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黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶性质鉴定 总被引:8,自引:3,他引:8
对黄海黄杆菌YS-9412-130菌株产低温碱性蛋白酶的理化性质研究表明,该酶由256个氨基酸组成,分子量为33000Dar,等电点pI为9.45,米氏常数Km为5×10-3mmol/L;酶的最适作用pH范围为9.5~10.5,最适作用温度30℃,具有一定的抗氧化稳定性。Ca2+、Mn2对酶有激活作用,而Hg2+、Ag+对酶有抑制作用。DFP、NBS严重抑制酶的活性,而同时该酶也能被EDTA抑制。结果表明该低温碱性蛋白酶为一新型的丝氨酸蛋白酶。 相似文献
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产低温碱性蛋白酶黄海黄杆菌YS-9412-130高产菌株的选育 总被引:6,自引:0,他引:6
以黄海黄杆菌YS-9412-130菌株为出发株,经亚硝基胍、硫酸二乙酯、紫外线(UV)与微波(MI)复合诱变和自然选育,获得1株产低温碱性蛋白酶高产稳定的突变株YS-9412-130-SW1-104,其产低温碱性蛋白酶为出发株的16倍。在摇瓶发酵培养条件下,酶活力达2320U/ml(20℃测定),该诱变株具有Ref^r、Str^r、Amp^r和Met^-、Lys^-标记。突变株与出发菌株在细胞形态上比较,结果表明二者没有显著差异。 相似文献
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黄海黄杆菌YS-9412-130产酶发酵条件的优化 总被引:4,自引:0,他引:4
以产低温碱性蛋白酶的黄海黄杆菌YS-9412-130突变株SW2-104为培养菌株,进行碳源、氮源、无机盐、起始pH值、培养时间、接种量和接种龄等发酵条件的优化实验。实验结果证明,在以1%葡萄糖为碳源,以3.5%豆饼粉为氮源,无机盐:0.4%Na2HPO4、0.03%KH2PO4、0.02%MgSO4、0.1%Na2CO3、0.2?Cl2,起始pH值7.0,接种12h种龄的种子4%,20℃、250r/min的条件下在旋转摇床中培养36h,菌株产酶活性最高。 相似文献
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以海洋低温蛋白酶生产菌株YS-9412-130为研究对象,从传代、菌龄、溶菌酶浓度与酶解时间、甘氨酸与EDTA预处理以及稳定剂对该菌原生质体形成与再生的影响进行研究。结果表明,在相同条件下,第一代菌至第五代菌原生质体的形成率分别为86.9%、70.3%、66.8%、63.4%、60.2%,再生率分别为10.5%、18.6%、17.9%、18.2%、17.8%;取该菌对数生长前期、对数生长中后期、稳定期部分菌液制备原生质体,原生质体的形成率分别为72.1%、70.4%、60.5%,再生率为13.4%、18.9%、10.4%;溶菌酶浓度为2.5mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL,酶解60min,原生质体的形成率分别为40.6%、70.8%、81.8%、95.6%,原生质体的再生率为19.0%、19.2%、19.0%、10.6%;使用10mg/mL溶菌酶酶解YS-9412-130菌30min、60min、90min、120min,原生质体的形成率分别为30.8%、81.3%、81.7%、82.9%,原生质体的再生率分别为19.2%、19.3%、16.9%、11.2%;在细菌培养液中添加终质量浓度为5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL和40mg/mL的甘氨酸,培养该菌16h后制备原生质体,原生质体的形成率分别为81.0%、81.1%、90.3%、90.8%、90.6%,再生率为19.1%、19.0%、19.3%、12.0%、9.0%;EDTA对原生质体的形成稍有促进作用,但作用超过30min会影响原生质体的再生;分别以0.6mol/L Kcl、0.3mol/L KCl+0.3mol/L蔗糖、0.6mol/L蔗糖作为稳定剂,原生质体的再生率分别为10.9%、19.6%、25.9%。结论认为,YS-9412-130原生质体制备的最佳条件为选用第2代YS-9412-130菌,在培养基中添加终质度浓度为10mg/mL的甘氨酸培养16h后,再将菌体置于含有0.05mol/LEDTA的高渗溶液中30℃预处理30min,用10mg/mL溶菌酶,30℃酶解60min,再用0.6mol/L蔗糖作为原生质体再生培养稳定剂,比较适合于YS-9412-130原生质体的制备与再生。这一试验结果将为通过原生质体技术对YS-9412-130菌进行遗传改良提供重要参数。 相似文献