠液和胆汁的免疫球蛋白ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ含量的动态变化进行了检测。结果发现，感染雏鸡泪液的ＩｇＧ，ＩｇＡ和气管液的ＩｇＧ及胆汁的ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ含量无于接种ＮＤ疫苗后７－２８天明显低于未感染ＣＩＡＶ的免疫对照雏鸡，泪液的ＩｇＭ和气管液的ＩｇＡ含量在ＮＤ免疫后１４－２８天明显降低；肠液的ＩｇＡ和ＩｇＭ，ＩｇＧ仰望     

禽传染性支气管炎病毒免疫原基因组的RT—PCR研究

本文报道了用聚合酶链反应获取ＩＢＶ Ｍ４１株和广东肾变栋Ｄ４１免疫基因的研究情况，所用引物为ＩＢＶ Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｓ１基因两侧的对应序列，跨幅为１．７ｋｂ；ＤＮＡ模板为ＩＢＶＭ４１和Ｄ４１株经病毒ＲＮＡ提取后反转录而得；２株病毒所获的ＰＣＲ产物与预期一致。     

口蹄疫病毒适应于细胞培养的研究

将不同型（Ｏ，ＡｓｉａＩ）系（免系和鼠系）和不同代次的口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）适应于ＢＨＫ２１细胞培养物。兔化Ｏ型毒传至第１５代即产生明显的细胞病变（ＣＰＥ）ＴＣＩＤ５０可达７．０～７．６；兔化ＡｓｉａＩ需传２０代以上才能产生ＣＰＥ．ＴＣＩＤ５０为６．０～６．５。     

猪伪狂犬病病毒气溶胶感染及排毒

６头猪每天用猪伪狂犬病毒气溶胶感染１５分钟，连续３天，总病毒量约为４．５ｌｏｇ１０ＴＣＩＤ５０。每个隔离舍内，监察猪置于离感染猪２英尺处。在第３、７和１３天收集吸入气溶胶猪呼出的气体。感染猪的呼吸及其它临床症状与野外伪狂犬病病例相似。所有感染伪狂犬病病毒（ＡＤＶ）猪在感染后７－１０天血清阳转，监察猪临床症状轻微，只有３头猪血清阳转。     

番鸭细小病毒弱毒株的选育及其生物学特性

应用生物技术对番鸭细小病毒莆田株（ｍｕｓｃｏｖｙｄｕｃｋｌｉｎｇｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ，ＭＰＶ－Ｐ）进行诱变，选育出符合制苗用的弱毒疫苗株（ＭＰＶ－Ｐ１）。该弱毒株失去了对１日龄雏番鸭的致病力，对番鸭胚的ＥＬＤ５０为ｌｇ４．５～ｌｇ５．０；对ＭＤＥＦ细胞ＴＣＩＤ５。为ｌｇ５．０～ｌｇ６．０；在雏番鸭体内连续传５代，未见毒力返强现象。１日龄番鸭免疫接种ＭＰＶ－Ｐ１后，第３天部分鸭血清中出现抗体，第７天全部出现抗体，第２１～３０天抗体效价值达高峰。肌肉注射比滴鼻免疫接种方法效果好。该弱毒株具有良好的免疫原性和遗传稳定性。