醋酸铅对妊娠小鼠雄性后代生殖毒性的研究

将妊娠母鼠随机分为高剂量(1／10LD50)、中剂量(1／50 LD50)、低剂量(1／250LD50)和溶剂对照组。高、中、低剂量染毒组和对照组母鼠分别于妊娠的9,11,13,15 d和17 d腹腔注射1.2,0.24,0.048 g／L的醋酸铅[Pb(CH3COO)2·3H20]溶液和灭茼蒸馏水0.01 mL／g。研究醋酸铅对妊娠小鼠雄性后代的生长发育和生殖能力的影响。试验结果表明:①高剂量染毒母鼠带仔行为受到醋酸铅的显著影响;②各试验组后代公鼠体重增长变化无统计学差异(P>0.05);③各试验组公鼠的睾丸、附睾湿重及其与体重的比值均无明显差异(P>0.05);④各染毒组后代公鼠精子相对密度显著低于对照组(P<0.01);⑤各染毒组后代公鼠精子活力与对照组之间无统计学差异(P>0.05);⑥高剂量和中剂量组后代公鼠精子畸形比率显著高于对照组(P<0.05),低剂量组则与对照组无统计学差异(P>0.05);⑦备染毒组后代公鼠精子顶体形态异常率与对照组之间无统计学差异(P>0.05)。     

醋酸铅对母鼠生殖与胚胎发育影响

将420只体质量为(15.32±2.01)g的雌性昆明系小鼠随机分为5个处理组和1个对照组,每组设7个重复,每个重复10只。各处理组分别腹腔按体质量注射10、15、20、25、30mg/kg的醋酸铅溶液,对照组注射等体积的灭菌生理盐水,每隔2d注射并称重1次,共注射10次,期间记录小鼠体质量及临床表现。当小鼠体质量达到25g以上时,分批对各试验组和对照组进行超排处理,腹腔注射10IU马绒毛膜促性腺激素(PMSG),47h后注射10IU人绒毛膜促性腺激素(hCG),并与公鼠合笼。合笼后87~96h内颈椎脱臼处死小鼠,观察卵巢、子宫形态,并统计胚胎数,同时制作卵巢、子宫石蜡切片,观察其病理组织学变化,研究醋酸铅对雌性小鼠卵巢、子宫组织结构及早期胚胎发育的影响。结果显示:(1)当醋酸铅染毒剂量≥20mg/kg时,可明显抑制小鼠体质量的增长,随着染毒剂量的增加,作用时间的延长,小鼠体质量增加明显趋缓,与对照组相比,差异显著或极显著(P0.05,P0.01);(2)染铅组母鼠早期胚胎发育受到显著影响,主要表现为回收胚胎总数以及受精卵发育到桑椹胚和囊胚的总数均显著低于对照组(P0.05),而各染铅组退化胚、延迟胚数和未受精卵总数显著高于对照组(P0.05);(3)染铅组卵巢中的初级卵泡、次级卵泡、成熟卵泡数量明显低于对照组,而原始卵泡、闭锁卵泡数量明显高于对照组。(4)染铅组小鼠卵巢和子宫形态发生明显畸形,当醋酸铅染毒剂量≥20mg/kg时,与对照组相比,差异显著或极显著(P0.05,P0.01)。且上述变化均呈明显的剂量一时间效应。研究结果表明,当醋酸铅暴露剂量≥20mg/kg时,可对小鼠生长发育具有明显抑制作用,同时使母鼠生殖器官卵巢和子宫的结构造成严重损害,并影响其生殖功能与早期胚胎发育。     

醋酸铅对雌性小鼠生长发育及主要内脏器官的影响

将420只体质量为(20.23±1.88)g的雌性昆明系小鼠随机分成5个处理组和1个对照组,每组设7个重复,每个重复10只。各处理组分别腹腔按体质量注射10、15、20、25、30mg/kg的醋酸铅溶液,对照组注射等体积的灭菌生理盐水,每隔2d注射并称重1次,共注射10次,期间记录小鼠体质量及临床表现。染毒结束后,脱颈椎处死小鼠,取出心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织,称湿重;观察形,制作石蜡切片,观察其病理组织学变化。结果显示,(1)铅可明显影响小鼠体质量增长,且体质量随着染毒剂量的增加和时间的延长而明显降低,与对照组相比,差异显著或极显著(P0.05或P0.01);(2)与对照组相比,各染毒组小鼠脏器系数变化依次为肾、脾肝、肺心,且呈明显的剂量-时间效应关系;(3)铅暴露可引起小鼠心、肝、脾、肺、肾各脏器发生不同程度的损伤,小鼠肾脏、脾脏受损最为严重,其次为肝脏,再次为心脏,肺脏影响最轻,且损害的程度与铅染毒剂量和时间呈剂量-时间效应关系。结果表明,当醋酸铅暴露剂量≥20mg/kg时,对小鼠生长发育具有明显抑制作用;长期低铅染毒即可导致机体各组织器官发生广泛性病理损伤,且损伤的程度与染毒剂量呈现明显的剂量-时间效应关系。     

敖汉苜蓿授粉受精及胚胎发育过程的研究

对敖汉苜蓿的扔粉受精、花粉萌发以及胚胎发育过程进行了研究。结果表明,敖汉苜蓿在人工授粉１０ｍｉｎ后花粉粒的内壁穿地外壁的萌发孔向外突出,２０ｍｉｎ时形成花粉管,１ｈ后花粉管触及柱头,而后沿花柱道伸长。２４～２７ｈ到达子房开始受精;经过受精作用胚细胞开始分裂分化,到第２２ｄ便形成了具有胚根、胚轴、胚芽和子叶的完整胚。胚的整个形成过程可分为三个阶段：球状胚形成期、子叶形成期、胚各部分发育成熟期。     

敖汉苜蓿授粉受精及胚胎发育过程的研究

对敖汉苜蓿的授粉受精、花粉萌发以及胚胎发育过程进行了研究.结果表明,敖汉苜蓿在人工授粉10min后花粉粒的内壁穿过外壁的萌发孔向外突出,20min时形成花粉管,1h后花粉管触及柱头,而后沿花柱道伸长.24～27h到达子房开始受精;经过受精作用胚细胞开始分裂分化,到第22d便形成了具有胚根、胚轴、胚芽和子叶的完整胚.胚的整个形成过程可分为三个阶段:球状胚形成期、子叶形成期、胚各部分发育成熟期.     

醋酸铅对小鼠卵巢组织结构和卵巢颗粒细胞凋亡的影响

将40只20日龄雌性昆明系小鼠随机分成3个处理组和1个对照组,每组10只。给3个处理组小鼠分别连续2d腹腔按体质量注射醋酸铅10,20,40mg/kg,对照组小鼠注射等体积的生理盐水。于注射后24,72h分离卵巢,用原位末端标记法(TUNEL)测定卵巢颗粒细胞的凋亡率,研究卵巢组织结构及卵巢颗粒细胞凋亡的变化。结果显示,醋酸铅可使小鼠卵巢组织结构发生病变,加速卵巢颗粒细胞的凋亡,且凋亡率随着攻毒剂量的增加和时间的延长而升高,与对照组相比,差异极显著(P0.01);表明醋酸铅对小鼠卵巢具有毒性作用,可诱导卵巢颗粒细胞发生凋亡,并呈现一定的剂量-时间依赖关系。     

铅对昆明小鼠肾脏毒性的病理学观察

采用醋酸铅灌胃于成年昆明小鼠,观察铅致小鼠肾脏的病理形态变化。取小鼠分为4组,分别为醋酸铅高、中、低剂量组(40、20、10mg/kg)、生理盐水阴性对照组,经口灌胃每天定时定量连续给药40d。取小鼠肾脏经甲醛固定,常规石蜡包埋切片,HE染色,显微镜下观察小鼠肾脏的组织形态。结果表明,各试验组肾皮质部小管上皮细胞肿胀,胞质疏松,染色浅,空泡变性,发生广泛性颗粒变性,部分肾小管上皮细胞嗜酸性坏死;高剂量组肾皮质部肾小管周围大量淋巴细胞浸润,肾小管上皮细胞表现明显的颗粒变性和嗜酸性坏死,肾小球体积萎缩,结构破坏,出现局灶性硬化;部分肾小管管腔内可见嗜酸性凝固物,肾小球毛细血管扩张充血;中剂量组病变相对较轻;而低剂量组无明显形态学异常。结果提示铅对小鼠肾脏有毒性作用,且随剂量增加损伤加重。     

小鼠体外受精及胚胎发育的影响因素

为了完善小鼠体外受精和胚胎的体外培养系统 ,以 M16为基础培养液 ,探讨了葡萄糖、磷酸盐、EDTA、谷氨酰胺及β-巯基乙醇等对小鼠体外受精和胚胎体外培养的影响。结果表明 ,在 M16液中添加 EDTA和 L -谷氨酰胺(m M16液 ) ,小鼠的体外受精率由 2 6 %提高到 5 1%;当在 m M16液中去掉磷酸盐 ,或添加 Hepes,或添加 β-巯基乙醇 ,体外受精率由 5 1%增至 6 2 %～ 74%;m M16液中添加 Hepes,或去掉磷酸盐 ,可阻碍胚胎的体外发育 ,囊胚的扩张率由 80 %降至 49%和 5 8%,而在无糖 m M16液中添加 β-巯基乙醇 ,可显著地提高扩张囊胚率 (91%)。以上结果表明 ,M16液中添加 EDTA、谷氨酰胺和 β-巯基乙醇后 ,适用于小鼠体外受精 ;同时去掉葡萄糖后 ,则适用于 2细胞胚的体外培养。     

长途运输应激对孕中期小鼠胚胎发育的影响

为研究运输应激对胚胎发育的影响机制,采用普通公路运输建立小鼠运输应激模型(1 000 km,15 h)。将27只孕中期(怀孕8～10 d)的小鼠随机分为对照组(13只)和应激组(14只),分析运输应激对胎儿发育的影响;之后2组小鼠随机挑选各3只,采用agilent小鼠全基因组表达谱芯片筛选长途运输应激小鼠垂体和子宫中的差异表达基因。选取6个差异表达基因,应用实时荧光定量PCR技术验证芯片结果的可靠性。结果表明:与对照组相比,长途运输导致活胎率下降和死胎率增加(P<0.05);在孕中期垂体中筛选到138个基因差异表达,其中71个基因表达显著上调,67个基因表达显著下调;在孕中期子宫中筛选到392个基因差异表达,其中73个基因表达显著上调,319个基因表达显著下调。对差异显著基因进行IPA分析发现,主要通路和生物功能涉及免疫和炎性疾病、细胞的生长、增殖和细胞间的相互作用、机能失调等;实时荧光定量PCR对akap3、Angptl4、Cartpt、insl6、thy1进行验证结果与芯片结果的表达趋势一致。     

葡萄糖在牛体外受精及胚胎发育中的影响

在牛精子获能液中添加不同浓度的葡萄糖,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育进行研究,通过观察顶体反应、超激活、活率和早期胚胎发育率,筛选出获能液中最适葡萄糖浓度及其有利于牛早期胚胎发育的最佳浓度.结果表明:葡萄糖是精子获能和维持超激活运动的主要能源物质,其代谢过程中产生的活性氧在牛精子体外获能、受精过程中起重要作用,高浓度(超过9.15 mM)葡萄糖有利于获能的完成;但是对早期胚胎发育不利,对早期胚胎发育来说其最适添加量为6.10 mM,此时的囊胚率最高.     

牛体外受精的精子获能方法对受精率和胚胎发育的影响

从屠宰场获得牛卵巢,采取卵母细胞,成熟培养用ＴＣＭ１９９＋犊牛血清;精子获能处理,以ＢＯ液＋肝素钠为基础,三个试验组分别添加咖啡因、蔡碱和已酮可可碱,受精经分别为８１．３％、８３．３％、８８．９％,均显著高于对照组（Ｐ〈０．０１）,三个试验组的囊胚率分别为２０．４％、１９．３％、２１．２％。试验得出以下结论：囊胚率与受经成正比,添加已酮可要碱效果最好。另外组内种公牛成绩也有差异。     

铅对哺乳期雄性小鼠睾丸损伤的研究

为研究哺乳期染铅小鼠雄性生殖系统的发育状况,通过饮水染铅法,给小鼠不同剂量的醋酸铅(100,300 mg/L和500 mg/L),记录睾丸脏器指标,并采用石墨炉原子吸收光谱法测定血铅水平。结果显示,染铅组小鼠血铅含量均高于对照组,其中300 mg/L和500 mg/L染铅组小鼠血铅水平显著高于对照组。各染铅组小鼠睾丸重量显著低于对照组。说明铅易被机体吸收,并且对生殖系统早期发育有毒性作用。     

牛体外受精早期胚胎与小鼠胎仔成纤维细胞共培养的研究

探讨了人工合成培养液ＣＲ１ａａ和小鼠胎仔成纤维细胞对牛体外受精早期胚胎体外发育的影响。结果表明，牛体外受精卵在ＣＲ１ａａ液中的卵裂率达７６．２％，８细胞胚的比率达４４．８％。小鼠胎仔成纤维细胞能够显著促进牛体外受精的早期囊胚以上胚胎的发育。牛体外受精后第５、６天的早期胚胎分别与小鼠胎仔成纤维细胞共培养，在受精后第７天发育至囊胚以上的比率分别达１９．８％和２４．６％；受精后第８天，孵化的囊胚比例分别达５．２％和７．５％。实验表明，受精后第５、６天的牛体外受精早期胚胎与小鼠胎仔成纤维细胞共培养，可显著提高扩张囊胚和孵化囊胚数量。小鼠成纤维细胞对胚胎发育的支持作用取决于胚胎发育阶段     

非人灵长类动物体外受精与胚胎移植的研究进展

简要介绍了非人灵长类动物体外受精与胚胎移植的内容、方法和步骤,影响其体外受精的主要因素,以及对未来非人灵长类动物的研究方向。     

铁与维生素A水平对小鼠胚胎存活的影响

试验探讨了铁与维生素A水平对小鼠胚胎存活的影响。选取21日龄昆明种小鼠,饲喂商品日粮2周,随后采用试验饲粮饲喂第11周时,进行交配。此后选有阴栓的小鼠随机分为1个对照组和9个处理组(采用2因素3水平完全随试验设计,铁添加水平为3.5、35、175mg/kg,维生素A水平为400、4000、20000IU/kg),每组分3个重复,每个重复6只。结果表明:妊娠3、6、18d,与对照组相比,35mg/kgFe+4000IU/kg维生素A组胚胎存活率分别提高了25.6%(P<0.05)、9.2%(P<0.05)、46.6%(P<0.05)。适量的铁和维生素A水平有利于胚胎的发育,高铁会降低胚胎的存活率。铁与维生素A对胚胎的存活率的影响存在互作效应(P<0.05)。     

芝麻素对小鼠早期胚胎体外发育的影响

本试验旨研究在体外培养（in vitro culture,IVC）中添加芝麻素（sesamin,SES）对小鼠早期胚胎体外发育的影响。采集6周龄雌性昆明小鼠受精卵,随机分为对照组和不同浓度（10、50、100 μmol/L）SES组。采用Fluorescein-dUTP和Hoechst 33342免疫荧光染色分别检测囊胚内细胞凋亡率和总细胞数;采用DCFH-DA检测早期胚胎内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;采用CMF₂HC检测早期胚胎内谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平;采用JC-1检测早期胚胎线粒体膜电位强度。结果显示,不同浓度SES组分裂率和囊胚率较对照组均有提高,但无显著差异（P>0.05）;50 μmol/L SES组细胞数较对照组显著提高（P<0.05）,细胞凋亡率较对照组显著降低（P<0.05）;与对照组相比,50 μmol/L SES组ROS水平显著降低（P<0.05）,GSH水平和线粒体膜电位水平显著提高（P<0.05）。结果表明,在IVC中添加SES可提高囊胚内细胞数、减少细胞凋亡率,降低细胞内ROS水平,提高细胞内GSH水平,改善早期胚胎线粒体功能,减少胚胎氧化应激的损伤,提高小鼠早期胚胎发育质量。     

单诺沙星对昆明种小白鼠的亚急性毒性研究

以昆明种小白鼠为实验研究，进行了单诺沙星的亚急性毒性研究。小白鼠分为4组，1－3组为试验组，分别以20，50，100mg/kg体重单诺沙星溶于饮水中连续给药一个月，第4组为对照组。实验期间定期称量小白鼠在给药期内的体重和采食量，计算食饵效率，并在给药半个月和一个月时分两次检查各组小白鼠的器官系数与器官含水量、血常规、肝肾功能指标GPT、GOT、AKP、Cr、BUN以及心、肝、脾、肺、肾、脑的病理组织学变化。实验结果表明：高剂量组小白鼠表现的毒性反应较轻，且这种毒性反应没有随时间的延长而加剧。中、低剂量组小白鼠没有出现明显的毒性反应。表明单诺沙星的毒性较低。     

In vitro Fertilization of Bovine Oocytes Exposed to Bovine Herpesvirus 1 (BHV-1)

Contents: Cumulus-oocyte complexes were matured for 24 hours in the presence or absence of bovine herpes virus-1 (BHV-1, 10⁶ TCID₅₀/ml), fertilized in vitro and then co-cultured on oviductal cells to the blastocyst stage. The percentages of oocytes which cleaved were 48% (n = 905) for oocytes matured in the presence of BHV-1, and 51% (n = 1004) for the control oocytes. Comparing BHV-1-treated to control, the percentages of cleaved oocytes which developed to the blastocyst stage were 29% and 31%, respectively (p > 0.05). Embryos produced from the experimental group of oocytes tested positive for BHV-1.