苯乙醇胺A人工抗原的合成及鉴定

采用重氮化法将苯乙醇胺A分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原苯乙醇胺A(PEAA)-BSA和检测抗原PEAA-OVA。经紫外扫描法和SDS-PAGE鉴定表明偶联成功,偶联比分别为15∶1、17.4∶1。用PEAA-BSA免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA法检测抗体效价,采用竞争ELISA法检测IC50值,获得了效价4.1×105以上、IC50值为0.2μg/L的多抗血清,证明合成了具有免疫原性的人工免疫原。     

氯霉素人工抗原的合成及其抗体的制备

为了合成氯霉素(CAP)人工抗原并制备抗体,试验建立CAP残留的酶联免疫吸附试验(ELISA)法,采用重氮化法将半抗原CAP与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联,制得免疫抗原,然后与卵清白蛋白(OVA)进行偶联,制得包被抗原,通过紫外光谱扫描鉴定是否偶联成功;用免疫抗原免疫KM小鼠,制备CAP多克隆抗体,并通过间接ELISA法测定抗体效价。结果表明:通过紫外光谱扫描,CAP-BSA在275 nm处为最大吸收峰,CAP-OVA在276 nm处为最大吸收峰;并且免疫KM小鼠得到的抗体效价高达1∶128 000。说明试验成功制备了CAP人工抗原,并且获得了高效价的多克隆抗体,也进一步证明了药物偶联成功。     

盐酸克伦特罗人工抗原及抗体的制备

为了制备盐酸克伦特罗(CL)人工抗原及抗体,试验采用重氮化法将盐酸克伦特罗与经过活化的牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别偶联,合成免疫抗原(CL-BSA)和检测抗原(CLOVA),经紫外光谱扫描对偶联物进行鉴定;用免疫抗原免疫BALB/c小鼠制备盐酸克伦特罗多克隆抗体,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定抗体效价。结果表明:盐酸克伦特罗人工抗原合成成功,制备的鼠源多克隆抗体效价达1∶64 000,该抗体可用于下一步试验。     

用于检测孔雀石绿的全抗原的合成与鉴定

采用重氮化法,将半抗原副品红(Pararosaniline,PA)分别与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,反应得到免疫抗原和包被抗原,其偶联最佳结合比分别为8.8∶1,12.7∶1,6.9∶1,经紫外扫描光谱和蛋白电泳鉴定得到全抗原。用制备的抗原乳化后免疫小鼠获得了效价较高的多克隆抗体。为进一步制备抗孔雀石绿单克隆抗体打下基础。     

盐酸四环素人工抗原的合成及鉴定

本试验旨在合成盐酸四环素人工抗原,为其单克隆抗体的制备奠定试验基础。将盐酸四环素(TCH)发生霍夫曼降解和重氮化反应生成重氮盐,再与蛋白质载体(BSA,OVA)偶联生成免疫原和包被原,对偶联产物采用三氯化铁及紫外扫描法鉴定偶联成功,且免疫原和包被原的摩尔结合比分别约为3.4∶1和4.2∶1。用免疫原免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA检测抗体效价,采用竞争ELISA法测IC50,获得了效价为1∶51200I、C50为16.91 ng/mL的多克隆抗体,最终证明人工抗原制备成功。     

达氟沙星单克隆抗体的制备与鉴定

采用碳二亚胺法将达氟沙星与BSA和OVA偶联制成免疫抗原DFLX-BSA、检测抗原DFLX-OVA。采用FeCl3显色反应、紫外扫描分析法对合成的抗原进行了鉴定。用免疫抗原DFLX-BSA腹腔免疫BALB/c小鼠,有限稀释法筛选获得分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株1株4F9,单抗亚型鉴定为IgG1,并将此细胞株注射小鼠腹腔获得腹水,用辛酸-硫酸铵法对腹水进行了纯化。纯化后的抗体效价为2.48×10-6,紫外分析方法计算蛋白含量为1.348 mg/mL。     

重金属Pb~(2+)的抗原合成与鉴定

本研究旨在为重金属铅的ELISA检测方法建立提供一种免疫抗原并对其进行初步评估。试验采用络合剂CHX-A-DTPA双功能基团分别特异性结合重金属元素Pb2+和蛋白载体KLH,合成出复合络合物KLH-CHX-A-DTPA-Pb2+作免疫抗原,最佳合成条件pH值、反应时间、温度分别为9.0、(22±3)h和25℃;用BCA试剂盒、紫外扫描、三硝基苯磺酸法和原子吸收法对合成抗原做了初步评估,免疫抗原蛋白含量为2.66g/L,络合剂与Pb2+的偶联度为77.84%,结构与设计相似;5次免疫BALB/c小鼠后,抗血清可达128 000以上。结果提示,重金属Pb2+的抗原合成成功,免疫小鼠后特异性好,可用于重金属铅的ELISA检测方法研究。     

氯霉素人工抗原的合成及其结合比的测定

以牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)为载体，采用重氮化法，合成氯霉素(CAP)的2种免疫偶合物：免疫原CAP-BSA和包被抗原CAP-HSA；通过紫外光谱定性证明偶合物偶联成功与否。结果表明，此方法不仅简便快捷，灵敏度高；还简化了合成的过程，得到了结合比较好的人工抗原。     

西马特罗单克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定

为建立检测西马特罗(CIM)的免疫学方法,本试验采用重氮化法成功合成了人工免疫抗原CIM-BSA,并用人工合成的抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备抗CIM的单克隆抗体(CIM m Ab),并对其效价、敏感性、特异性和亲和性等免疫学特性进行了鉴定。结果表明,免疫的5只小鼠血清效价均达到1∶1×105,IC50均在10ng/m L以下,其中4号、5号小鼠的效价达2×105,IC50小于1ng/m L。融合后筛选出1C8、2G11、2D4共3株分泌抗CIM小分子的高特异、高灵敏的单克隆抗体的细胞株,细胞培养上清ELISA效价分别为1∶1.28×104、1∶6.4×103、1∶3.2×103,腹水效价分别为1∶4.1×105、1∶2.0×105、1∶2.0×105,3株细胞株分泌的抗CIM的单克隆抗体经亚型试剂盒测定均为Ig G1/λ链,亲和常数(Ka)经测定分别为5.5×108、2.4×108、1.0×108(L/mol),其中亲和力最高的细胞株1C8对CIM的IC50为0.288 ng/m L,与CL小分子的CR%为0.576%,与其他类似物的CR%均小于0.02%。本试验获得了灵敏度高、特异性好的CIM m Ab,为CIM残留检测的免疫学方法的建立奠定了基础。     

氟罗沙星单克隆抗体的制备及鉴定

采用碳二亚胺(EDC)法将氟罗沙星(FLE)与载体蛋白BSA、OVA分别偶联合成人工抗原BSA-FLE、OVA-FLE,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法和紫外分析法对合成的人工抗原进行了鉴定。BSA-FLE用作免疫抗原免疫Balb/C小鼠,OVA-FLE用作检测抗原包被酶标板检测抗体效价。免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合获得了5株(4F11、2C3、8G2、3C1、2G8)稳定分泌抗FLE抗体的杂交瘤细胞株,抗体亚型鉴定均为IgG1。将3C1接种小鼠制备腹水,用辛酸-硫酸铵法对腹水进行纯化,纯化后腹水效价1∶1 024 000。抗体分子量160.766 KD,亲和常数为8.57×108M-1。     

磺胺二甲嘧啶免疫抗原的合成研究

试验旨在研究磺胺二甲嘧啶（SM2）免疫抗原的合成。用重氮化方法将SM2分别与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联,合成了免疫抗原SM2-BSA和包被抗原SM2-OVA。紫外扫描和聚丙烯胺凝胶电泳结果表明, SM2-BSA的紫外吸收光谱与BSA、SM2相比均发生了改变,证明偶联成功,并测得SM2-BSA的结合比为13∶1;用SM2-BSA免疫BALB/c小鼠,获得了高效价和特异的多克隆抗体。结果表明,半抗原SM2和载体蛋白偶联成功,并可获得高价、敏感的多克隆抗体。     

呕吐毒素单克隆抗体制备及鉴定

为制备一种呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)单克隆抗体(McAb),对DON进行改造,合成了半抗原,然后与载体蛋白BSA、OVA分别偶联合成偶联抗原DON-BSA、DON-OVA,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法和紫外分析法对合成的偶联抗原进行鉴定。然后用DON-BSA作为免疫抗原,DON-OVA作为检测抗原免疫小鼠制备抗DON的单克隆抗体。结果所得单克隆抗体为IgG1亚型,分子质量为158ku,抗体标准曲线IC50值为1.7μg/L,与T2毒素、黄曲霉毒素B1几乎没有交叉反应,筛选到的单克隆抗体可用于研制DON酶联免疫检测产品。     

多西环素人工抗原的合成与鉴定

建立多西环素人工抗原(Doxycycline,DOX)的合成及鉴定方法。采用戊二醛偶联法将DOX分别与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原(DOX-BSA)和包被抗原(DOX-OVA)。经SDS-PAGE电泳法、紫外可见吸收光谱鉴定,证实人工抗原成功合成,偶联比分别为8.6∶1和3.8∶1。结果表明建立了一种新的DOX抗原合成方法,为进一步制备特异性DOX抗体和建立检测食品中DOX的酶联免疫方法奠定了基础。     

磺胺甲恶唑人工抗原的合成与鉴定

为检测磺胺甲恶唑(SMZ)的残留,用重氮化方法将SMZ偶联于载体蛋白BSA和OVA上,合成了免疫抗原BSA-SMZ和包被抗原OVA-SMZ。经紫外扫描、SDS-PAGE电泳鉴定后,免疫BALB/c小鼠,制备多抗血清;利用间接ELISA法测定多抗血清效价,竞争ELISA测定多抗血清的敏感性和特异性。结果表明,所合成的免疫抗原效果较好,6只免疫小鼠多抗血清的效价均大于1∶1.28×104,5号小鼠的多抗血清敏感性最高,半数抑制浓度为47.1ng/mL,与其他磺胺类药物无交叉反应,具备良好的特异性。试验成功合成了SMZ人工抗原,并制得了敏感性高、特异性好的鼠源多抗血清,为SMZ单克隆抗体制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。     

不同方法构建磺胺二甲氧嘧啶免疫抗原的比较研究

为探讨合成磺胺二甲氧嘧啶(SDM)免疫抗原的有效途径,采用重氮偶合法和戊二醛法分别合成SDM免疫抗原,并对其结构特征、光谱特征和SDM结合比进行比较.结果表明,在合成SDM-BSA中采用重氮偶合法比戊二醛法好.     

磺胺喹噁啉偶联物的合成与鉴定

磺胺喹噁啉(sulfaquinoxaline,SQ)经重氮化后,与牛血清白蛋白在碱性条件下发生重氮化偶联反应生成偶联物。偶联物经红外光谱、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定,确定偶联成功。对上述几种人工抗原鉴定方法进行了简单比较,认为MALDI-TOF-MS是鉴定偶联物的最佳方法,并且为磺胺喹噁啉的酶联免疫分析奠定了基础。     

马波沙星人工抗原的合成及其免疫原性的鉴定

合成、鉴定了马波沙星(MBF)人工抗原,为马波沙星单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立奠定基础。以牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵清蛋白(OVA)为载体蛋白,采用碳二亚胺法分别合成马波沙星免疫抗原(MBF-BSA)和包被抗原(MBF-OVA),并使用紫外分光光度法、SDS-PAGE、ELISA方法鉴定人工抗原合成效果。初步鉴定结果显示,MBF-BSA与MBF-OVA均偶联成功;用免疫抗原MBF-BSA免疫小鼠,经ELISA方法检测,五免后血清中抗体效价可达1∶5.12×105,半数抑制率为90.20 ng/m L。研究表明,马波沙星人工抗原合成成功,其免疫抗原具有良好的免疫原性,免疫小鼠可获得高效价、高特异性多克隆抗体。     

河豚毒素免疫抗原的制备及其表征体系的建立

为制备最适偶联率的河豚毒素(TTX)免疫抗原,并建立其表征体系,本研究采用非变性SDS-PAGE及紫外分光光度分析方法,探索TTX-甲醛-牛血清白蛋白(TTX-HCHO-BSA)免疫抗原合成体系中的偶联时间、偶联剂添加量及TTX与BSA质量比等反应条件对TTX免疫抗原偶联率的影响,并筛选出最佳的反应条件,即反应时间为72h、偶联剂添加量为12%、TTX与BSA质量比为1:5时TTX免疫抗原偶联率较大。同时,应用QuantityOne凝胶分析软件建立了BSA-TTX免疫抗原的偶联率计算方法,并探讨该免疫抗原的表征体系。     

抗呋喃唑酮代谢物单克隆抗体的制备

硝基呋喃类药物具有广谱抗菌作用,广泛应用于家禽细菌性传染病的防治,但其在动物体内残留的代谢产物,对人体具有致癌、致突变的特性。研究将硝基呋喃类药物呋喃唑酮上的硝基还原为氨基,再将还原产物与载体蛋白用重氮化法进行偶联,从而获得呋喃唑酮代谢物(AOZ)的免疫抗原和检测抗原。用免疫抗原免疫BALB/c小鼠,经过细胞融合、克隆筛选、扩大培养、动物体内诱生腹水等过程,获得了抗AOZ的单克隆抗体,并通过建立间接ELISA方法对获得的单克隆抗体进行鉴定。研究结果为开发AOZ的ELISA检测试剂盒奠定了基础。     

苊人工抗原制备及两种间隔臂长对抗原免疫效果的影响

多环芳烃是一类含有两个以上苯环的碳氢化合物,广泛存在于大气、水体、土壤、食品中,苊是多环芳烃的一种。为了制备免疫效果好的完全抗原从而为免疫学检测方法建立基础,分别以3-苊丁酸和5-苊甲酸与牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)进行偶联,采用活泼酯法成功制备了3-苊丁酸-BSA、5-苊甲酸-BSA两种间隔臂长的免疫用人工抗原及3-苊丁酸-OVA检测用人工抗原,并通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和紫外扫描法对人工抗原进行了鉴定。分别用两种免疫抗原足垫免疫Balb/c小鼠,通过测定免疫小鼠血清抗体的效价和特异性,分析不同间隔臂长免疫抗原的免疫效果。结果表明:4碳臂(3-苊丁酸-BSA)较1碳臂(5-苊甲酸-BSA)产生了更高苊的特异性抗体。