西北农林科技大学学报(自然科学版)2008年第36卷总目次

●动物医学日本血吸虫新基因Sj314C10的表达及功能分析……………………………………………杨柳,于三科,冯新港,等(1):1-6猪链球菌9型荧光定量PCR检测方法的建立及应用……………………………………拜廷阳,杨增岐,吴志明,等(1):7-12卵清蛋白特异性免疫耐受的诱导及鉴定…………     

西北农林科技大学学报(自然科学版)2006年第34卷总目次

●动物科学与动物医学4~6周龄肉仔鸡日粮中苏氨酸的需要量…………………………………………………王红梅,陈玉林,刘国华,等(1):84-88雄激素对大鼠嗅球中AR和NGF蛋白表达的影响………………………………………田光明,范光丽,田海霞,等(1):89-92梅花鹿源BVDV NS2-3基因重要区的克隆与序列分析……………………………………温铁锋,郜玉钢,王树志,等(1):93-96甘肃棘豆中苦马豆素提取工艺改进初报…………………………………………………刘志滨,赵兴华,余永涛,等(1):97-99中国牦牛β-珠蛋白基因的克隆和序列分析……………………………………     

华中农业大学学报（自然科学版）第25卷 2006年总目次

生物技术SARS冠状病毒刺突蛋白S144-643的表达及免疫原性分析………………………………费小战卢海松郭红燕等(1)3个不同鸭种基因组DNA多态性的RAPD分析……………………………………………苏瑛刘楚吾叶昌辉等(6)弓形虫SAGⅠ基因的克隆与原核表达………………………………………     

《扬州大学学报(农业与生命科学版)》第28卷2007年总目次

第1期鸡白痢和肠炎沙门氏菌抑制差减文库的构建与分析[S 852]…………………………………………李求春,焦新安,徐耀辉,等(1)弯曲菌多重PCR检测方法的建立及其初步应用[S 852]………………………………………………何蕊,黄金林,许海燕,等(5)抗A型禽流感病毒核蛋白特异性单克隆抗体研究[S 855]……………………………………………李娜,秦爱建,邵红霞,等(9)伪狂犬病病毒gE囊膜糖蛋白主要抗原表位区基因的原核表达[Q 786]………………………………柴虹,范忠军,陈义平,等(13)重组大肠杆菌的高密度发酵放大工艺研究[Q 814]…………………………     

《新疆农业大学学报》2006年（第29卷）总目次

第1期鸡白介素18成熟肽基因原核表达及抗血清的制备………………………………………………张海玲,冉多良,刘培欣,等(1)绿洲—过渡带—荒漠气候特征日变化分析………………………………………………………范丽红,格丽玛,何清,等(5)7份新疆狗牙根材料品比试验………………………………………………马亚丽,阿不来提·阿不都热依木,李培英,等(10)基因枪介导外源基因转化棉花幼胚方法的研究…………………………………………………陈凌娜,曲延英,陈永坤,等(15)苜蓿叶象啮小蜂生物学特性的初步研究………………………………………………………………     

H9N2亚型禽流感病毒NS1基因的原核与真核表达

【目的】构建H9N2亚型禽流感病毒(AIV)NS1基因的原核和真核表达载体,将其分别在大肠杆菌和293细胞中进行表达,为进一步研究NS1蛋白的功能及其与宿主的相互作用,以及鉴定禽流感疫苗免疫禽和野毒感染禽ELISA诊断试剂盒的制备提供理论依据。【方法】用RT-PCR方法扩增H9N2亚型AIV的NS1基因,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中构建NS1基因的原核重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达;同时,将NS1基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建NS1基因真核重组质粒,将其瞬时转染293细胞,48h后收集感染细胞,对大肠杆菌表达产物和293细胞表达产物进行Western-blotting分析。【结果】成功构建了NS1基因的原核表达载体pET-32a-NS1和真核表达载体pEGFP-C1-NS1。Western-blotting结果表明,大肠杆菌和293细胞的表达产物均能检测到特异性条带(大肠杆菌的表达产物在约44ku处出现阳性条带,293细胞表达产物在约55ku处出现特异条带)。【结论】NS1基因在大肠杆菌和293细胞中得到成功表达,获得的NS1蛋白具有良好的抗原活性。     

华中农业大学学报（自然科学版）第26卷2007年总目次

生物技术细胞因子Daintain/AIF-1的纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定…………………………赵燕英王建和付康等(1)猫血管紧张素转换酶2的三维结构模拟与真核表达………………………………………郭红燕王冲郭爱珍等(6)小叶锦鸡儿根瘤菌的分离及其16S rDNAPCR-RFLP分析………………………………严雪瑞陈文峰陈文新等(141)大麦β-1,3-葡聚糖酶基因启动子PGⅢ的激发子诱导元件分析…………………………李云锋曹燕纪春艳等(147)广州地区SCMV玉米分离物外壳蛋白基因的序列分析及其引致的生理病变…………陈晓琴伦璇周凌云等(151)一个烟草葡…     

抗猪瘟病毒E2蛋白单抗9A4H4的鉴定

为鉴定抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体9A4H4与不同猪瘟病毒(CSFV)株的反应性,将其与猪瘟病毒石门株、猪瘟兔化弱毒疫苗株和前期分离获得的106株猪瘟流行毒株进行IFA验证。在此基础上,利用昆虫杆状病毒系统表达的基因1型、2型和3型代表性毒株的E2蛋白进行了Western blot验证。试验还利用含有或不含β-巯基乙醇的SDS上样缓冲液对真核表达和原核表达的石门株E2蛋白进行处理,并与单抗9A4H4进行反应,初步鉴定了该单抗所识别抗原表位的类型,并利用石门株进行中和试验验证该抗体对CSFV的中和能力。间接免疫荧光试验结果表明:单抗9A4H4能与石门株、猪瘟兔化弱毒疫苗株、基因1型以及大多数的基因2.1b亚亚型、2.2、2.3基因亚型的毒株反应,与绝大多数的2.1a、2.1c、2.1g和2.1h基因亚亚型的毒株不反应,该结果与单抗和病毒E2蛋白的反应结果完全一致。Western blot结果表明:单抗9A4H4只与真核表达的非还原型石门株E2蛋白反应,与真核表达的还原型E2蛋白以及原核表达的石门E2蛋白不反应,表明该抗体识别的抗原表位为构象表位。中和试验结果表明,单抗9A4H4对CSFV石门株没有中和能力。     

牛病毒性腹泻病毒Npro蛋白的原核表达及裂解效率

为了研究牛病毒性腹泻病毒N~(pro)蛋白的催化切割效率,首先扩增GSTZ毒株的N~(pro)基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)上,使其在表达菌E.coli BL21 (DE 3)中表达,确定正确的N~(pro)基因碱基序列,然后构建含有切割位点的pET-28a-N~(pro)-GFP重组融合质粒,在原核表达系统中研究N~(pro)蛋白的切割效率。结果显示,GSTZ毒株的N~(pro)蛋白成功地在原核表达系统中表达,重组融合蛋白质N~(pro)-GFP在原核表达系统中的切割效率约为60.28%。     

对不同表达系统的猪圆环病毒2型Rep蛋白的电泳特性分析

利用特异性引物从圆环病毒2型(PCV2)毒株克隆出Rep基因,并将其插入到原核表达载体pET28 a和杆状病毒转移载体pFastbacHT(B)上,利用大肠杆菌BL21(DE3)株原核系统以及Bac-to-Bac杆状病毒系统表达Rep蛋白.Western-blotting表明,原核和真核表达系统均能表达出圆环病毒2型Rep蛋白,电泳分析表明,不同系统表达得到的Rep蛋白有不同的电泳特性,揭示Rep蛋白存在翻译后修饰.     

新疆加工番茄上南方番茄病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达

【目的】克隆南方番茄病毒(STV)的外壳蛋白(CP)基因,构建其原核表达载体并进行诱导表达,为制备检测该病毒的高效价血清提供参考。【方法】利用一步法RT-PCR从新疆加工番茄上克隆STVCP基因,将其连接到原核表达载体pET-28a(+)上,获得重组质粒pET-28a-STV CP。将重组质粒转化大肠杆菌BL21后用IPTG进行诱导表达。【结果】成功克隆了STVCP基因,其长度为1 134bp。构建了原核重组表达质粒pET-28a-STV CP,其在1mmol/L IPTG诱导下,成功表达出分子质量约47ku的蛋白。【结论】成功克隆了STV CP基因,并诱导了pET-28a-STV CP重组蛋白的原核表达。     

O型口蹄疫病毒VP1基因及其多表位基因的原核表达与纯化鉴定

[目的]通过原核表达并纯化获得O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因及其多表位基因的重组蛋白,为建立O型FMDV抗体ELISA检测试剂盒及制备动物高免血清提供技术支持.[方法]以O型FMDV VP1全基因重组质粒pMD18-T-T-VP1及串联的ⅥP1多表位基因重组质粒pMD 18-T-O-VP1为模板,通过特异性引物扩增并回收目的基因,构建重组质粒pET-32a-VP1和pGEX-6p-1-VP1,然后转入大肠杆菌BL211 (DE3)中诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行分析鉴定.[结果]O型FMDV的VP1基因及其多表位基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到正确表达,表达的两种融合蛋白主要以包涵体形式存在,纯度较高,且均能与猪抗O型FMDV阳性血清发生特异性结合,具有良好的反应原性.[结论]表达获得的融合蛋白具有良好的反应原性,可作为包被抗原应用于O型FMDV抗体检测试剂盒研发.     

《浙江农业学报》第19卷（2007）总目次

第1期鸭Ⅰ型禽副粘病毒YH99V株F基因的克隆和序列分析………………………………………………………………………云涛等(1)猪传染性胸膜肺炎放线杆菌APXⅡ基因特异片段的克隆和表达…………………………………………………………袁秀芳等(6)七省茶园假眼小绿叶蝉的RAPD分析及其亲缘关系探讨……………………………………………………………………付建玉等(11)日粮抗生素影响断奶仔猪肠道结构的机理研究………………………………………………………………………………卢建军等(15)铜、镉单一及复合污染对蚯蚓的急性毒性效应…………………     

Asia1型口蹄疫病毒P1基因的原核表达及其抗血清的制备

[目的]研究Asial型口蹄疫病毒P1基因原核表达及其抗血清的制备。[方法]利用基因克隆技术获得Asia1型口蹄疫病毒（FMDV）的P1基因,然后将P1基因重组到pET-32a（＋）质粒中;转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导及蛋白纯化后,进行SDS-PAGE;将重组菌BL21培养物用超声波裂解,对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备P1蛋白抗血清。[结果]获得了重组性阳性克隆;SDS-PAGE结果表明在105kD处出现了目的条带;Western-blot分析表明,抗血清可与原核表达的P1蛋白特异性结合,ELISA方法检测抗血清的效价可达到1∶5120。[结论]该研究结果为建立FMDV的血清学诊断方法及其基因工程疫苗的研究奠定了基础。     

Asia1型口蹄疫病毒P1基因的原核表达及其抗血清的制备

[目的]研究Asial型口蹄疫病毒P1基因原核表达及其抗血清的制备。[方法]利用基因克隆技术获得Asia1型口蹄疫病毒（FM-DV）的P1基因,然后将P1基因重组到pET-32a（＋）质粒中;转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导及蛋白纯化后,进行SDS-PAGE分析;将重组菌BL21培养物用超声波裂解,对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备P1蛋白抗血清。[结果]获得了重组性阳性克隆;SDS-PAGE结果表明在105 kD处出现了目的条带;Western-blot分析表明,抗血清可与原核表达的P1蛋白特异性结合,ELISA方法检测抗血清的效价可达到1∶5 120,[结论]为建立FMDV的血清学诊断方法及其基因工程疫苗的研究奠定了基础。     

转基因动物技术在畜牧生产上的应用

转基因动物技术应用于畜牧生产 ,在改良动物生产性状、提高畜禽抗病力以及生产人药用蛋白等非常规畜牧产品方面 ,已显示出广阔的应用前景。1　转基因动物技术概述使动物组织能够特异表达外源蛋白质 ,需要人为地将编码这种蛋白质的基因转移到动物的胚胎中 ,使目的基因能够整合到动物染色体上 ,进而得到表达。目前 ,在转基因上主要有 4类 :A参与编码和调节机体组织生长发育的基因。例如 :促生长基因方面的研究有导入生长激素 (GH)基因 ,胰岛素样生长因子 (IGF - 1)和人生长激素释放因子 ;B与动物生产力密切相关的经济性状的主效基因。例如 …     

菜豆荚斑驳病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达

[目的]克隆菜豆荚斑驳病毒(BPMV)外壳蛋白(CP)基因,并对其进行原核表达。[方法]利用RT-PCR方法克隆BPMV CP基因,将其连接至pMD19-T Simple载体后对阳性克隆进行测序,检测其与已知病毒外壳蛋白基因序列的同源性;将CP基因定向插入双酶切的pET30a,构建其原核表达载体并转化大肠杆菌BL-21表达重组蛋白。[结果]试验克隆得到的CP基因大小为1 122 bp,与NCBI中目标基因的相似度达99%以上;试验成功构建了原核表达载体pET30a-BPMV CP,发现重组蛋白在37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导4 h条件下表达量最高。[结论]该研究为BPMV抗血清的制备与液相芯片检测方法的建立奠定了基础。     

《中国农业大学学报》第13卷（2008年）总目次

“211工程”成果总结以生物防治为主的蝗灾可持续治理新对策及其配套技术体系……………………………………………张龙严毓骅(3):1中国虫齿目昆虫分类研究…………………………………………………………………李法圣李志红彩万志杨定(3):7博士后专栏人、牛和羊叠朊基因的表达及     

禽流感病毒PA基因的原核表达载体的构建及鉴定

以重组质粒pcDNA-PA为模板扩增PA全基因,并构建原核表达载体pGEX-6p-1-PA。根据GenBank公开发表的禽流感病毒PA基因的序列设计引物,用PCR方法从重组质粒pcDNA-PA中扩增禽流感病毒的PA基因,将该基因定向插入到原核表达载体pGEX-6p-1中,然后将连接产物转化宿主菌DH5α,挑取阳性克隆进行PCR和BamHⅠ、NotⅠ双酶切鉴定并测序。测序结果表明,禽流感病毒PA基因全长2151 bp,编码717个氨基酸,原核表达载体pGEX-6p-1-PA已构建成功。从而为禽流感蛋白PA的表达及其多克隆抗体的制备奠定了基础。