适合MSAP分析的核桃子叶DNA提取方法

正核桃(Juglans regia L.)营养价值高,含有丰富的脂肪酸和蛋白质[1],子叶是核桃重要的营养储存器官,作为常用的实验材料,可用来组织培养进行生根实验等相关研究[2-3]。MSAP是在AFLP基础上建立起来的在全基因组范围检测5’-CCGG位点的胞嘧啶甲基化变化的实验技术[4],具有多态性高、无需预知DNA序列的优点,但其需要提取高质量的基因组DNA,存在于DNA中的多糖等杂质会对酶切等     

核桃基因组DNA甲基化修饰位点的MSAP分析

以‘中宁强’核桃品种成熟叶片为材料,采用优化的MSAP反应体系,在全基因组水平对核DNA进行甲基化修饰位点分析,结果表明:选用20对引物组合,共扩增出1 060条清晰、重复性好的谱带,平均每对引物扩增出53条谱带,其中,甲基化位点241个,甲基化修饰比例为22.73%。对部分核桃DNA甲基化修饰位点进行回收测序,得到10条存在DNA甲基化修饰的DNA序列,BLASTn分析表明,核桃基因组中多种类型的DNA序列存在甲基化修饰现象。     

核桃总DNA提取方法研究

研究了适于核桃基因组DNA的提取方法,并对DNA初步进行了质量检测,结果表明此方法可有效去除次生物质对DNA的干扰,可用于随机引物RAPD扩增和随后的各种遗传学分析.     

漾濞核桃叶片基因组DNA的两种提取方法效果比较

以漾濞核桃不同生长期的叶片为材料，采用高盐低pH法和改良CTAB法作提取其基因组DNA的效果比较实验。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和RAPD扩增对所提取的DNA样品进行检测，比较所得DNA的产量、质量，认为从漾濞核桃不同发育时期叶片中获得DNA的提取效果不同。4种叶样以冬芽和新叶的效果为好，老叶最差；用两种提取方法从叶片中得到的DNA产量和质量有所不同，高盐低pH法提取的DNA纯度高，但是产量较低；而改良CTAB法则相反，产量高，纯度低。     

核桃DNA的提取及RAPD分析的引物筛选

以核桃叶片为材料,对其DNA提取方法和RAPD引物的筛选进行了研究。结果表明,采用核沉淀法从核桃叶片中能提取到高质量的DNA,可以用于RAPD分析;从120条随机引物中筛选出了14条显示核桃遗传差异的多态性引物。     

一种适合AFLP分析的油茶DNA提取方法

以油茶的成熟叶片为材料提取DNA,40个样品用改良的提取纯化方法成功提取出适用于AFLP分析的高质量DNA,OD260/OD280在1.7-2.0之间,可以用于AFLP反应。该方法打破了仅能用幼嫩叶片作为提取材料的限制,具有更广泛的适用性和重要的实用性。     

核桃楸种仁可溶性多糖热水提取工艺研究

利用正交实验设计的方法对核桃楸种仁可溶性多糖的热水提取工艺进行了研究。结果表明,核桃楸种仁可溶性多糖热水提取的最佳工艺参数为：提取温度100℃、提取时间2.5h、料液比1∶30,此时的多糖得率为6.134%;多糖提取以2次为宜。     

Fe3+浓度对核桃成熟子叶离体生根培养的影响

为给研究子叶生根的机理和铁盐作用机制提供参考,以辽宁1号核桃品种成熟子叶近胚端为材料,研究了Fe~3+浓度对子叶不定根发生和伸长的影响.结果表明:当Fe~3+浓度为0时生根能力最差,第12天生根率为66%,随着Fe~3+浓度升高,生根能力明显增强,以0.352 pmol/L为最优,第8天生根率为100%.Fe~3+...     

核桃子叶不定根发生调控的研究

以核桃成熟或近成熟种实子叶为试材 ,在 1 4DKW基本培养基上其顶部 (近胚端 )的生根率达1 0 0 % ,而中部和基部 (远胚端 )的生根率为 0。在生根过程中顶部内源吲哚乙酸 (IAA)表现为初期上升 ,其后稳定在一定水平 ,当根原基开始生长时 (培养 4d)出现一个高峰 ;而中、基部内源IAA水平在培养初期下降 ,而后维持在一定的水平 ;蛋白凝胶电泳分析表明 :62 .8和 3 8.4kDa是与子叶不定根发生相关的蛋白条带 ,在不定根发生过程中 ,该带在子叶顶部表达增强 ,而中部、基部则消失。当培养基中附加一定水平的吲哚丁酸(IBA) ( 0 .5～ 1 0mg·L- 1 )时 ,子叶中、基部被诱导产生不定根 ;附加 2mg·L- 1 IBA ,其内源IAA的变化与子叶顶部在 1 4DKW基本培养基上发根时有相似的趋势 ;同时该处理启动表达了 62 8kDa蛋白条带和抑制表达3 8 4kDa蛋白条带。反之当培养基中附加 6-苄氨基腺嘌呤 (BAP)又抑制子叶生根 ,也抑制了与生根相关的IAA变化和蛋白表达。这一结果和良好的研究模式为从分子水平上深入认识木本植物不定根发生机制奠定了基础。     

从土壤中提取DNA方法的研究进展

从土壤中获得微生物的传统的方法是富集、培养、分离，在此过程中造成微生物多样性的丢失，种群构成发生变化。不经过传统培养，直接从土壤提取总DNA并进行分子生物学分析来研究土壤微生物种群情况，能够更直接更可靠地反映土壤微生物的原始组成情况，是近几年发展起来的、全新的实验手段。本文介绍了从土壤中直接提取DNA的方法及其研究成果。     

16个早实核桃良种遗传多样性的FISH-AFLP分析

采用FISH-AFLP技术,筛选9对E+3和M+3引物组合,对我国首批16个早实核桃良种进行了基因组DNA水平上的检测,结果表明:共获得1 072条可统计的条带,其中946条呈多态性,平均的多态性带百分率达88.12%;经9对引物检测的16个品种基因型各不相同,均得到数目不等的特征带,并能将16个早实核桃良种完全区分开。研究分析了早实核桃良种的遗传多样性和亲缘关系并建立了它们的指纹图谱。     

华北低丘山区核桃-决明子复合模式的根系分布

采用分层挖掘法,对株行距为3 m×8 m的核桃-决明子复合模式中的根生物量、总根长密度、吸收根的根长密度和根系直径等进行了调查。结果表明：核桃单作的总根长密度比核桃间作的高7%左右,且在各个土层中吸收根的根长密度都高于核桃间作,而二者的总根生物量和根系直径则差异较小。决明子单作的根系直径比间作决明子的大27.73%,但二者的根长密度和根生物量则差异不大。在核桃-决明子复合模式中,核桃总根生物量和吸收根长均占复合模式总根量的一半以上,其中,在水平方向上,决明子在树行南侧2.5、4.0 m位置根系分布最多,而树行南北1.5 m范围内则较少;核桃根系则主要分布在树行两侧1.5 m范围内。垂直方向上,核桃在30~80 cm土层中的根生物量和吸收根长分别占其总量的64.79%和61.17%,而59.54%的决明子根系分布在0~20 cm土壤中。     

喙尾琵甲DNA提取方法比较与AFLP反应体系的建立

采用CTAB法、改进SDS-蛋白酶K法、SDS-饱和氯化钠法和提取试剂盒对喙尾琵甲的肌肉、虫卵和幼虫进行DNA提取,比较了DNA的提取和保存质量,并对AFLP试验的酶切时间、预扩增产物稀释倍数和选择性扩增引物量等关键因子进行试验和优化。结果表明:4种方法对肌肉组织提取的DNA质量都较好;3种传统方法提取的DNA的保存时间长于试剂盒提取的DNA;使用EcoR Ⅰ/Mse Ⅰ内切酶组合,10 U EcoR Ⅰ和2 U Mse Ⅰ分两步各酶切2 h,T4连接酶3 h连接后,以20倍稀释的预扩增产物和5 ng/35 ng的E+3/M+3引物量进行选择性扩增,建立了喙尾琵甲AFLP分子标记体系。     

核桃杂交种‘中宁奇’与北加州黑核桃、魁核桃生长特性比较

[目的]通过对核桃杂交种‘中宁奇’以及北加州黑核桃、魁核桃的年轮生长特性进行比较研究,掌握‘中宁奇’的树体生长进程,为品种应用和优质木材生产提供参考。[方法]利用树木解析法,对河南省洛宁县23年生核桃杂交种‘中宁奇’以及北加州黑核桃、魁核桃的胸径、树高及材积生长量及生长进程进行比较分析。[结果]在生长进程方面,3个树种的胸径、树高、材积的生长率呈逐年降低的趋势,第14年以后生长率基本平稳。23年生树体胸高形数为0.37 0.42,干形较通直。‘中宁奇’和北加州黑核桃的胸径速生期为第2 8年,魁核桃为第2 10年,其中,‘中宁奇’胸径总生长量和平均生长量最大,分别为36.68、1.59 cm。3个树种树高速生期也主要集中在前8年。在整个生长过程中,3个树种材积总生长量和平均生长量一直处于增长趋势,直到23年生时,材积生长量仍未达到数量成熟,其中,‘中宁奇’材积总生长量和平均生长量分别为0.49、0.02 m3,明显高于北加州黑核桃和魁核桃。[结论]‘中宁奇’作为核桃良种砧木的同时,可作为速生优质硬阔用材树种,是培育阔叶大径材的优良选择,将为培育高档家具用材发挥重要作用。     

凉山州核桃坚果表型多样性研究

[目的]以四川省凉山州核桃和泡核桃农家类型的坚果为样本,研究其表型丰富度和变异特点,为其资源挖掘和合理利用提供理论依据。[方法]以15个核桃和泡核桃居群的330棵实生单株为研究材料,利用18个坚果表型相关性状进行多样性和聚类分析。[结果]表明:(1)凉山州核桃和泡核桃实生居群坚果表型性状变异系数为8.46%59.47%,平均为35.26%,单果质量极大(20.0 g)和极小(5.0 g)的资源均占一定比例;该地区坚果资源在《植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南-核桃属》中所描述坚果表型性状的基础上,新增了3个垂直于缝合线纵切面形状和1个核仁皮色特征;居群遗传性状Simpson指数为0.201 0.855,Shannon-Wiener指数为0.649 2.873,说明凉山州核桃和泡核桃坚果表型多样性比较丰富。(2)18个坚果表型性状的居群内变异均大于居群间,居群间的表型分化系数为6.03%,说明居群内变异是凉山州坚果表型多样性的主要来源。(3)UPGMA聚类分析结果表明,凉山州坚果表型性状Manhattan距离表现出与地理距离或气候条件显著正相关的趋势。[结论]凉山州核桃和泡核桃资源坚果表型丰富度高,是重要的核桃资源多样性分布地区。     

一种有效的蚜虫基因组DNA提取方法

蚜虫属于同翅目(Homoptera)蚜总科(Aphidoidea)和球蚜总科(Adelgoidea),世界上已知种类为4 000多种[1],我国已报道的种类1 000余种[2]。蚜虫大多数是害虫,它们刺吸植物汁液,直接影响植物生长,同时间接传播病毒病害,造成农业上的损失,如棉蚜(Aphis gossypiiG lover)、麦长管蚜(Macrosiphum avenae(Fabricius))等;少数种类如五倍子蚜(Schlechtendalia chinensis(Bell))是重要的资源昆虫,具有较高的经济价值[3]。蚜虫身体微小,形态变异大,生活习性复杂,并具有多型多态现象,研究它较为困难,尤其是在分类和鉴定、近缘种的识别等方面,传统的研…