猪伪狂犬病不同佐剂灭活疫苗对兔免疫原性初探

采用分离鉴定的猪伪狂犬病毒（HB—J株）以4种佐剂研制成4批灭活疫苗,以研究其对兔的免疫原性。疫苗分别免疫PRV抗体阴性兔后,用乳胶凝集试验法（LAT）和中和试验法（SNT）对试验兔进行血清抗体检测;于免疫后21、28d对试验兔分别进行攻毒,观察兔保护情况。试验结果表明,兔对不同佐剂的猪伪狂犬病疫苗均产生良好的免疫应答反应,且当兔免疫后血清凝集价≥1：32或血清抗体中和指数≥1479或中和价≥1：16时,可以抵抗10LD50剂量强毒的攻击;当兔免疫后血清凝集价≥1：64或血清抗体中和指数≥2187或中和价≥1：32时,可以抵抗100LD50剂量强毒的攻击;4种佐剂灭活疫苗均具有良好的免疫效果。     

Dot-PAA-ELISA快速检测猪丹毒抗体方法的建立与应用

以猪丹毒CD3004(1a型)和C43-12(2型)菌株为抗原提取菌株,EDTA渗透法提取的抗原作为膜载抗原,建立了Dot-PAA-ELISA检测猪丹毒血清抗体方法,经研究确定了Dot-PAA-ELISA的最佳工作条件.试验制备的诊断膜片特异性强,不与猪瘟、猪伪狂犬病、猪肺疫、猪链球菌病、猪大肠杆菌病、仔猪副伤寒、猪布氏杆菌病、猪衣原体病的阳性血清发生交叉反应;灵敏度高,能够最低检出猪血清中含2.61 × 10-9g的猪IgG抗体;膜片保存期长,在室温可保存4个月,4℃可保存7个月其检测活性不变.用该方法检测了仔猪免疫后抗体变化,并通过猪丹毒三型混合强毒攻毒试验确定了猪能抗强毒攻击的抗体临界保护值为1:32.对336份血清进行猪丹毒抗体检测,阳性检出率为96.13%.试验结果表明,本试验方法操作简便、快速准确、结果可存档、重复性和稳定性好,所用试剂材料均可做到标准化,适合基层检疫单位和养猪企业用于猪群免疫监测和猪丹毒流行病学调查.     

生长凝集试验对猪丹毒的免疫监测

运用生长凝集试验测试了注射猪毒丹菌苗后14、23、42天及6个月以后猪血清的凝集度,并用猪丹毒强毒菌攻击,测定猪血清的凝集度与免疫力之间的关系。凝集度在“#”以上的猪,可抵抗强毒菌的攻击,在“#”以下者,不能抵抗强毒菌的攻击。根据这一结果测试了农村中注射菌苗的猪179头,在免疫接种后5个月内,有80％以上的猪血清凝集度在“#”以上,证明有免疫力;接种菌苗后6、7个月的猪。免疫力分别下降为67.07％与64.71％。本试验具有特异性,测定猪丹毒的凝集抗体是一种较简易的免疫监测方法。     

Dot-PPA-ELISA对猪丹毒的免疫监测及抗体保护效价的测定

用猪瘟、猪肺疫、猪丹毒三联疫苗和猪丹毒1a、2型氢氧化铝吸附甲醛灭活疫苗分别免疫断奶仔猪，采用Dot-PPA-ELISA监测免疫猪血清抗体变化。结果，弱毒疫苗免疫后第7d猪丹毒血清抗体效价开始升高，第2～3周达最高值；灭活疫苗免疫后第3～4周抗体效价达最高值，且灭活疫苗免疫猪的抗体水平明显高于三联疫苗免疫猪。免疫6周后，用C43004(1a型)、C43179(1b型)和C43-12(2型)3株不同血清型的猪丹毒混合强毒同时对不同抗体效价的免疫猪和对照猪进行了皮肤内接种攻毒，并根据其皮肤和体温反应确定1：32为猪能抵抗混合强毒攻击的抗体保护效价。经对44头50～60日龄未免疫的断奶仔猪血清检测，其抗体效价在1：32以下的猪占88．36％，278头免疫猪血清的抗体效价在1：32或以上的猪占92．81％。表明Dot-PPA-ELISA适用于猪群猪丹毒的免疫监测和免疫力测定。     

猪丹毒母源抗体的消减规律

仔猪猪丹毒母源抗体的高低直接影响猪丹毒菌苗的免疫效果。因此,掌握猪丹毒母源抗体在仔猪体内的消减规律是很有必要的。本试验在控制条件下,用猪丹毒弱毒菌苗同时免疫5头已孕母猪,待产仔后,定期测定仔猪体内的猪丹毒母源抗体凝集价,以掌握其消减规律。现将结果报道于下:     

猪丹毒减毒活菌苗和灭活吸附苗接种猪的体液免疫应答

为了检测猪丹毒菌苗接种猪的免疫力,许多学者应用各种血清学方法检测抗体,做了大量工作,其中生长凝集试验(GA)应用较为广泛,并证明GA效价与猪的免疫力有较强的相关性。Takuo(1979)用GA试验检测了“小金井”猪丹毒减毒活菌苗接种猪的抗体效价变化,初步证明免疫后15     

猪丹毒血清的快速效检試驗

一、通过猪丹毒杆菌有与鸡血球凝集的特性,笔者自100多个猪丹毒杆菌品系內找出了凝集作用良好的猪丹毒杆菌E、5601品系,并用来供制本試驗的抗原。二、本試驗用的抗猪丹毒免疫血清共有13个批号,并以健馬血清、抗出敗血清等四种血清作了对照試驗。試驗結果,各个抗丹毒免疫血清的凝集抑制价高低表現不一,有凝集抑制价甚低者,有高达1:384者。一般在有效期內的抗猪丹毒免疫血清,其凝集抑制价最高;失效或距失效期較久的血清則凝集抑制价逐漸减低。至健馬血清、抗禽畜出敗血清等非特异性血清均无凝集抑制現象。三、小白鼠作血清效力对照試驗說明:鸡血球凝集抑制价的高低与抗猪丹毒血清的免疫效力有直接的密切关系,經以13批抗猪丹毒血清几次重复試驗証明,无凝集抑制价的各类血清或者凝集抑制价低于1:192者的抗猪丹毒血清,对小白鼠的保护力亦差;若凝集抑制价能达1:384者,則血清效力佳良,并可符合国家頒布的效力标准要求合格适用。四、本报告內就猪丹毒免疫血清鸡血球凝集抑制試驗的操作方法以及在猪丹毒免疫血清生产上和血清效力鑑定上的实用价值,均經加以叙述与闡明。     

猪瘟免疫血清中和效检方法

应用血清与病毒中和法,可以检出猪瘟免疫猪与非免疫猪的区别。凡血清能中和猪瘟兔化毒(以下简称兔毒)的猪就有免疫能力,血清不能中和兔毒的猪就无免疫力。 1973年冬,我们对猪三联苗免疫猪要作猪瘟免疫期试验,为了摸索那些猪有良好的免疫能力,就采取免疫猪血清与乳兔干苗混     

使用猪三联苗的防疫效果观察及对猪瘟免疫期抗体效价测定

猪三联苗免疫51—60日龄断奶前仔猪对猪瘟免疫期试验,是用人工接种猪瘟强毒致病的猪与试验猪、对照猪一起同圈感染,其结果免疫51日龄仔猪经7.5个月100%保护;免疫60日龄仔猪经6个月75%保护;另一组免疫60日龄仔猪经9个月,感染观察22天均健活,用猪瘟毒1毫升肌注后,对照猪于15天死亡,免疫猪100%保护。免疫猪与对照猪在攻毒前采取血清,用中和反应测定猪瘟免疫抗体及其效价的结果,共测14头中有5头猪血清中无中和抗体,家兔体温呈现热反应(其中对照猪3头均死亡,另2头免疫猪死亡一头,感染发病耐过1头),另9头免疫猪血清有中和抗体,试验兔无体温反应,攻猪瘟毒后均健活。被检血清中和效价一般在4—32倍之间。免疫7.5个月组的猪中和效价个别达到128倍,免疫9个月组的猪也有达到64倍的。田间试验免疫15,225头,其中发生反应17头,占11/千,死亡3头,占2/万,留养观察6236头,发病率9.64%,死亡率1.59%,没有猪瘟、猪丹毒病的发生。     

猪圆环病毒病和猪繁殖与呼吸综合征二联灭活疫苗免疫效力

利用猪圆环病毒病(PCVD)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)二联灭活疫苗免疫4周龄仔猪,免疫后7、14、21、28d采血,测定免疫后血清中抗PRRSV、PCV中和抗体和ELISA抗体较价,并于免疫后28d分别用PRRSV和PCV2攻毒,攻毒后每日检测猪体温和观察临床症状,于攻毒后21d所有存活猪全部扑杀,分别对每头猪肺、肝、脾、淋巴结、心和血进行剖解病理和组织病理学观察及PRRSV和PCV2核酸检测,以确定该疫苗免疫保护率。结果表明,所有试验猪于免疫后7d血清抗体开始检出,28d达到峰值,免疫后28dPRRSV和PCV2攻毒保护率均为100%(5/5)。     

DOT—ELISA检测猪瘟免疫抗体的研究

本文成功地建立了Dot—ELISA(斑点酶联免疫吸附试验)检测猪瘟免疫抗体,经猪丹毒、猪巴氏杆菌高免血清对照及猪瘟强毒攻毒试验证实;Dot—ELISA检测猪瘟免疫抗体是特异的。Dot—ELISA、ELISA和兔体中和三种方法比较,Dot—ELISA法具有简便、快速、敏感性高,特异性强。用Dot—ELISA法检测115头免疫猪血清抗体,免疫抗体在效价1:2—1:128之间,1:32—1:64以上滴度占95％。猪瘟攻毒试验结果:免疫猪的猪瘟免疫抗体保持在1:32以上,均能抗过猪瘟强毒的攻击。     

高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗与灭活疫苗的免疫效果评估试验

在相同饲养条件下,对35日龄仔猪分别使用高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗与灭活疫苗进行免疫接种。在接种当天、接种后28d、58d分别检测高致病性猪蓝耳病免疫抗体水平。结果显示,使用弱毒疫苗免疫的试验猪,其高致病性猪蓝耳病抗体上升速度和抗体水平均优于使用灭活疫苗的试验猪。弱毒疫苗可在接种后21～28d产生免疫力,免疫期为4个月。猪繁殖与呼吸综合征流行地区应该首先考虑使用弱毒疫苗。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及三价灭活疫苗免疫效力分析

副猪嗜血杆菌是猪上呼吸道早期定植菌也是格拉泽病的病原体,给猪场带来较严重的经济损失。为了调查副猪嗜血杆菌血清型的流行情况,采用细菌分离培养、玻板凝集法及PCR方法,从广东、广西、山东、江苏、江西45个规模化猪场送检的疑似样品中共分离鉴定了34株副猪嗜血杆菌,其中6株(17. 65%)血清4型、9株(26. 47%)血清5型、8株(23. 53%)血清12型、4株(11. 76%)血清13型以及7株(20. 59%)未定型菌株。为了有效地防控副猪嗜血杆菌病的流行,以4、5、12血清型优势流行血清型制备3价灭活苗,用仔猪免疫/攻毒试验评价3价灭活疫苗免疫保护力。动物实验表明,该疫苗对副猪嗜血杆菌4型、5型和12型具有较好的免疫保护能力。     

新生仔猪哺乳前接种猪瘟和猪丹毒二联苗的免疫试验

新生仔猪哺乳前接种猪瘟免化弱毒疫苗,饲养5个月后,经中和抗体测定、石门系猪瘟强毒攻击及同居感染试验,均可获得较为满意的免疫效果。据此,我们曾试用猪丹毒弱毒菌苗及猪瘟和猪丹毒二联苗接种新生仔猪,间隔半小时、3小时分别令其吸吮初乳,饲养5个月,应用猪丹毒强毒攻击,结果其保护率分别为100％及60％。为进一步探明经猪瘟和猪丹毒二联苗免疫后试验猪的免疫期,特进行本试验。     

高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗与灭活苗免疫效果评估

相同饲养条件下的35日龄仔猪分别使用高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗与灭活苗进行首免,并分别在首免当日、首免后28 d、首免后58 d检测高致病性猪蓝耳病免疫抗体水平。结果发现,使用弱毒疫苗免疫的猪高致病性猪蓝耳病抗体上升速度和抗体水平均优于使用灭活苗免疫猪。试验结果表明,高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗可在接种后21-28 d产生免疫力,免疫期为4个月,猪繁殖与呼吸综合征流行的地区应首先考虑使用弱毒疫苗进行免疫。     

仔猪副伤寒血清抗体水平与其保护力的相关性研究

用已经建立的检测仔猪副伤寒血清抗体的Dot—PPA—ELISA，对不同仔猪副伤寒抗体水平试验组14头仔猪和对照组4头仔猪进行了血清抗体效价测定，并以沙门菌强毒攻击受试猪，测定血清抗体效价与保护力的关系。试验结果表明，以Dot—PPA—ELISA检测的仔猪副伤寒血清抗体几何平均效价不低于28^8.2时，85．7％的猪能够抵抗沙门菌强毒的攻击。试验初步确定以Dot—PPA—ELISA进行猪群免疫监测时，血清抗体的几何平均效价2^8.0。为仔猪副伤寒的保护临界标准，该标准的确定为集约化猪场用Dot—PPA—ELISA检测仔猪副伤寒血清抗体，进行仔猪副伤寒的诊断、免疫监测及流行病学调查提供了科学依据。     

猪肺炎支原体与猪支气管败血波氏杆菌在猪体液免疫和生长性能上的协同作用

试验选用10日龄成华×大约克杂交猪36头,随机分成四组(1、2、3、4),每组9头.其中1、2组用猪肺炎支原体全菌抗原免疫后再分别用猪肺炎支原体和猪支气管败血波氏杆菌进行攻毒,3、4组注射生理盐水作为对照,并与前两组同时分别用猪肺炎支原体和猪支气管败血波氏杆菌进行攻毒.采用间接ELISA、组织切片等方法对猪血清中的抗体水平、肺脏的病理变化及生长性能进行测定.试验表明:用猪肺炎支原体全菌抗原接种猪后,在血清中能检测到较高的抗体水平(25).猪肺炎支原体攻毒后2周,免疫猪和对照猪血清中猪肺炎支原体抗体的滴度分别为23.8与22.4(P＜0.05),且免疫猪的生长性能比对照猪好.在猪支气管败血波氏杆菌攻毒组,攻毒2周和4周后免疫猪血清中的猪支气管败血波氏杆菌抗体水平与对照猪相比分别提高了26.67%和30.00%(P＞0.05),6周后免疫猪和对照猪血清中的猪支气管败血波氏杆菌抗体分别为21.7和20.3(P＜0.05),且在攻毒后4～6周,免疫猪的生长性能有了显著的改善.组织切片显示,无论是用猪肺炎支原体攻毒还是用猪支气管败血波氏杆菌攻毒,免疫猪的肺脏病变程度都较对照猪轻.     

猪繁殖与呼吸综合征对塞内卡病毒灭活苗免疫效果的影响

为探究猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)对塞内卡病毒(SVA)灭活疫苗免疫效果的影响,对PRRS阳性猪和PRRS阴性猪分别免疫相同批次、相同剂量的SVA灭活苗,检测首次免疫后7 d、14 d、21 d、28 d血清中和抗体效价,并在免疫后28 d对所有试验猪进行攻毒保护试验。结果显示,所有PRRS阳性猪的SVA血清中和抗体效价均小于1∶4,而PRRS阴性猪SVA血清中和抗体效价在二免后上升到较高水平。攻毒保护结果与中和抗体效价结果呈正相关,PRRS阳性组0/5保护,而PRRS阴性组试验猪达到5/5保护。这一研究表明PRRS会使SVA灭活疫苗免疫效果下降,为SVA及PRRS疫苗的研发及猪场疾病的防控提供了参考。     

鸡抗大肠杆菌血清抗体和卵黄抗体变化规律研究

用猪源大肠杆菌四价(K88、K99、987P、F41)灭活疫苗免疫蛋鸡,微量凝集法定期检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体的效价。结果表明,血清抗体比卵黄抗体出现早,免疫蛋鸡血清中和卵黄中4种抗体的消长规律基本相似,但不同抗体水平之间存在明显的差异,整个试验期间血清抗体水平均比卵黄抗体水平高。     

猪繁殖与呼吸综合征高免血清的制备与临床治疗试验

为筛选免疫效价高的疫苗,获得高免血清并进行临床治疗观察。本试验选用3种猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫健康新西兰大白兔,免疫后分别采血和分离血清,并用猪蓝耳病毒抗体PPA-ELISA检测试剂盒检测血清抗体效价,筛选出抗体效价较高的两种疫苗;免疫猪,制得高免血清对自然发病仔猪进行高免血清治疗试验。免疫兔试验表明,猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(CH-lR株)免疫后血清抗体效价最低,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)血清(简称高致病疫苗血清)抗体效价比猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(CH-la株)血清(简称灭活疫苗血清)低,用后两种疫苗免疫猪,血清抗体效价均能达到1∶1280。自然发病仔猪高免血清治疗试验显示,注射高致病疫苗血清对蓝耳病的治愈率为88%,灭活疫苗血清治愈率为76%。结果表明高免血清是无菌、安全的,所得两种血清可用于临床防治猪蓝耳病。