鸽新城疫病毒测定方法的比较研究

对ＰＢ９６０１毒株的第７代和第３６代的尿囊液采用了鸡胚半数致死量和细胞半数感染量两种方法进行对比试验，结果表明，细胞半数感染量测定法较为实用。     

不同基因型新城疫病毒对美国白羽王鸽的致病性研究

为比较鸽源Ⅵb亚型新城疫病毒(NDV)与其它不同基因型NDV对鸽的致病性差异,本研究选取JS-7-05-Ch(基因Ⅲ型)、WX-10-07-Pi(基因Ⅵb型)、JS-5-05-Go(基因Ⅶd型)和F48E8(基因Ⅸ型)4个病毒株,分别人工感染2月龄实验鸽。接种后,观察实验鸽临床症状、病理剖解变化、同时检测HI抗体水平变化、喉气管和泄殖腔排毒以及病毒在组织分布情况。4株NDV均能导致接种鸽的发病,但死亡率分别为0、0、100%、50%。WX-10-07-Pi接种组鸽泄殖腔排毒时间最长、而且病毒检出率比其它组高。另外,在接种组鸽的多种组织器官中均可检测出病毒。实验结果表明,不同基因型NDV对鸽均有致病性,但致病力强弱与NDV毒株特性有关;基因Ⅵb型NDV在鸽体内可长期的带毒与排毒,与其它基因型NDV相比更易在鸽群中传播。     

我国鸽新城疫病毒某些生物学特性研究

对我国分离的鸽新城疫坪山毒和川沙毒对鸡胚致死性、鸡胚传代毒的血凝价、对健康鸽致病性以及对鸡胚细胞感染性等一些生物学特性进行了研究和比较,结果表明:二毒株接种鸡胚都能使鸡胚致死,川沙毒致死鸡胚时间略早于坪山毒.二毒株都能在鸡胚传代,鸡胚毒血凝价平均值约2~■.毒株感染鸡胚细胞能规律性地对细胞引起病变作用.对健康鸽都具有致病性,川沙毒致病性指数高于坪山毒,并能引起四周龄肉鸡发病.     

新城疫单抗ELISA试剂盒检测鸽新城疫病毒

用新城疫（ND）单抗酶联免疫（ELISA）试剂盒检测23例疑似ND的鸽泄殖腔棉拭样品，7份阳性样品用SPF鸡胚均会离到病毒，该病毒凝集鸡红细胞，并就抗新城疫病毒（NDV）阳性血清所抑制，其中4株病毒的MDT在48－68.6h之间，ICPI为1.55-1.85。试验结果表明所分离的病毒为NDV，亦表明ND单抗ELISA试剂盒能够检出鸽NDV，并可作为鸽群中NDV流行病学调查的有效手段。     

鸽新城疫病毒中等毒力株感染的实验室诊断

将临床初诊为新城疫的送检病鸽组织匀浆 ,接种SPF鸡胚。用致死鸡胚的尿囊液做血液凝集试验 ,并用鸡新城疫阳性血清进行血凝抑制试验。结果含毒尿囊液的血凝反应可以被新城疫阳性血清抑制 ,鸡胚半数感染剂量 (EID50 )为 1 0 - 3/ 0 1mL ,鸡胚平均死亡时间 (MDT)为 72 8h ,证明所分离的病毒为具中等毒力的鸽新城疫病毒     

鸽新城疫病毒弱毒株的分离与鉴定

对某鸽场送检的6只通过病理剖检疑似新城疫(ND)的病鸽进行实验室诊断,包括细菌分离、新城疫病毒荧光RT-PCR检测、SPF鸡胚分离与鉴定,并测定其鸡胚分离物F3代EID50和ICPI.结果为内脏病料新城疫病毒荧光RT-PCR检测为阳性;SPF鸡胚分离到一株有血凝活性的病毒,经HA和HI鉴定为NDV,其F3代血凝价为1∶26,EID50为107.63,ICPI为1.19.根据病鸽的临床症状、鸡胚分离物EID50和IC-PI,确定该鸽新城疫病毒分离株为弱毒株.     

2021—2022年我国8株鸽新城疫病毒基因组特征

为了解我国最新流行的鸽新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）分子生物学特征,对2021—2022年国家新城疫参考实验室从不同地区鸽群中分离到的8株NDV代表株进行了全基因组测序和生物信息学分析。结果显示：8株鸽NDV基因组长度均为15 192 nt,基因排列方式为3’-NP-P-M-F-HN-L-5’,其F蛋白裂解位点氨基酸序列均为112RRQKR/F117,呈典型的NDV强毒分子特征;相较于参考序列,代表毒株F蛋白七肽重复区域、融合肽和跨膜区域,以及HN蛋白中和抗原表位、跨膜区域等功能区域均有多处氨基酸变异;代表毒株全基因组核苷酸同源性为91.9%～99.0%,均属于Class Ⅱ基因Ⅵ型病毒,但可分为2个小分支,其中4株属于基因Ⅵ.2.1.1.2.2亚型,另4株属于基因Ⅵ.2.1.1.2.1亚型。结果表明,我国近期流行的鸽NDV具有遗传多样性特征。本研究进一步掌握了我国鸽NDV的遗传进化特点,丰富了鸽新城疫的流行病学信息,为该病的科学防控提供了参考。     

鸭源新城疫病毒对鹅的致病性试验

鸭源新城疫病毒（NDV）SDFC株通过静脉注射、肌肉注射、点眼滴鼻3种途径人工感染15日龄健康雏鹅,观察试验鹅的发病情况及临床症状,于感染后不同时间剖杀,观察各组织器官的主要剖检变化,并进行病理组织学研究,同时对病毒在组织中的抗原分布进行检测。结果显示,试验鹅感染鸭源NDV后发病率达100%,静脉注射组死亡率为80%,肌肉注射组死亡率为40%,点眼滴鼻组死亡率为26.7%。病鹅表现下痢、流泪,部分出现瘫痪、扭头、角弓反张等神经症状;剖检变化表现为胰腺、脾脏有大小不等的白色坏死灶,胸腺、法氏囊萎缩,心包积液,肠道、肝脏、肺脏、肾脏出血;病理组织学变化表现为胸腺、脾脏、法氏囊等器官内淋巴细胞坏死、崩解,心脏、肺脏、肝脏、肾脏广泛性出血、变性;抗原分布检测结果显示,病毒在病鹅体内多个组织器官中分布。试验结果表明,鸭源NDV对鹅具有较强的致病性。     

Antigenetically Unusual Newcastle Disease Virus from Racing Pigeons in India

Newcastle disease virus isolated from an outbreak in racing pigeons in India was found to be velogenic, based on the mean time to death in 10-day-old embryonated hen's eggs, the intravenous pathogenicity index in 6-week-old chickens and the pathogenesis in chickens and pigeons. The virus induced disease in chickens without prior adaptation in chickens. The virus was antigenically unusual since it could not be grouped with the available panel of monoclonal antibodies at the World Reference Laboratory for Newcastle disease, UK. However, commercially available lentogenic and mesogenic vaccines provided 100% protection to chickens against this antigenically unusual NDV.     

不同基因型新城疫病毒强毒株对鸡的致病性

就不同基因型新城疫病毒强毒株对鸡的致病性进行了比较。用3种基因型（Ⅵg、Ⅶd亚型、Ⅸ型）新城疫病毒强毒株分别人工感染25日龄雏鸡，结果各株病毒接种鸡均100％发病、100％死亡，表现出嗜内脏型新城疫病毒感染引起的典型的新城疫症状和病理变化。免疫组化检测发现．攻毒鸡多种组织器官中能检测到病毒抗原，在能检测到病毒抗原的器官中，病毒抗原主要定位于淋巴细胞、网状细胞、巨噬细胞、肝细胞及各种上皮细胞的胞浆内；新城疫病毒对肠相关淋巴组织的亲嗜性优先于附近的上皮。本试验结果表明．基因Ⅵg、Ⅶd亚型、Ⅸ型新城疫病毒强毒株对鸡均具有高度致病性。     

不同基因型新城疫病毒株对鹅的致病性

用不同基因型(Ⅳ、Ⅵb、Ⅵg、Ⅶd(坞源)、Ⅶd(鹅源)、Ⅷ、Ⅸ)新城疫病毒(NDV)强毒株分别人工感染23日龄隆昌鹅，观察了其对鹅的致病性。结果：各株病毒均可使接种鹅感染、发病，发病串为10％～100％，死亡率分别为0％、20％、30％、70％、50％、40％、50％。接种Ⅵg、ⅦdI、Ⅶ和Ⅸ型NDV强毒株可使鹅严重发病、死亡，症状和病变都与Ⅶd亚型鹅源毒株感染鹅相似，接种Ⅳ型(Herts／33)及Ⅵb亚型(PB9601)毒株的鹅轻微发病。免疫组化检检测发现，攻毒鹅多种组织器官中都能检测到病毒抗原。在能检测到病毒抗原的器官中，病毒抗原主要定位于淋巴细胞、网状细胞、巨噬细胞、肝细胞及各种上皮细胞的胞浆内；与Ⅵg、ⅦCl、Ⅶ和Ⅸ型NDV感染鹅组织相比，Herts／33、PB9601感染鹅大部分组织内的阳性染色较弱。本试验结果表明，不同基因型NDV强毒株对鹅的致病性存在明显差异。     

一起鸽群新城疫强毒感染的诊断

为对发病鸽群进行诊断,采集发病鸽群血清,检测血清中新城疫抗体,同时提取病鸽脑组织总RNA样本通过RT—PCR进行新城疫病毒F基因检测,并从病鸽脑组织中分离鉴定新城疫病毒。结果表明,该发病鸽群为新城疫强毒感染。     

鸽新城疫病毒分离鉴定及动物感染试验

从发病商品肉鸽组织中分离到3株新城疫病毒,对其基因序列和感染力进行测定和分析。用RT-PCR对3株病毒F基因进行了扩增,测序,3株新城疫病毒的F基因同源性比较及进化分析结果表明,3株病毒均属于Ⅵb亚型,且与2011年比利时分离株亲缘关系较近,F蛋白裂解位点符合强毒特征;肉鸽攻毒试验进一步证实了3株新城疫病毒的高致病性,肉鸽感染新城疫病毒后通过呼吸道及消化道途径排毒,具有高度接触传染性。试验结果证明了鸽感染新城疫病毒后的排毒时间及方式,为鸽新城疫的及早发现与防控提供了依据。     

新城疫病毒GX-08流行株对鸡和鸭的致病性研究

选取新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)GX-08株对26日龄雏鸡和20日龄雏番鸭进行人工感染试验,对体外细胞培养物进行致病性试验,并进行病理组织学观察。结果表明,以10^5.5EID₅₀的攻毒剂量对26日龄雏鸡和20日龄雏番鸭通过肌注接种,雏鸡的发病率和死亡率分别为100%和100%,雏番鸭的发病率和死亡率分别为70%和70%;通过点眼、滴鼻及口服接种,雏鸡的发病率和死亡率分别为80%和30%,雏番鸭的发病率和死亡率分别为20%和20%。感染鸡消化器官和部分呼吸器官病变严重,表现出典型的嗜内脏型NDV感染的病理变化特点;感染鸭则肝脏、脾脏和胰腺等实质器官病变明显,消化器官和部分呼吸器官病变较轻微。以200 TCID₅₀的剂量对单层鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)接种,结果CEF和DEF均于24 h左右开始出现病变,并分别于96和84 h左右细胞单层完全被破坏。与CEF相比,DEF接种病毒后,细胞坏死、裂解过程迅速,合胞体形成现象显著,合胞体的数量及合胞体平均含有的胞核数较多,病毒接种后培养物上清的HA效价峰值也较高,表明GX-08株均可致CEF和DEF病变,且对DEF有更强的细胞融合能力。     

不同日龄鸡胚接种不同浓度病毒对鸽新城疫病毒PB9601株鸡胚适应毒产毒量比较

利用不同浓度的鸽新城疫病毒（NDV）PB9601株在不同日龄的鸡胚上繁殖，观察鸡胚的死亡时间、尿囊液的收获量，并分别测定尿囊液中HA滴度和ELD50值，比较结果表明，以1：500稀释液0．1ml接种9日龄SPF鸡胚或1：100稀释液0．1ml接种10日龄胚产毒量最高。     

2株鸽源新城疫病毒的毒力鉴定和基因型分析

2008年从临床鸽病例中分离到2株新城疫病毒毒株,经测定,鸡胚平均死亡时间(MDT)分别为48h和46h,8周龄SPF鸡静脉接种指数(IVPI)分别为2.88和2.91,一日龄雏鸡脑内接种指数(IPCI)分别为1.88和1.89,按照OIE推荐的标准均为强毒株。RT-PCR扩增出融合蛋白(F)基因片段,测序,推导的氨基酸序列中蛋白酶裂解位点附近的氨基酸序列均符合强毒特征序列。根据F蛋白的部分基因序列绘制的系统进化发生树和F基因片段中3种限制性内切酶(RE)位点分布判定这2个毒株均为基因Ⅶc型。     

鸭源新城疫病毒的生物学特性

用鸡胚尿囊腔传代法从23个鸭泄殖腔拭子中分离到1株病毒，经血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验鉴定为新城疫病毒。该毒株ELD50为5．85log10，鸡胚平均致死时间(MDT)为92．5h，1日龄鸡脑内致病指数(ICPI)为0．5，6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)为0．3，属于中等偏弱毒力的毒株。该毒株不引起6周龄雏鸡发病。结果表明家鸭也能感染NDV。     

河南省某蛋鸡场新城疫病毒ZK1/18毒株的分离鉴定

对河南省某蛋鸡场病死鸡中分离的一株鸡源新城疫病毒(NDV)进行血凝性、鸡胚平均致死时间(MDT)、F基因测序和遗传进化分析。结果显示,该分离株HA效价平均为1:128,HI效价为1:1024,MDT为55h。F基因测序表明:其编码区长度为1662bp,共编码553个氨基酸;F基因裂解位点氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117,具有典型的NDV强毒分子特征,表明该分离株为强毒株,将其命名为A/Chicken/China/zhoukou1/18(简称ZK1/18)。遗传进化分析表明,该分离株属于Ⅶ型,是引起河南省新城疫疫情的主导基因型。该疫情提示,属于基因II型的LaSota疫苗株不能完全抵御基因Ⅶ型野毒的侵袭,在鸡群抵抗力降低时,可造成鸡群感染发病,需要加强综合防控。