PCR技术在鼠金黄色葡萄球菌检测中的初步研究

根据已公布的金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因的序列 ,设计并合成一对特异性的引物 ,利用PCR技术扩增nuc基因片段。对金黄色葡萄球菌和其他非金黄色葡萄球菌菌株抽提的DNA进行扩增。结果金黄色葡萄球菌PCR产物出现 6 6 8bp的特异性DNA扩增片段 ,而其他非金黄色葡萄球菌未出现扩增片段 ,证实了合成的引物对金黄色葡萄球菌具有特异性。将抽提的金黄色葡萄球菌DNA进行系列稀释 ,测定此PCR体系的敏感性。结果显示 ,该PCR体系能检出 3pg金黄色葡萄球菌DNA ,且从抽提DNA到PCR扩增及电泳结束仅需 4h。因此 ,研究所建立的扩增耐热核酸酶nuc基因检测鼠金黄色葡萄球菌的PCR方法 ,具有快速、可靠、敏感和特异的特点 ,可用于临床样品和金黄色葡萄球菌感染时的检测 ,适合应用于实验大小鼠的监测     

食品中金黄色葡萄球菌PCR检测方法的建立

采用PCR技术特异性扩增金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶编码基因(nuc基因),检测模拟样品中金黄色葡萄球菌。结果表明所建立的模拟食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测方法,特异性良好,敏感性可达61.76pg/μl。     

金黄色葡萄球菌重组酶聚合酶扩增方法的建立

为建立基于重组酶聚合酶等温扩增(RPA)技术的金黄色葡萄球菌快速检测方法,本研究根据该菌耐热核酸酶nuc基因的保守序列,设计特异性RPA扩增引物,并经反应条件的优化、特异性及灵敏度检测。结果显示:建立的金黄色葡萄球菌快速检测方法可在37℃孵育35 min特异性检测金黄色葡萄球菌,而对其它病原的检测结果为阴性,特异性较强;对该菌的纯培养物和人工污染该菌的牛奶样品中的最低检出限均为10 cfu,敏感性高。利用该方法和国标培养法同时检测市场购买的牛奶样品和猪肉样品,结果显示二者检测结果一致。本研究建立的RPA方法操作简单、反应快速、特异性强、灵敏度高且不依赖于昂贵的仪器设备,适用于基层实验室检测。     

西宁市食品中金黄色葡萄球菌污染状况及其肠毒素基因型分布研究

为了掌握金黄色葡萄球菌在西宁地区食品中的分布规律,了解不同来源、不同种类食品中金黄色葡萄球菌的污染状况及其5种肠毒素基因型(A、B、C、D、E)的分布状况。在西宁市地区采集108份食品样品,按食品微生物学(GB 4789.10-2010)金黄色葡萄球菌检验方法结合Baird-Parker氏鉴别培养基筛选金黄色葡萄球菌,通过对金黄色葡萄球菌耐热核酸酶(nuc)基因的PCR扩增以及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(Matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对疑似菌落进行鉴定;同时利用PCR技术对金黄色葡萄球菌的5种肠毒素基因型进行分型检测。经分离及生化鉴定,从108份样品中得到60株疑似金黄色葡萄球菌、PCR方法及MALDI-TOF MS结果,确认为金黄色葡萄球菌,检出率为55. 56%;同时60株金黄色葡萄球菌分别检出A型6株、B型34株和D型2株,共检测到42株,检出率为70%,C型和E型未被检测到。表明西宁市食品中金黄色葡萄球菌的污染处于一个相对较高水平,因食品来源与种类不同,金黄色葡萄球菌的污染情况和毒素基因的分布情况也各不相同,对西宁市食品质量安全控制具有参考意义。     

显色培养基在金黄色葡萄球菌检测中的应用研究

探讨葡萄球菌显色培养基在饲料微生物检测中的应用。利用Baird-Parker琼脂培养基和显色培养基对120份饲料样品进行金黄色葡萄球菌检测,疑似阳性的菌落进行unc基因的PCR扩增与测序验证。结果表明,显色培养基检出假阳性率(58.82%)低于普通培养基(73.91%)。显色培养基用于饲料中金黄色葡萄球菌的检测,能够有效抑制其它杂菌的生长,降低普通培养基检测的假阳性率。     

PCR扩增Nuc基因检测奶牛乳腺炎致病性金黄色葡萄球菌

为建立奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌致病菌株的检测方法,依据金黄色葡萄球菌耐热核酸酶Nuc基因序列,设计合成特异性引物,通过聚合酶链式反应扩增Nuc基因,并将扩增基因克隆入T载体,进行序列测定,对所分离的奶牛乳腺炎病原菌进行鉴定。结果显示:金黄色葡萄球菌扩增出特异性条带,大小为694bp;其他菌株未出现条带。敏感性检测的最低浓度为1.25×103cfu/mL。本试验所建立的方法具有特异性强、敏感度高的特点。     

生鲜牛奶中不同类型金黄色葡萄球菌污染差异性分析

[目的]了解我国部分地区生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素的污染状况,分析产不同类型肠毒素的金黄色葡萄球菌在不同地区的流行状况。[方法]采集三个省共6个奶牛场及挤奶站的新鲜牛奶进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定,并对分离菌肠毒素分型。[结果]从360份生鲜牛奶中共分离到102株金黄色葡萄球菌,分离率为28.33%?;92.3%的菌株产SEA—SEJ;不同地区产各种类型肠毒素的菌株存在明显差异,湖南和内蒙分离到的产各型肠毒素菌株占比例较高。     

乌鲁木齐生牛乳中金黄色葡萄球菌的肠毒素检测及分离株同源性分析

探究乌鲁木齐生牛乳中金黄色葡萄球菌经典肠毒素携带情况及分离株同源性差异，为金黄色葡萄球菌的防控提供参考。对乌鲁木齐地区采集的131份生牛乳样品采用特异性选择培养基结合PCR方法分离鉴定金黄色葡萄球菌，并通过PCR方法检测金黄色葡萄球菌5种经典肠毒素(sea、seb、sec、sed、see)携带情况和根据测序结果对分离株进行同源性分析。结果显示，共分离鉴定到金黄色葡萄球菌13株，总分离率为9.92%(13/131);13株金黄色葡萄球菌经典肠毒素阳性菌株5株，阳性率为38.46%;13株金黄色葡萄球菌的同源性在93.7%～99.7%之间，遗传差异在0.3～6.6之间。研究表明，该地区生牛乳中存在一定金黄色葡萄球菌的污染，经典肠毒素阳性率较高，不同来源的分离株同源性高、差异性小。     

核酸探针技术在鼠金黄色葡萄球菌流行病学调查中的应用

用金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因特异性核酸探针 ,对江苏和上海 5个实验动物中心送检的 4 2 1份SPF鼠样品进行了检测。有 11份样品为阳性反应结果 ,阳性率 2 6 % ( 11/4 2 1)。结果表明 ,在我国一些实验动物中心SPF鼠群中还存在着金黄色葡萄球菌感染     

PCR扩增Nuc基因检测奶牛乳腺炎致病性金黄色葡萄球菌

为建立奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌致病菌株的检测方法,依据金黄色葡萄球菌耐热核酸酶Nuc基因序列,设计合成特异性引物,通过聚合酶链式反应扩增Nuc基因,并将扩增基因克隆入T载体,进行序列测定,对所分离的奶牛乳腺炎病原菌进行鉴定.结果显示:金黄色葡萄球菌扩增出特异性条带,大小为694bp;其他菌株未出现条带.敏感性检测的最低浓度为1.25×103 cfu/mL.本试验所建立的方法具有特异性强、敏感度高的特点.