皇竹草对草鱼脂肪蓄积及肠道菌群组成的影响

为探讨皇竹草(Pennisetum sinese Roxb)对草鱼(Ctenopharyngodon idella)脂肪蓄积和肠道菌群组成的影响,配制3组分别含0(对照组)、10%和20%皇竹草粉的等氮等能纯化饲料(蛋白质水平33%,脂肪水平8%),饲喂草鱼稚鱼[(28.51±0.04)g] 8周,每组饲料饲喂3个重复。结果显示,饲料中添加10%和20%皇竹草粉能显著降低腹腔脂肪指数。相比对照组,皇竹草粉组的草鱼肝脏脂滴数量均明显减少,脂肪细胞大小明显变小。血清中的甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和游离脂肪酸(NEFA)的含量随着皇竹草粉水平的升高呈下降趋势,其中20%添加水平相比对照组草鱼显著降低。皇竹草粉组肝脏中的TG、TC和NEFA的含量均显著下降。肝脏和腹腔脂肪组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(pparγ)等脂肪生成相关5个基因在摄食皇竹草粉后显著下调,pparα等4个脂肪分解相关基因在摄食皇竹草粉后显著上调,肝脏组织中法尼酯X受体(fxr)基因在摄食皇竹草粉后显著上调。微生物宏基因组学结果显示,10%和20%皇竹草粉组草鱼肠道内容物中肠道微生物的Ace、chao1、Sha...     

草鱼肠道正常菌群与肠炎病原菌关系的初步研究

本文运用微生态学原理和方法,对二龄健康草鱼和肠炎草鱼肠道中的大肠杆菌、肠球菌、乳酸杆菌、双歧杆菌四种优势常居菌及草鱼肠炎病原菌——点状产气单胞菌进行了定量检测。同时,对草鱼肠道中厌氧菌和需氧菌比值也进行了测算。通过对试验数据的统计学处理分析,阐明了点状产气单胞菌与肠道正常菌群的量变关系,提出了两个回归计算式。另外,还从微生态学角度,对草鱼肠炎的发病机理和生物防治进行了讨论。     

群体感应淬灭酶YtnP对草鱼肠道菌群结构的影响

[目的]揭示群体感应淬灭作用与宿主肠道菌群结构间的作用关系,为具有群体感应淬灭作用益生菌及其淬灭酶在水产养殖上的推广应用提供理论依据.[方法]选取30尾规格为25±1 g/尾的草鱼随机分为对照组和试验组,试验组每尾草鱼腹腔注射100μL溶解稀释后的YtnP(25μg/mL),对照组每尾草鱼腹腔注射等量的300 mmol/L分子筛缓冲液,分别在注射后24和48 h采集草鱼前肠、中肠和后肠的肠道组织及内容物,提取各肠段总DNA及PCR扩增16S rRNA序列V3~V4可变区,然后基于Illumina MiSeq高通量测序技术分析外源添加YtnP对草鱼肠道菌群多样性与丰度的影响.[结果]12份草鱼肠道样品测序共获得原始序列(Raw reads)660205条,有效序列(Valid reads)416614条;对照组和试验组样品的OTU数目分别为142±102和143±67个.在门分类水平上,对照组和试验组草鱼肠道优势菌群均为放线菌门(Actinobacteria)、梭杆菌门(Fusobacteria)、变形菌门(Proteobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes);相对于对照组,试验组草鱼肠道中浮霉菌门(Planctomycetes)相对丰度显著增加(P<0.05,下同),放线菌门、梭杆菌门和变形菌门的相对丰度也呈升高趋势,但差异不显著(P>0.05,下同),厚壁菌门、TM7和拟杆菌门(Bacteroidetes)的相对丰度则呈下降趋势.在属分类水平上,对照组和试验组草鱼肠道均以鲸杆菌属(Cetobacterium)和诺卡氏菌属(Nocardia)为优势菌群;相对于对照组,试验组草鱼肠道中鲸杆菌属相对丰度呈升高趋势、诺卡氏菌属相对丰度呈下降趋势,但变化差异均不显著,未特指微杆菌属(Unspecified_Microbacteriaceae)相对丰度则显著增加.草鱼肠道菌群结构Alpha多样性分析发现,试验组样品的Chao1和ACE指数低于对照组样品,Shannon和Simpson指数略高于对照组样品,但差异均不显著;Beta多样性分析结果显示,对照组与试验组间的菌群特点存在差异,且组间区分效果明显.[结论]外源添加YtnP不会导致草鱼肠道优势菌群种类发生明显变化,但能在一定程度影响肠道菌群的相对丰度.     

饲料中添加枯草芽孢杆菌对草鱼消化酶活性和肠道菌群的影响

研究了饲料中添加枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis对草鱼Ctenopharyngodon idellus消化道酶活性和肠道菌群数量的影响。选用体质量为（51．37±0．58）g的健康无病草鱼300尾,随机分为对照组和处理组两组,每组设3个重复,每个重复放50尾鱼,对照组饲喂基础日粮,处理组饲喂含枯草芽孢杆菌（10^8CFU／kg饲料）的基础日粮,日投喂量为鱼体质量的3％,饲养时间为45d。结果表明：处理组肠道内容物中胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性分别比对照组显著提高14．75％（P〈O．01）、13．03％（P〈O．01）和78．95％（P〈0．01）;肝胰脏中脂肪酶和胰蛋白酶活性分别比对照组显著提高17．72％（P〈0．01）和13．81％（P〈0．01）。肠道菌群数量分析显示,与对照组相比,处理组肠道芽孢杆菌和假单胞菌数量极显著提高（P〈0．01）,而致病性弧菌和大肠杆菌数量却极显著降低（P〈0．01）。研究表明,饲料中添加枯草芽孢杆菌能够改善草鱼肠道菌群组成,并提高消化道特定消化酶活性。     

饲料中添加枯草芽孢杆菌对草鱼消化酶活性和肠道菌群的影响

研究了饲料中添加枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis对草鱼Ctenopharyngodon idellus消化道酶活性和肠道菌群数量的影响。选用体质量为(51.37±0.58)g的健康无病草鱼300尾,随机分为对照组和处理组两组,每组设3个重复,每个重复放50尾鱼,对照组饲喂基础日粮,处理组饲喂含枯草芽孢杆菌(108CFU/kg饲料)的基础日粮,日投喂量为鱼体质量的3%,饲养时间为45 d。结果表明:处理组肠道内容物中胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性分别比对照组显著提高14.75%(P<0.01)、13.03%(P<0.01)和78.95%(P<0.01);肝胰脏中脂肪酶和胰蛋白酶活性分别比对照组显著提高17.72%(P<0.01)和13.81%(P<0.01)。肠道菌群数量分析显示,与对照组相比,处理组肠道芽孢杆菌和假单胞菌数量极显著提高(P<0.01),而致病性弧菌和大肠杆菌数量却极显著降低(P<0.01)。研究表明,饲料中添加枯草芽孢杆菌能够改善草鱼肠道菌群组成,并提高消化道特定消化酶活性。     

不同益生元对肠道菌群的影响

研究了不同益生元对肠道菌群生长的影响。结果表明,水苏糖、低聚麦芽糖和低聚半乳糖均能显著的促进双歧杆菌和乳酸菌的生长,说明这3种糖都可以被有益菌分解利用,均可作为有益菌的生长促进剂,且低聚半乳糖对病原菌有显著的抑制作用。     

肠道菌群与草鱼个体大小相关性研究

[目的]探讨草鱼肠道菌群与草鱼个体大小之间的相关性。[方法]采用DGGE方法对同一批孵化并在同一池塘中养殖的个体大小显著差异的草鱼肠道样品进行分析。[结果]无论大个体草鱼还是小个体草鱼,其肠道优势菌群均为厚壁菌门和变形菌门,但2组草鱼在其肠道菌群的结构和多样性等方面存在差异。大个体草鱼肠道中存在着更多比例的厚壁菌门以及具有纤维素降解能力的细菌,而小个体草鱼肠道中存在较多的潜在致病菌。[结论]草鱼肠道微生物可以作为内在因素影响草鱼的生长性能,这一结果也为进一步开发可促进草鱼生长性能的益生菌奠定了研究基础。     

草鱼肠道微生物谱及其发育性变化

为了研究草鱼不同肠段微生物结构以及草鱼不同发育阶段肠道菌群的分布和变化。试验分2个部分进行,第一部分：试验选取24月龄生理状况良好的草鱼8尾,用MS-222对其深度麻醉,收集草鱼前肠、中肠、后肠段内容物进行DNA提取和16S rRNA基因测序;第二部分：从浙江省衢州市开化县一典型的开化清水鱼养殖基地购买不同月龄(1、7、15、24月龄)的健康草鱼各25尾,为了保证足够的样本量和最大限度降低个体差异,每5尾鱼的后肠段内容物混合为一个样本。用16S rRNA基因高通量测序方法,分析不同月龄草鱼肠道菌群的分布和变化。结果显示：1)Alpha多样性表明,草鱼的后肠段微生物群落多样性和丰富度显著高于前肠和中肠段(P<0.05);Beta多样性表明,后肠段的微生物群落与前肠段和中肠段存在显著差异(P<0.05)。2)热图(Heatmap)显示,罗斯氏菌属(Ralstonia)是前肠段的主要优势菌属;砷氧化菌(Aliihoeflea)是中肠段的主要优势菌属;纤发鞘丝蓝细菌属(Leptolyngbya)和鲸杆菌属(Cetobacterium)是后肠段的主要优势菌属。3)从1到24月龄,草鱼...     

摄食不同水平饲料蛋白质对珍珠龙胆石斑鱼幼鱼肠道组织形态和菌群组成的影响

为研究饲料蛋白质水平对石斑鱼肠道微生态群落的影响,以红鱼粉和酪蛋白为蛋白源,鱼油和豆油为脂肪源,高筋面粉和玉米淀粉为碳水化合物源,配制6组不同蛋白质水平(35%、40%、45%、50%、55%和60%的等脂等能饲料,分别记为P35、P40、P45、P50、P55、P60组),投喂初始质量为(6.50±0.00)g的珍珠龙胆石斑鱼Epinephelus lanceolatu♂×Epinephelus fuscoguttatus♀幼鱼8周,试验结束时取其肠道组织观察肠道组织形态,并分析肠道菌群组成。结果表明:P50组前肠和后肠皱襞高度显著高于P40、P45和P60组(P<0.05),而皱襞宽度则显著低于P35和P40组(P<0.05);P50组中肠和后肠隐窝深度均取到最小值,P50组各肠段肌层厚度均取到最大值;Illumina MiSeq测序显示,多样性指数(Shannon、Simpson、Coverage指数)和Ace指数均无显著性差异(P>0.05),P55和P60组的Chao指数显著高于P40、P45和P50组(P<0.05);从门水平上看,各组优势菌落为变形菌门Proteobacteria、放线菌门Actinobacteria、厚壁菌门Firmicutes和拟杆菌门Bacteroidetes,P50组变形菌门含量最低且厚壁菌门含量最高;从属水平上看,红球菌属Rhodococcus、罗尔斯通氏菌属Ralstonia和不动杆菌属Acinetobacter为各组优势菌落,P50组乳酸杆菌属Lactobacillus含量最高,不动杆菌属、假单胞菌属Pseudomonas和互营杆菌属Syntrophobacter含量均有所下降。研究表明,摄食不同蛋白质水平的饲料对珍珠龙胆石斑鱼肠道菌群多样性无显著性影响,但显著影响肠道菌群丰富度和肠道组织形态,饲料蛋白质水平为50%时不仅能有效改善肠道组织形态,优化肠道升级,还有助于乳酸菌等有益菌属定植并减少致病菌含量。     

草鱼母源免疫的初步研究

用酚灭活的柱状嗜纤维菌对草鱼雌亲鱼每月注射１次，连续注射７次。通过检测草鱼雌亲鱼血液中吞噬细胞的吞噬活性、血清中凝集抗体效价、受精卵和鱼苗中凝集抗体效价，首先证明了草鱼雌亲鱼对免疫原能产生较强的免疫应答，其凝集抗体可以通过受精卵而传递给仔代，而且这种凝集抗体能在孵化后的鱼苗体内持续存在２７ｄ以上。然而，用活菌对１７４日龄的鱼种攻毒的试验结果表明，免疫组与对照不存在显著差异。     

灭虫精对草鱼种血液胆碱酯酶活性的影响

试验表明,草鱼种在灭虫精处理后,血液胆碱酯酶（ＣｈＥ）活力降低,并随其浓度的升高而其峰值出现时间相应提前。在０．１￣０．８ｍｇ／Ｌ,血清ＣｈＥ活力出现了较快的恢复,在１．０ｍｇ／Ｌ以上时,血液ＣｈＥ活力恢复很缓慢,从试验结果可知血液ＣｈＥ活力变化是环境毒理研究中的一个较为理想的监测指标 。     

浸泡免疫预防草鱼细菌性烂鳃病效果的研究

用酚灭活的柱状嗜纤维菌和从该菌体提取的菌体脂多糖浸泡接种２０～２５ｇ的草鱼鱼种，共浸泡２次间隔一周。通过检测受免鱼体血清、肠和体表粘液中凝集抗体效价、血液中吞噬细胞的吞噬活性和采用活菌攻毒的方法，探讨了浸泡免疫接种疫苗对预防草鱼细菌性烂鳃病的效果。结果表明，受免鱼体与对照鱼相比，血清、肠和体表粘液中凝集抗体效价和血液中吞噬细胞的吞噬活性都有明显上升。经活菌攻毒后，酚灭活柱状嗜纤维菌疫苗免疫组免疫保护率达３０％，而脂多糖疫苗免疫组免疫保护率为５５％。     

穿心莲对草鱼血液吞噬细胞吞噬活性的影响

利用体外试管法测定摄食穿心莲药饵的草鱼在不同时刻血液吞噬细胞的正常吞噬活性。结果表明,穿心莲水煎剂对草鱼血液吞噬细胞的吞噬活性没有显著性影响(P>0.05)。     

溴氰菊酯对草鱼鱼种脑AchE及ATP酶活性的影响

本试验研究了溴氰菊酯对草鱼鱼种的急性效应以及溴氰菊酯对草鱼鱼种脑ＡｃｈＥ及ＡＴＰ酶活性的影响。结果表明,溴氰菊酯对规格Ⅰ（平均体重８．２１ｇ）、规格Ⅱ（平均 重６６．６ｇ）草鱼鱼种９６ｈ半数致死浓度（９６ｈＬＣ５０）分别为２．１６μｇ／Ｌ、４．２６μｇ／Ｌ,９５％置信区间分别为１．９３￣２．４２μｇ／Ｌ、３．８２￣４．７５μｇ／Ｌ,离体条件下对草鱼种脑Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活性抑制显著,呈一定的浓度     

草鱼的生理能量收支

本课题研究体重为15～20g的草鱼在水温20℃、摄取配合饲料时的能量收支，收支式为100C＝32．26F＋1．04U＋51．54R＋15．16G。说明本试验饲料的营养物质配比较好，脂肪和糖有节约蛋白质的效果。并且还能进一步改进饲料的质量，提高鱼对饲料的消化吸收，这将是提高生长能比例的有效措施。     

一龄草鱼对锰的需要量

饲料中锰未添加组的草鱼生长和饲料效率降低，畸形率增加，随着饲料中锰含量的增加，椎骨中锰含量也逐渐增加。当饲料中锰添加量到15mg／kg饲料以上时，椎骨锰含量达到最大并趋于相对稳定。锰未添加组草鱼的比肝重，肝脂量明显高于锰添加组，锰未添加组血浆中破性磷酸酶活性比锰添加组高，而草鱼血浆中红细胞，血红蛋白；红细胞压积，红细胞体积，红细胞平均血红蛋白量，红细胞平均血红蛋白浓度，血浆总蛋白，血浆葡萄糖等，不受饲料中锰含量的影响。综合本试验结果，草鱼时饲料中锰的最适需要量为15mg／kg饲料为宜。     

健康兔与腹泻病兔不同肠段正常菌群研究

对１０只４０日龄的腹泻病兔和１０只同群的健康兔的空肠、直肠的兔双歧杆菌、乳杆菌等１０种细菌进行了研究测定，结果显示病兔肠道中的肠球菌、梭杆菌有明显的菌群失调现象，类杆菌、乳杆菌、兔双歧杆菌有显著减少（Ｐ＜０．０１），其它几种菌无明显变化。     

肉碱对草鱼代谢强度的影响

采用腹腔法注射肉碱,分别测定了D-型、L-型和DL-型3种构型的肉碱对草鱼鱼种耗氧率的影响,以探讨草鱼对3种构型的肉碱代谢强度的差异.试验结果表明(1)注射100×10-6D-型、100×10-6L-型和100×10-6,200×10-6DL-型3种构型的肉碱.注射后0.5h,草鱼耗氧率均达到最大,随着时间的延长耗氧率逐渐下降.D-型和L-型肉碱在注射后3h草鱼耗氧率恢复至正常水平,DL-型在5h后也恢复至正常水平.其作用效果为L-型>D-型>DL-型.(2)分别注射D-型、L-型和DL-型各4个剂量水平(50×10-6,100×10-6,150×10-6和200×10-6).注射后0.5h,D-型和L-型均在100×10-6剂量水平耗氧率达到最大,而DL-型在150×10-6达到最大值,表明肉碱对草鱼的有效剂量为100×10-6～150×10-6.上述结果表明3种构型的肉碱均对草鱼产生了生理作用,使草鱼的代谢强度--耗氧率增加,其增加的强度与肉碱的构型有关.     

对草鱼、鲢、鳙、团头鲂鱼种阶段的RNA／DNA的初步研究

本文对草鱼、鲢、鳙、团头鲂4种养殖鱼类在鱼苗期、1龄期、2龄期的RNA和DNA含量进行测定．结果指出RNA／DNA的变化规律与鱼类的生长情况一致，因此，RNA／DNA可以怍为评定这4种养殖鱼类在鱼种阶段生长的指标。